一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法技术

本发明专利技术提供一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法，包括：步骤一：合成接头序列，接头序列包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列包括：限制性内切酶的保护碱基和随机碱基的双链分子标签，以及酶切位点中的可变碱基，第一序列和第二序列中具有互补的序列片段，步骤二：接头序列退火，混匀第一序列和第二序列，在退火体系中按退火程序退火形成双链，步骤三：补齐步骤二中所形成的双链的接头，步骤四：酶切回收接头。本发明专利技术的制备带有分子标签的二代测序接头的方法，具有如下优势：接头中含有更长的双链分子标签，为生息分析提供更好的信息基础；可以有效、较经济实惠地合成获得；适用于多种测序平台。

A Method for Preparing Second Generation Sequencing Joints with Molecular Labels

The present invention provides a method for preparing second-generation sequencing joints with molecular tags, including: step 1: synthesizing the sequence of joints, which includes the first sequence and the second sequence, in which the second sequence includes the double-chain molecular tags of protective and random bases of restrictive endonucleases, variable bases in the digestion sites, the first sequence and the second sequence. There are complementary sequence fragments, step two: joint sequence annealing, mixing the first sequence and the second sequence, annealing in the annealing system according to the annealing procedure to form a double-chain, step three: filling the double-chain joint formed in step two, step four: enzyme digestion recovery joint. The method for preparing second generation sequencing joints with molecular tags has the following advantages: the joints contain longer double-chain molecular tags, which provide better information basis for interest analysis; can be synthesized effectively and economically; and can be applied to a variety of sequencing platforms.

【技术实现步骤摘要】
一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法
本专利技术涉及一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法，属于分子生物学领域。
技术介绍
在Illumina测序平台中，接头是二代测序建库中必要的元素，目前官方的接头包含多种类型，序列中包含了p5与p7扩增引物结合序列、read1和read2测序引物结合序列、样本标签序列、分子标签序列等，并且带有用于A/T连接的3’-dT尾。目前常在p7端设计单链分子标签用于给建库中的目标分子添加标签，使生信分析过程可以捕获到更精细的分子信息，降低变异分析的背景噪音。另外，也可以通过双链分子标签，结合单链分子标签，通过生信将变异分析的背景噪音降得更低，使测序分析结果更加精准可靠。但是，目前没有较好的双链标签添加方法方便于文库构建。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供制备带有分子标签的二代测序接头的方法，本专利技术开发了一种制备携带有样本标签、单链分子标签和双链分子标签的技术方法。本专利技术采用了如下技术方案：一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法，其特征在于，包括：步骤一：合成接头序列，接头序列包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列包括：限制性内切酶的保本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法，其特征在于，包括：步骤一：合成接头序列，接头序列包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列包括：限制性内切酶的保护碱基和随机碱基的双链分子标签，以及酶切位点中的可变碱基，第一序列和第二序列中具有互补的序列片段，步骤二：接头序列退火，混匀第一序列和第二序列，在退火体系中按退火程序退火形成双链，步骤三：补齐步骤二中所形成的双链的接头，步骤四：酶切回收接头。

【技术特征摘要】
1.一种制备带有分子标签的二代测序接头的方法，其特征在于，包括：步骤一：合成接头序列，接头序列包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列包括：限制性内切酶的保护碱基和随机碱基的双链分子标签，以及酶切位点中的可变碱基，第一序列和第二序列中具有互补的序列片段，步骤二：接头序列退火，混匀第一序列和第二序列，在退火体系中按退火程序退火形成双链，步骤三：补齐步骤二中所形成的双链的接头，步骤四：酶切回收接头。2.如权利要求1所述的制备带有分子标签的二代测序接头的方法，其特征在于：其中，所述第二序列中还具有随机碱基的单链分子标签。3.如权利要求1所述的制备带有分子标签的二代测序接头的方法，其特征在于：其中，所述第二序列中还具有样本标签。4.如权利要求1所述的制备带有分子标签的第二代测序接头的方法，其特征在于：其中，所述第二序列中还具有限制性内切酶XcmI的酶切位点。5.如权利要求1所述的制备带有分子标签的第二代测序接头的方法，其特征在于：步骤三中，采用T4DNA聚合酶延伸补平步骤二中的退火产物。6.如权利要求1所述的制备带有分子标签的第二代测序接头的方法，其特征在于：步骤四中，采用限制性内切酶BmrI酶切步骤三中的延伸产物，并采...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑贤杰，朱垚，曹振，曹欣茹，宋东亮，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31