红景天及红景天苷在干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用制造技术

本发明专利技术提供了红景天及红景天苷在诱导干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用，尤其是红景天苷与低氧联合作为诱导剂用于诱导脂肪间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。本发明专利技术开拓了红景天苷的新用途，即体外诱导脂肪干细胞等干细胞定向分化为心肌样细胞；提供了红景天及红景天苷在诱导成体干细胞定向分化为心肌样细胞中的作用，有利于体内干细胞移植治疗急慢性心肌损伤及心血管疾病领域的深入研究，为新药开发提供了基础。

Application of Rhodiola and Salidroside in Directional Differentiation of Stem Cells into Cardiomyoid Cells

The invention provides the application of Rhodiola and Salidroside in inducing directional differentiation of stem cells into cardiomyocyte-like cells, especially the combination of salidroside and hypoxia as an inducer for directional differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells into cardiomyocyte-like cells. The invention opens up a new use of salidroside, that is, to induce stem cells such as adipose stem cells to differentiate into cardiomyocyte-like cells in vitro; provides the role of salidroside and Salidroside in inducing adult stem cells to differentiate into cardiomyocyte-like cells in vitro, is conducive to in vivo stem cell transplantation in the field of acute and chronic myocardial injury and cardiovascular disease, and provides a basis for the development of new drugs. Foundation.

【技术实现步骤摘要】
红景天及红景天苷在干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用
本专利技术涉及红景天尤其是红景天苷在诱导干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用。
技术介绍
红景天系景天(Crassulaceae)科红景天属(RhodiolaL.)植物，为多年生草本或亚灌木植物，主要分布在北半球的喜马拉雅山区、亚洲西北部和北美洲海拔在1600～4000米的地区。红景天药用历史悠久，素有“黄金人参”之称。药典记载红景天为景天科植物大花红景天的干燥根及茎根，其性甘、苦、平，益气活血、通脉平喘，可用于气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫和倦怠气喘。现代药理研究表明，红景天的生物活性与其所含有的多种化学成分密不可分。红景天苷(salidroside)是从红景天中分离提纯的天然产物，为一种单体化合物，是红景天的有效成分之一，部分相关科属中药也含红景天苷，其药理作用有以下几方面：提高和改善抗各种抗高原反应能力。抗缺氧、抗疲劳作用。研究表明它通过维持5-HT含量正常化起到了抗中枢疲劳的作用。抗衰老，具有抗氧化作用及体外清楚自由基和超氧阴离子自由基的能力。抑制大鼠肾小管上皮细胞及间质细胞向肌成纤维细胞转化，有效缓解肾间质损伤，防止肾间质纤维化。抗纤维化化作用。红景天苷可明显抑制乙醛刺激的HSC增值及胶原基因的表达，在体外有显著的抗肝纤维化作用。对心脑血管的保护作用。红景天苷可抑制大鼠缺血再灌注引起的白细胞介素Iβ表达的增加，减少脑缺血再灌注后脑组织中TNF-α的表达起到的保护脑血管的作用，通过抑制血管ACE的表达，在一定程度上可抗心肌缺血。提高机体免疫能力、抗肿瘤、抗病毒。抗辐射。红景天苷有防护X射线损伤机体组织和细胞膜的作用。提高记忆力和防止老年痴呆，保护神经细胞。红景天苷可抑制缺氧缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低，从而具有稳定线粒体膜电位的作用，抑制神经细胞凋亡的发生；体外促进神经干细胞想神经元方向分化为红景天药物用于相关神经系统疾病的临床治疗提供了实验依据。干细胞作为一种具有自我更新及多向分化的细胞，在一定条件下可分化为具有功能性的胰岛细胞，因此可作为胰岛细胞的全新来源。目前由干细胞分化获得心肌样细胞有几种途径：胚胎干细胞分化和成体干细胞分化。由于胚胎干细胞具有伦理争议，而成体干细胞来源广泛，无伦理争议，可作为心肌样细胞的来源。脂肪组织中含有一类具有多向分化潜力的细胞，即脂肪间充质干细胞，简称脂肪干细胞。其生物学性质与骨髓间充质干细胞相类似，并可向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、肝、胰岛和神经等多种细胞方向分化。由于脂肪组织在人体内储量丰富，获取简便创伤小，在组织工程、器官修复、基因治疗等方面都有着广阔的应用前景，因此脂肪间充质干细胞已成为继骨髓间充质干细胞后干细胞领域另一个备受关注的热点。目前的干细胞诱导方式主要有体外诱导、基因修饰、蛋白转导与组织微环境诱导，其中体外诱导是采用不同刺激因子组合，将干细胞诱导分化为目的细胞。各实验室诱导分化条件各异，诱导分化机制尚不明确，诱导分化效率低，胰岛分泌能力仅为正常胰岛1％左右，且诱导过程复杂，诱导时间长，所得细胞数量少，功能低。目前还未有红景天及红景天苷具有诱导干细胞定向分化为心肌样细胞和修复心肌损伤的作用报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供红景天及红景天苷的新用途，即红景天及红景天苷诱导干细胞定向分化为心肌样细胞的应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：红景天或红景天苷在制备诱导干细胞定向分化为心肌样细胞诱导剂中的应用。优选地，诱导剂在低氧条件下诱导干细胞定向分化为心肌样细胞。优选地，所述低氧条件是指氧气的体积百分含量为2～14％。优选地，所述干细胞为脂肪间充质干细胞。本专利技术还提供一种诱导干细胞定向分化为心肌样细胞的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂中含有红景天苷。优选地，所述诱导剂通过诱导培养基诱导干细胞定向分化为心肌样细胞，所述红景天苷在所述诱导培养基中的浓度为1～400μM。本专利技术还提供一种诱导干细胞定向分化为心肌样细胞的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：取动物脂肪间充质干细胞进行传代培养，选用稳定传代的脂肪间充质干细胞在低氧条件下培养于含有红景天苷的诱导培养基中进行诱导，分化获得成熟心肌样细胞。本专利技术还提供红景天苷在制备利用干细胞治疗心肌梗死、心肌炎、冠心病的药物中的应用。优选地，所述药物为口服制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于20％；所述药物为注射制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于5％。优选地，所述药物为口服制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于10％；所述药物为注射制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于2％。优选地，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒、滴丸、口服溶液剂或悬混剂。本专利技术的目的在于还提供一种利用干细胞治疗心肌损伤相关疾病的药物，所述药物中含有红景天苷；优选地，所述药物为口服制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于20％；所述药物为注射制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于5％。优选地，所述药物为口服制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于10％；所述药物为注射制剂时，所述红景天苷在所述药物中的质量百分含量大于2％。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了红景天及红景天苷在诱导干细胞定向分化为心肌样细胞中的应用，尤其是红景天苷与低氧联合作为诱导剂用于诱导脂肪间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。本专利技术开拓了红景天苷的新用途，即体外诱导脂肪干细胞等干细胞定向分化为心肌样细胞；提供了红景天及红景天苷在诱导成体干细胞定向分化为心肌样细胞中的作用，有利于体内干细胞移植治疗急慢性心肌损伤及心血管疾病领域的深入研究，为新药开发提供了基础。附图说明图1为脂肪间充质干细胞生长状态示意图，其中A为第3代脂肪间充质干细胞(×100)，B复苏的第3代细胞(×100)。图2为脂肪间充质干细胞转分化心肌样细胞的鉴定结果示意图，其中A为cTnI蛋白表达(呈红色荧光，阳性细胞，×400)，B为connexin43蛋白表达(呈绿色荧光，阳性细胞，×400)。图3为红景天苷及低氧对脂肪间充质干细胞诱导转分化心肌样细胞相关标志蛋白(cTnI、cTnT、α-actinin和GATA-4)表达情况的示意图。图4为红景天苷及低氧对脂肪间充质干细胞诱导转分化心肌样细胞相关标志蛋白(cTnI、cTnT、α-actinin和GATA-4)表达情况的差异显著性分析示意图。(*表示P<0.5，**表示P<0.01，***表示P<0.001。)图5为红景天苷及低氧对脂肪间充质干细胞诱导转分化心肌样细胞相关调控因子(Notch1、Jagged1和Hes1)表达情况示意图。图6为红景天苷及低氧对脂肪间充质干细胞诱导转分化心肌样细胞相关调控因子(Notch1、Jagged1和Hes1)表达情况的差异显著性分析示意图。(*表示P<0.5，**表示P<0.01，***表示P<0.001。)具体实施方式为了更加简洁明了的展示本专利技术的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例以及附图对本专利技术做进一步的详细描述。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《分子克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.红景天或红景天苷在制备诱导干细胞定向分化为心肌样细胞诱导剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.红景天或红景天苷在制备诱导干细胞定向分化为心肌样细胞诱导剂中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，诱导剂在低氧条件下诱导干细胞定向分化为心肌样细胞。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述低氧条件是指氧气的体积百分含量为2～14％。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述干细胞为脂肪间充质干细胞。5.一种诱导干细胞定向分化为心肌样细胞的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂中含有红景天苷。6.如权利要求5所述的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂通过诱导培养基诱导干细胞定向分化为心肌样细胞，所述红景天苷在所述诱导培养基中的浓度为1～400μM。7.一种诱导干细胞定向分化为心肌样细胞的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷桅，陈灿，何原，税晓容，马睦棣，
申请(专利权)人：雷桅，
类型：发明
国别省市：广东,44