一种多肽、多肽组合物在治疗结肠癌中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽、多肽组合物在治疗结肠癌中的应用，属于生物医药领域，具体来讲，是基于肿瘤发生特点和治疗难点，通过抗肿瘤治疗途径发明专利技术多肽序列，证明其具有抗肿瘤的应用价值。利用生物合成技术合成多肽序列，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1‑3所示，多肽组合物为包括以上三条序列。接着对多肽及多肽组合物的抗肿瘤功能进行了研究，通过所述多肽/多肽组合物的治疗，在体内和外水平显示，本发明专利技术所涉及的多肽、多肽组合物具有抑制肿瘤细胞活性和抑制小鼠成瘤模型生长的重要抗癌功能。本发明专利技术为肿瘤治疗开发新的靶点提供实验依据，对于应用于肿瘤的临床治疗具有十分重要的开发应用前景。

Application of a polypeptide and polypeptide composition in the treatment of colon cancer

The invention discloses the application of a polypeptide and polypeptide composition in the treatment of colon cancer, belonging to the field of biomedicine. Specifically, it is based on the characteristics of tumorigenesis and treatment difficulties. The polypeptide sequence is invented through the anti-tumorigenic treatment pathway, which proves that it has the application value of anti-tumour. The polypeptide sequence was synthesized by biosynthetic technology. The amino acid sequence of the polypeptide sequence was shown in SEQ ID NO. 1. 3, and the polypeptide composition included the above three sequences. Then the anti-cancer function of the polypeptide and polypeptide compositions is studied. Through the treatment of the polypeptide/polypeptide compositions, the polypeptide and polypeptide compositions have the important anti-cancer function of inhibiting the activity of tumor cells and inhibiting the growth of mouse tumorigenic model. The invention provides experimental basis for the development of new targets for cancer treatment, and has very important development and application prospect for the clinical treatment of cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种多肽、多肽组合物在治疗结肠癌中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是一种通过与β-catenin有效结合并促其正常降解，从而达到抑制肿瘤生长，治疗结肠癌的小分子多肽、多肽组合物及其应用。
技术介绍
结肠癌(cancerofcolon)是西欧、北美等发达国家最常见的恶性肿瘤，也是我国九大常见恶性肿瘤之一。在过去30多年的时间里，包括我国在内的多数国家或地区结肠癌发病率呈上升趋势。在我国因结肠癌死亡者，男性居恶性肿瘤死亡的第5位，女性居第6位。从流行病学的观点看，结肠癌的发病与社会环境、生活方式(尤其是饮食习惯、缺乏体力活动)、遗传因素有关，年龄、结直肠息肉史、溃疡性结肠炎及胆囊切除史也是结肠癌的高危因素，但总体而言，结肠癌的病因并非很清楚。APC基因是由Herrera于1986年对1例格德纳综合征(葡萄糖注射液)患者进行细胞遗传学研究时发现的一个新的抑癌基因。Groden等于1991年从结肠癌中首先克隆到这一基因，并正式命名为DP2，5或腺瘤样结肠息肉易感基因(AdenomatousPolyposisColi)。Groden和Kinzler等应用PCR技术和特异cDNA探针分析，确定DP2，5基因即为APC基因。早期研究发现该基因不仅与家族性结肠腺瘤息肉病(FAP)有关，后发现其在散发性大肠癌的发生中也起着重要作用。Chop等应用免疫沉淀技术也证实大肠癌组织中缺乏野生型APC蛋白，提示APC蛋白缺失表达可能与大肠癌的发生与演进密切相关。APC基因在FAP及散发性大肠癌(SCRC)中所显示生殖细胞与体细胞突变谱的相似性，提示APC基因参与这两种大肠癌的发生发展可能为共同机制。近年来分子生物学的研究结果表明，大肠癌发生发展与多个癌基因的激活和抑癌基因的失活有关，抑癌基因APC被认为是与大肠腺癌发生相关的热点基因，APC基因失活是大肠肿瘤发生的早期分子事件，但稳定于肿瘤发生发展的全过程。APC基因在85％的结肠癌中缺失或失活，并且该基因的缺陷与结肠癌的遗传易感性密切相关。前期研究发现，由于绝大多数结肠癌属APC基因缺陷型，导致APC不能与β-catenin有效结合并促其正常降解，过多的β-catenin进入细胞核启动细胞生长增殖相关基因过度表达而致癌。据文献报道APC基因上有一段包含20个氨基酸的重复序列区域能与β-catenin结合，另外，穿膜肽(CPP)可携带生物大分子，如β-catenin入胞发挥作用。结合目前研究报道，本申请推测这三条多肽与β-catenin结合能促进其降解，为进一步促进三条多肽与细胞中β-catenin结合，将CPP序列与之连接，从而达到抑制肿瘤生长的目的。本专利技术基于肿瘤发生特点和治疗难点，利用生物合成技术，专利技术一种多肽序列，其氨基酸序列为SEQIDNO.1-3所示，多肽组合物为包括以上三条序列。接着对多肽及多肽组合物的抗肿瘤功能进行了研究，通过所述多肽/多肽组合物的治疗，在体内和外水平显示，本专利技术所涉及的多肽、多肽组合物具有抑制肿瘤细胞活性和抑制小鼠成瘤模型生长的重要抗癌功能。本专利技术为肿瘤治疗开发新的靶点提供实验依据，对于应用于肿瘤的临床治疗具有十分重要的开发应用前景。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种多肽及多肽组合物，具有抑制结肠癌效应，满足生物医药使用需求。本专利技术的另一目的是提供上述多肽及多肽组合物的用途。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：第一步，基于肿瘤发生特点和治疗难点，利用生物合成技术，专利技术三段由氨基酸(aminoacid)组成的多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1-3所示；第二步，对上述合成多肽、多肽组合物的抗结肠癌功能进行体外验证研究：将合成的多肽或多肽组合加至人结肠癌HT-29细胞后，并以非特异性杀伤多肽(氨基酸序列如SEQIDNO.4所示)为对照，检测细胞活性，CCK-8结果显示此多肽具有显著抑制人结肠癌细胞增殖的作用，尤其是多肽组合物抑制结肠癌作用更加明显。将合成的多肽或多肽组合加至人结肠癌HT-29细胞后，并以非特异性杀伤多肽(氨基酸序列如SEQIDNO.4所示)为对照，检测细胞克隆形成能力，克隆形成实验结果显示此多肽具有显著抑制人结肠癌细胞增殖能力，尤其是多肽组合物抑制结肠癌作用更加明显。将合成的多肽或多肽组合分别加至人结肠癌HT-29细胞后，并以非特异性杀伤多肽(氨基酸序列如SEQIDNO.4所示)为对照，检测细胞周期情况，细胞周期实验结果显示此多肽具有显著抑制人结肠癌细胞增殖能力的作用，尤其是多肽组合物抑制结肠癌作用更加明显。第三步，对上述合成多肽的抗结肠癌功能进行体内验证研究：构建小鼠皮下成瘤模型，每周观察瘤体，挑选状态良好的已成瘤裸鼠于瘤体周围皮下注射多肽或多肽组合物，并以非特异性杀伤多肽(氨基酸序列如SEQIDNO.4所示)为对照，测量肿瘤大小，接种后30天，处死裸鼠，剥离肿瘤，称量测量；实验结果显示此多肽具有显著抑制小鼠成瘤模型生长的作用，尤其是多肽组合物抑制结肠癌作用更加明显。本专利技术的有益效果是：与现有技术相比，本专利技术基于肿瘤发生特点和治疗难点，通过抗肿瘤基因治疗途径专利技术3段多肽，接着对多肽或多肽组合物的抗肿瘤功能进行了研究，通过所述多肽或多肽组合物的治疗，在体内和外水平显示，本专利技术所涉及的多肽具有抑制肿瘤细胞活性和抑制裸鼠成瘤模型生长的重要抗癌功能，尤其是多肽组合物抑制结肠癌作用更加明显。具备很好的药物用途前景。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图：图1是CCK-8实验结果图图2是细胞克隆形成实验结果图图3是细胞周期流式结果分析图图4是裸鼠成瘤模型肿瘤生长大小图具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。【实施例1】多肽工作液的配置1.储备液配制：1mg/瓶肽，4℃离心，12000rpm，5min；加PBS与5μlDMSO，配成终浓度0.5mM储备液，如下表。2.工作液配制：用PBS将储备液稀释，配制成5μM浓度工作液。【实施例2】CCK-8实验证明多肽细胞水平的抗结肠癌效应本专利技术以合成肽的形式发挥其抗肿瘤作用，CCK-8实验证明此多肽对人结肠癌细胞具有生长抑制效应，以一种人结肠癌细胞HT-29细胞为例。1.细胞模型分组：(1)正常对照组：正常细胞(2)实验对照组：对照多肽(SEQIDNO.4)处理细胞(96孔板每孔给工作液各100μl)(3)实验组1：SEQIDNO.1多肽处理细胞(96孔板每孔给工作液各100μl)(4)实验组2：SEQIDNO.2多肽处理细胞(96孔板每孔给工作液各100μl)(5)实验组3：SEQIDNO.3多肽处理细胞(96孔板每孔给工作液各100μl)(6)实验组4：SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3组合多肽处理细胞(三种多肽：96孔板给工作液各33.3μl)2.细胞培养：HT-29细胞培养于含青、链霉素(各1U/mL，0.1mg/mL)10％FBS的McCOY′s5A培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽包含以下任意一条序列：SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列；SEQ ID NO.1：Glu Asp Asp Lys Pro Thr Asn Tyr Ser Glu Arg Tyr Ser Glu Glu Lys Arg Lys Arg Lys Arg Lys Arg LysSEQ ID NO.2：Glu Leu Asp Thr Pro Ile Asn Tyr Ser Leu Lys Tyr Ser Asp Glu Lys Arg Lys Arg Lys Arg Lys Arg LysSEQ ID NO.3：Glu Glu Glu Arg Pro Thr Asn Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Glu Glu Lys Arg Lys Arg Lys Arg Lys Arg Lys。

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽包含以下任意一条序列：SEQIDNO.1-3所示的氨基酸序列；SEQIDNO.1：GluAspAspLysProThrAsnTyrSerGluArgTyrSerGluGluLysArgLysArgLysArgLysArgLysSEQIDNO.2：GluLeuAspThrProIleAsnTyrSerLeuLysTyrSerAspGluLysArgLysArgLysArgLysArg...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红林，刘海林，刘星云，李玥熹，程牛亮，牛勃，覃秀桃，王晓霞，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：山西,14