一种稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。以稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼为原料，在溶剂存在作用下，得到稳定同位素标记苯甲醛与对甲苯磺酰肼缩合的中间体，在无机碱和催化剂作用下，与邻苯二甲酰亚胺反应，并最后经盖布瑞尔胺合成法一锅法得到稳定同位素标记的苄胺，然后与6‑氯嘌呤经亲核取代反应，纯化，得到稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤纯品。合成所需原料、中间体简单易得，目标产物稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤化学纯度可达98％以上，同位素丰度可达99％以上，能满足液相色谱串联质谱法所需内标试剂的技术要求。目前全球尚未发现有该结构稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤的制备文献，研制稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤对食品安全监管检测工作有重要意义。

Preparation of a stable isotope labeled 6-benzyladenine internal standard reagent

The invention relates to a preparation method of stable isotope labeled 6 -benzyladenine internal standard reagent for food safety detection, which belongs to the research and development field of reference materials for food safety detection. Using stable isotope labelled benzaldehyde and p-toluene sulfonyl hydrazide as raw materials, the intermediate of condensation of stable isotope labelled benzaldehyde and p-toluene sulfonyl hydrazide was obtained in the presence of solvent. Under the action of inorganic base and catalyst, it reacted with phthalimide. Finally, stable isotope labelled benzylamine was obtained by one-pot synthesis of Gabriel amine, and then via 6 chloropurine. The stable isotope labeled 6 -benzyladenine was obtained by nucleophilic substitution reaction and purification. The raw materials and intermediates needed for synthesis are simple and easy to obtain. The chemical purity and isotope abundance of the target product stable isotope labeling 6 -benzyladenine can reach more than 98% and 99%, which can meet the technical requirements of internal standard reagents for liquid chromatography-tandem mass spectrometry. At present, no literature on the preparation of the stable isotope label 6 -benzyladenine has been found in the world. The development of the stable isotope label 6 -benzyladenine is of great significance for food safety supervision and detection.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法
本专利技术涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。
技术介绍
6-苄基腺嘌呤(6-Benzyladenine，CASNo.：1214-39-7)，是第一个人工合成的细胞分裂素，主要用于促进细胞分裂、细胞增大、种子发芽和果实生长等，我国曾经允许在豆芽生产上的应用，俗称的“无根粉”其主要成分就是6-苄基腺嘌呤。6-苄基腺嘌呤作为植物生长调节剂，其安全性目前没有结论，并且缺乏食品添加剂工艺必要性，目前我国的标准GB2760已经禁止6-苄基腺嘌呤作为食品用加工助剂生产经营和使用。国家食品药品监督管理总局、农业部、国家卫生和计划生育委员会在2015年4月13日发布的《关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告》(2015年第11号)中重申了“生产者不得在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤，豆芽经营者不得经营含有6-苄基腺嘌呤的豆芽”。目前，相关的检测标准方法为高效液相色谱法《GB/T23381-2009食品中6-苄基腺嘌呤的测定高效液相色谱法》和液相色谱串联质谱法《DB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定同位素标记6‑苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记的6‑苄基腺嘌呤内标试剂的化学结构如式(I)所示：

【技术特征摘要】
1.一种稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记的6-苄基腺嘌呤内标试剂的化学结构如式(I)所示：其中，(I)中R为H或D，*为12C或13C，其特征在于，制备步骤如下：(1)在有机溶剂存在条件下，加入稳定同位素标记苯甲醛，然后加入对甲苯磺酰肼，在氮气保护下，在20℃～120℃条件下，反应0.5～6小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，无需处理，直接进行下一步反应；(2)将邻苯二甲酰亚胺、无机碱和催化剂加入步骤(1)得到的溶液中，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下，反应1～10小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用水淬灭，过滤，滤液用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥，减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到稳定同位素标记N-苯甲基邻苯二甲酰亚胺；(3)将步骤(2)所得稳定同位素标记N-苯甲基邻苯二甲酰亚胺溶于有机溶剂中，加入水合肼，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下继续反应1-8小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，反应混合溶液用酸淬灭，过滤，滤液再用碱的水溶液洗涤，用有机溶剂萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，饱和氯化钠溶液洗涤，加入干燥剂干燥；减压蒸馏除去溶剂，残留物经柱层析得到纯品稳定同位素标记苄胺；(4)在有机溶剂中，加入步骤(3)得到的稳定同位素标记苄胺，加入6-氯嘌呤，在氮气保护下，在80℃～150℃条件下继续反应6-24小时；TLC跟踪反应原料反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残留物用有机溶剂洗涤，得到稳定同位素标记6-苄基腺嘌呤的粗品；(5)在混合有机溶剂中，加入步骤(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，方燕飞，洪涛，
申请(专利权)人：坛墨质检科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32