一种高效提取子宫内膜间充质干细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种子宫内膜间充质干细胞制备及在卵巢早衰、子宫内膜损伤等治疗中应用的方法，包括采用月经杯收集经血为原料；通过筛网过滤分离经血中的子宫内膜组织和经血液体；然后收集子宫内膜组织切碎后加入约10‑20ml消化液，消化获得单细胞悬液，并对其进行原代培养；对经血液体进行除菌处理，采用梯度离心法获得中间薄膜层细胞，并对其进行原代培养；对获得的原代子宫内膜间充质干细胞传代培养即获得子宫内膜间充质干细胞。将获得的子宫内膜间充质干细胞用于卵巢早衰、子宫内膜损伤等相关疾病治疗。使用本发明专利技术专利技术提供的子宫内膜间充质干细胞的提取方法，可维持子宫内膜间充质干细胞在体外长期培养过程，维持细胞形态、增殖能力、MSC表面标记表达、分化能力等。所用到的方法简单易行，操作方便，并且能最大量获得所需的干细胞，并培养成功。

An efficient method for extracting endometrial mesenchymal stem cells and its application

The invention discloses a method for preparing endometrial mesenchymal stem cells and its application in the treatment of premature ovarian failure and endometrial injury, including collecting menstrual cup blood as raw material, filtering and separating endometrial tissue and blood body in blood through sieve mesh, and then collecting endometrial tissue and adding about 10 to 20 ml digestive juice, digesting and obtaining single cell suspension. The primary culture of endometrial mesenchymal stem cells (EMSCs) was carried out, and the mesenchymal mesenchymal stem cells (IMSCs) were obtained by gradient centrifugation after the blood was sterilized, and then primary culture was carried out. The obtained primary endometrial mesenchymal stem cells (EMSCs) were subcultured to obtain endometrial mesenchymal stem cells (EMSCs). The obtained endometrial mesenchymal stem cells were used to treat premature ovarian failure, endometrial injury and other related diseases. The extraction method of endometrial mesenchymal stem cells provided by the patent technology of the invention can maintain the long-term culture process of endometrial mesenchymal stem cells in vitro, maintain cell morphology, proliferation ability, MSC surface marker expression, differentiation ability, etc. The method used is simple, easy to operate, and can maximize the amount of required stem cells, and culture successfully.

【技术实现步骤摘要】
一种高效提取子宫内膜间充质干细胞的方法及其应用
本专利技术涉及干细胞
，特别是涉及一种从废弃经血中制备子宫内膜间充质干细胞及在卵巢早衰、子宫内膜损伤等治疗中应用的方法。
技术介绍
间充质干细胞（MesenchymalStemCell,MSC）是一种成体干细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，而且免疫原性低，异体移植无免疫排斥反应或反应较弱，因此在再生医学领域具有巨大的潜能。人的子宫内膜是一个高度再生组织，在育龄期妇女中要经历400多次的增殖、分化和脱落。近年越来越多的研究表明，子宫内膜组织中存在一小群具有强大增殖和多向分化潜能的干细胞，可不断分裂增殖，及时补充脱落的终末分化细胞，使子宫内膜始终保持自我更新和再生能力，这种成体干细胞被称为子宫内膜间充质干细胞。该子宫内膜间充质干细胞具有典型的间充质干细胞特性：具有自我更新和多向分化潜能，且具有间充质干细胞特异的标记分子表达。从经血中分离间充质干细胞可避免伦理争议，其来源丰富，变废为宝，在临床上可用于卵巢早衰、子宫内膜损伤等疾病治疗，具有广泛的应用价值。目前，已有的经血中分离子宫内膜间充质干细胞的方法存在以下缺点：（1）月经血液高粘本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从经血中制备子宫内膜间充质干细胞及在卵巢早衰、子宫内膜损伤等治疗中应用的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）使用月经杯采集女性经期中第一天到第四天的经血作为原料；将采集到的经血倒入装有保存液的无菌管中，4℃保存。

【技术特征摘要】
1.一种从经血中制备子宫内膜间充质干细胞及在卵巢早衰、子宫内膜损伤等治疗中应用的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）使用月经杯采集女性经期中第一天到第四天的经血作为原料；将采集到的经血倒入装有保存液的无菌管中，4℃保存。2.2）0-72小时内将浸泡在经血保存液中的经血运至实验，通过100-200μm筛网将经血中的子宫内膜组织与经血液体分离，然后分别从子宫内膜组织与经血液体中收集人子宫内膜组织。3.3）从子宫内膜组织中提取间充质干细胞：剪碎的子宫内膜中加入约1-4倍体积由0.05-2.5%的胰蛋白酶和0.05-2%的胶原酶组成的消化液，25℃—37℃消化15-60min，获得单细胞悬液。4.4）从过滤后的经血液体中分离间充质干细胞：过滤后的经血液体加入1-5倍青/链霉素及两性霉素，置于冰箱2-8℃处理8-24h。5.5）过滤后的细胞沉淀中加入等体积生理盐水混匀，缓慢平铺于人淋巴细胞分离液的无菌离心管，1500-3000rpm离心10-30min，收集中间白膜层细胞。6.接种至培养瓶中，置于37℃、50ml/LCO2和95％的相对空气湿度孵箱中培养。7.6）将步骤3）中处理8-24h的滤液应用ficoll分离法获得中间薄膜层细胞，并对其进行原代培养。8.7）将步骤5）和步骤6）分离获得的有核细胞置于子宫内膜间充质干细胞培养基中进行选择性培养，其梭形贴壁细胞即为所述子宫内膜间充质干细胞。9.8）将步骤7）中获得的子宫内膜间充质干细...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：中晶生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11