一种眼袋脂肪干细胞分离及体外培养的方法技术

一种眼袋脂肪干细胞分离和体外培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：脂肪组织的获取、脂肪干细胞的分离、脂肪干细胞的体外培养。本发明专利技术的有益之处在于：本发明专利技术中的一种脂肪干细胞分离和体外培养的方法与现有技术相比，具有以下优点：1、细胞采用无血清的培养基进行培养，无异源血清成分加入，减少对细胞的伤害和后期临床使用时的风险；2、细胞状态良好，活力佳，细胞形态、增殖能力、表面标记物表达以及分化能力好。

【技术实现步骤摘要】
一种眼袋脂肪干细胞分离及体外培养的方法
本专利技术涉及干细胞分离及体外培养
，尤其涉及一种眼袋脂肪干细胞分离及体外培养的方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是成人干细胞具有多向分化潜能的热点细胞，是一种大多数成人器官中发现的具有骨形成能力和造血功能的细胞群体，可以从骨髓、脐血、脂肪中提取，在特定的培养条件下，间充质干细胞可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和肌细胞等。间充质干细胞是目前组织工程的主要种子细胞。经历了多年多学者的研究后，虽然组织工程已经获得了很大进展，然而，由于目前缺乏理想筛选方法，间充质干细胞不易获取、体外扩增困难等限制，使其在临床级别回输的应用受到限制。因此，寻找一种易于获得、免疫原性低、易于体外扩增的临床治疗级别的种子细胞是目前组织工程迫切需要解决的问题之一。人们已经从脂肪组织分离出一类具有多向分化潜能的干细胞，并在体外培养特殊体系中成功地分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞与肌细胞等，这种可分化的干细胞被认可为脂肪来源的间充质细胞，即脂肪干细胞或脂肪间充质干细胞(adipose-derivedstemcell本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种眼袋脂肪干细胞分离及体外培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)眼袋脂肪组织为医院在无菌条件下通过老年人眼袋手术取下的脂肪废弃物，置于无菌生理盐水中以2‑8℃保存，储存时间不超过24小时；(2)将眼袋脂肪组织用清洗液冲洗3‑5遍，用无菌手术剪及镊子去除脂肪样本中的血丝，并将脂肪样本剪成1mm3大小的组织块，放入50mL离心管中，体积为0.5‑3mL；加入消化酶，消化酶与脂肪组织的比例为5:1‑1.5:1，37℃恒温摇床震荡消化40‑60分钟，消化结束后，消化液经70μm滤网过滤，将滤液移入50ml离心管，1500rpm离心10分钟，移除上层黄色油脂和中间层消化液，收集沉淀并加入生理...

【技术特征摘要】
1.一种眼袋脂肪干细胞分离及体外培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)眼袋脂肪组织为医院在无菌条件下通过老年人眼袋手术取下的脂肪废弃物，置于无菌生理盐水中以2-8℃保存，储存时间不超过24小时；(2)将眼袋脂肪组织用清洗液冲洗3-5遍，用无菌手术剪及镊子去除脂肪样本中的血丝，并将脂肪样本剪成1mm3大小的组织块，放入50mL离心管中，体积为0.5-3mL；加入消化酶，消化酶与脂肪组织的比例为5:1-1.5:1，37℃恒温摇床震荡消化40-60分钟，消化结束后，消化液经70μm滤网过滤，将滤液移入50ml离心管，1500rpm离心10分钟，移除上层黄色油脂和中间层消化液，收集沉淀并加入生理盐水冲洗1-2次，1500rpm离心6分钟，收集沉淀，即为眼袋脂肪干细胞；(3)眼袋脂肪干细胞沉淀中加入2ml无血清培养基重悬，按照10000-20000/cm2密度接种于6孔板或培养皿，于37℃，5％二氧化碳培养箱进行孵育，接种3-5天后更换新的无血清培养基，之后每隔2-4天进行一次无血清培养基的换液，至细胞融合率达到70％-80％；对眼袋脂肪干细胞进行传代，方法为弃去原培养基，用清洗液清洗细胞1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：费方利，王浩，
申请(专利权)人：希瑞干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32