一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用技术

本发明专利技术涉及一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用，属于生物制药领域。用低血清培养基悬浮VeroE6‑TY株细胞培养驯化水貂犬瘟热病毒，驯化后的病毒接种到低血清悬浮VeroE6‑TY株细胞培养液中，培养增殖后收获毒液，制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物。本发明专利技术使得水貂犬瘟热抗原蛋白复合物实现了从转瓶贴壁培养向大规模细胞悬浮培养的转变，这不仅简化了生产工艺，降低了生产成本，还大大提高了产品的产量和质量。

A Method for Preparing Mink Canine Distemper Antigen-Protein Complex, Antigen-Protein Complex and Its Application

The invention relates to a method for preparing an antigen-protein complex of mink distemper, an antigen-protein complex and its application, belonging to the field of biopharmaceuticals. The domesticated mink canine distemper virus was cultured in low serum suspension VeroE6 TY strain cells. The domesticated virus was inoculated into the cell culture medium of low serum suspension VeroE6 TY strain. The virus was harvested after culture and proliferation, and the antigen protein complex of mink canine distemper was prepared. The invention makes the mink canine distemper antigen protein complex realize the transformation from bottle adherent culture to large-scale cell suspension culture, which not only simplifies the production process, reduces the production cost, but also greatly improves the output and quality of the product.

【技术实现步骤摘要】
一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种抗原蛋白复合物的制备方法、抗原蛋白复合物及其应用。
技术介绍
水貂犬瘟热是由犬瘟热病毒引起水貂的一种急性、高度接触性传染病。主要侵害呼吸系统、消化系统及神经系统，以呈现典型的双向热，上呼吸道、肺及胃肠道的卡他性炎症为特征。毛皮动物养殖危害最大的三大传染病之一，给养殖业带来了巨大的经济损失。VeroE6细胞即非洲绿猴肾传代细胞，广泛用于病毒抗原制备的研究。传统VeroE6细胞为贴壁依赖性生长的细胞，生产疫苗时用10升或者15升转瓶进行贴壁培养细胞再制备病毒抗原复合物。在生产水貂犬瘟热抗原蛋白复合物时，首先是用含10％新生牛血清细胞培养液将种子细胞多次传代扩大培养到一定瓶数时，再将培养液弃掉，经胰酶消化后同步接种水貂犬瘟热病毒，换加含2％新生牛血清的细胞维持液，待病毒增殖使细胞病变达一定程度后，收获全部病毒液，冻融后进行配苗与冻干工艺等制备抗原复合物。传统转瓶工艺过程繁琐复杂周期长、劳动强度大、费工费力，且质量不稳定，批间差异大，制备的病毒抗原复合物注射动物后副反应较高。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.一种使用低血清悬浮培养VeroE6‑TY株细胞制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法，其特征在于：用低血清培养基悬浮VeroE6‑TY株细胞培养驯化水貂犬瘟热病毒，驯化后的病毒接种到低血清培养液培养的VeroE6‑TY株细胞培养液，培养增殖后收获毒液，制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物。

【技术特征摘要】
1.一种使用低血清悬浮培养VeroE6-TY株细胞制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法，其特征在于：用低血清培养基悬浮VeroE6-TY株细胞培养驯化水貂犬瘟热病毒，驯化后的病毒接种到低血清培养液培养的VeroE6-TY株细胞培养液，培养增殖后收获毒液，制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：1.VeroE6-TY株细胞复苏；2.将步骤1得到的复苏后的VeroE6-TY株细胞用低血清培养液进行放大培养，得到VeroE6-TY株细胞培养液；3.水貂犬瘟热病毒进行低血清培养基悬浮VeroE6-TY株细胞培养驯化，筛选出驯化的水貂犬瘟热病毒；4.接种步骤3得到的驯化后水貂犬瘟热病毒至步骤2得到的VeroE6-TY株细胞培养液，增殖后收获毒液；5.利用步骤4得到的毒液制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物；所述步骤按照步骤1、2、3、4、5的顺序进行，或按照步骤3、1、2、4、5的顺序进行。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1的具体方法为：取液氮冻存的VeroE6-TY株悬浮培养型细胞，置于37℃水浴中快速解冻并接种于含有低血清悬浮培养液300ml的摇瓶中，低血清悬浮培养液的血清浓度为体积百分比1-5％，置于37℃、60rpm、5％(v/v)CO2摇床培养72小时，细胞密度可达2.0×106个/ml，细胞活力≧90％，得到复苏后的VeroE6-TY株细胞。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2的具体方法为：A)把步骤1得到的复苏后的VeroE6-TY株细胞按照与培养液体积比1:3接种于装有低血清培养液的摇瓶中，于37℃5％CO2摇床培养72小时，60r/min，悬浮细胞数量不低于1.5×106个/ml，细胞活力≧90％，得到摇瓶生长的细胞悬浮液，将摇瓶生长的细胞悬浮液直接接种到齐志BC-7L型(工作体积5L)生物反应器，接种体积为500-1500mL，补加低血清培养液至2.5L，反应器参数设定三路气体，分别为空气、氧气和二氧化碳，转速为60-75rpm，温度37℃、PH7.1，培养36小时后溶氧设定为50％，继续培养36小时后细胞密度不低于2.0×106个/ml，细胞活力≧90％；B)将步骤A)中得到的细胞培养液补加低血清悬浮培养及至5.0L，培养条件同步骤A)，培养72h后，细胞密度不低于2.0×106个/ml；C)将步骤B)中得到的细胞培养液3.5L转移至型号为齐志BC-14L型(工作体积10L)生物反应器，补加低血清培养液至10L，反应器参数设定三路气体，分别为空气、氧气和二氧化碳，转速为75-85rpm，温度37℃、PH7.1、溶氧70％，继续培养72小时进行台盼蓝染色法计数及活力检测，活细胞密度不低于2.0×106个/mL时得到可用作接毒的细胞培养液；BC-7L型(工作体积5L)生物反应器剩余细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：任飞，王春霞，王彬，叶明，闫如勋，刘秉玺，李云松，倪佳，王萃瑜，许皓，
申请(专利权)人：吉林特研生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22