一株疫苗株rSHA-△200及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供一株疫苗株rSHA‑△200及其构建方法和应用，涉及流感疫苗领域。所述疫苗株rSHA‑△200包括不含有NRT糖基化位点的HA基因。本发明专利技术通过分析，找出其HA蛋白上潜在的糖基化位点，并通过定点突变技术缺失糖基化位点，构建多个糖基化位点缺失的HA表达质粒，利用8质粒反向遗传技术获得重组疫苗株，并制备抗血清，通过对比发现：本发明专利技术得到的rSHA‑△200具有良好的交叉免疫能力和血清交叉中和能力，是一种理想的H9亚型AIV灭活疫苗候选株。

【技术实现步骤摘要】
一株疫苗株rSHA-△200及其构建方法和应用
本专利技术涉及流感疫苗
，尤其涉及一株疫苗株rSHA-△200及其构建方法和应用。
技术介绍
H9亚型AIV引起的通常为低致病性禽流感，引发的禽类死亡率较低，但由于其分布范围广和传播速度快，感染后会使蛋鸡产蛋量急剧下降，肉鸡生长缓慢，降低料肉比，对家禽养殖业造成了巨大的经济损失。H9亚型AIV感染后容易导致禽类自身免疫力的急剧下降，从而出现其他细菌或病毒的并发或继发感染导致死亡率的升高。H9亚型AIV还会作为其他亚型流感病毒内部基因的供体，为新型流感病毒株的产生提供条件，引发新流感疫情的爆发，对公共卫生安全造成潜在威胁，如H9N2亚型AIV为2013年以来在我国流行的新型H7N9病毒提供了6个内部基因片段。H9亚型AIV在环境和疫苗的选择压力下不断发生变异，HA蛋白上糖基化位点的改变是抗原性改变的一种模式。研究表明，HA上的糖基化位点能够通过调节HA的生物活性来影响流感病毒的毒力，并使病毒躲避抗体的识别。糖基化位点所处位置不同会产生不同的影响，裂解位点附近的糖基化，会干扰宿主细胞蛋白酶的裂解能力使病毒的致病性降低；位于抗原表位附近本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株疫苗株rSHA‑△200，其特征在于，包括不含有NRT糖基化位点的HA基因。

【技术特征摘要】
1.一株疫苗株rSHA-△200，其特征在于，包括不含有NRT糖基化位点的HA基因。2.根据权利要求1所述疫苗株rSHA-△200，其特征在于，所述不含有NRT糖基化位点的HA基因是以NRA替换NRT编码基因。3.根据权利要求1所述疫苗株rSHA-△200，其特征在于，所述疫苗株rSHA-△200还包括来源于供体病毒的PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS基因片段。4.根据权利要求3所述疫苗株rSHA-△200，其特征在于，所述供体病毒为H1N1亚型流感病毒。5.根据权利要求3或4所述疫苗株rSHA-△200，其特征在于，所述供体病毒为A/PuertoRico/8/34病毒株。6.权利要求1～5任意一项所述疫苗株rSHA-△200的构建方法，包括以下步骤：(1)以流感病毒的HA片段通用引物对H9N2亚型AIV病毒进行扩增，得到HA基因片段；(2)以pHW2000为载体，将HA基因片段插入pHW2000载体的多克隆位点，得到表达质粒pHW-HA；(3)以点突变引物对pHW-HA表达质粒进行点突变，得到NRT糖基化位点缺失的表达质粒pHW-HA-△200；所述点突变引物包括上游引物200-F和下游引物200-R，...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭大新，石宝兰，陈素娟，张伟，秦涛，王泽源，乔依漪，苏湘，李卓恬，沈海峰，刘雷，
申请(专利权)人：扬州大学，国药集团扬州威克生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32