一种苏木组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种苏木组培快繁方法，目前苏木主要采用扦插、嫁接和播种等传统方式进行育苗，存在育苗成本高，苗木长势不好、参差不齐、良种潜力未能得到充分发挥等缺点。本发明专利技术以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了苏木离体再植株，建立苏木组织培养快速繁殖技术体系，可以保持苏木无性系母本的优良性状，有利于苏木优良无性系苗木的规模化生产。

A Rapid Propagation Method of Sapphire Tissue Culture

The present invention discloses a rapid propagation method of sapphire tissue culture. At present, sapphire seedlings are mainly raised by traditional methods such as cutting, grafting and sowing, which have the disadvantages of high cost, poor seedling growth, uneven seedling growth and inadequate potential of improved varieties. The present invention takes fine clone tender branch as explant, obtains in vitro re-planting of sapphire through the process of explant disinfection, induction culture, cluster bud multiplication, adventitious rooting and seedling transplantation, establishes the technical system of rapid propagation of sapphire tissue culture, can maintain the fine characteristics of sapphire clone female parent, and is conducive to the large-scale production of sapphire superior clone seedlings.

【技术实现步骤摘要】
一种苏木组培快繁方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种苏木组培快繁方法。
技术介绍
苏木为豆科植物，取其干燥心材。一般5~7月将树砍下，除去粗皮及边材，取其黄红色或红棕色的心材，晒干。无臭，味微涩。具有行血祛瘀，消肿止痛。用于闭经，产后瘀阻腹痛，胸腹剌痛，外伤及骨折肿痛。近年来随着集体林权制度改革的推进和商品材价格的上涨，林农经营苏木的积极性加大，苏木经营水平和良种意识的不断提高，对苏木良种壮苗的需求日益增加，因此，如何快速扩繁苏木优良基因型显得十分必要。近年来生物工程技术的快发展，尤其是组培快繁体系的建立，为林木的无性选育提供了一定的技术支撑。利用组织培养技术进行珍稀濒危物种及优良品系树种繁育，具有加速育种、缩短繁殖过程、节省空间、减少劳动、周年生产等特点。而目前苏木主要采用扦插、嫁接和播种等传统方式进行育苗，存在育苗成本高，苗木长势不好、参差不齐、良种潜力未能得到充分发挥等缺点，使得目前苏木优质壮苗的供应还无法满足市场的需求。为了满足市场对苏木苗的巨大需求，本专利技术以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了苏木离体再植株，建立苏木组织培养快速繁殖技术体系，不仅能有效地克服苏木传统育苗中的一些缺缺陷，而且对繁育出的无性系苗木在保持母本的优良性状起到一定的作用，有利于苏木优良无性系苗木的规模化生产。对比文件1，申请号：CN201410170219，专利技术名称：喀斯特地区苏木栽培的方法，包括采种及种子处理、苗木培育及造林抚育的工序，通过选择苏木优树作为采种母树，采集种子进行种子处理，置于装有育苗基质的容器中培育幼苗，苗木出圃造林，对新造林地进行抚育管理。本栽培方法采用无纺布育苗袋培育幼苗，经移苗断根、分级管理、全光照炼苗、分层施放保水剂和基肥、整形修枝以及入秋后截去顶芽等技术处理。对比文件与本案的不同。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供出一种苏木组培快繁方法，本专利技术以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了苏木离体再植株，建立苏木组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术的一种苏木组培快繁方法，包括以下的步骤：步骤1，外植体采集及消毒：采取苏木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗6h，浸泡于3%～5%洗衣粉溶液13分钟，用软毛刷3%～5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗93min，用蒸馏水冲洗8次，于超净工作台中以75%～80%乙醇溶液浸泡63s，无菌水冲洗8次，再用含有0.08%吐温-20的0.8%升汞溶液消毒18min，无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;步骤2，诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约1.8cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2300lx，置于培养温度为28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养33天后统计诱导情况;诱导培养基为：MS+1.3mg/LNAA+8.3mg/L6-BA+3.3mg/LKT+1.8g/LAC+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤3，丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养43天后统计发芽数;增殖培养基为：MS+0.8mg/L2,4-D+5.3mg/L6-BA+1.3mg/LNAA+1.8g/LAC+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤4，生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株无根嫩梢6cm从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于每天光照17小时，光照强度为3300lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养33天后统计生根情况;生根培养基为：White+1.3mg/LNAA+3.3mg/LIBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤5，炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下8天后，打开瓶盖6天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在1000倍的生物菌剂中浸泡13min，然后移栽至盛有所设计的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗,置于带有遮阴网的自动喷雾的塑料大棚内保温保湿温度控制在15～35℃，湿度应保持在75％～85％左右，避免阳光直射，移栽33天后统计成活率。移栽培养基质为由泥炭土:蛭石:珍珠炭:松木＝2:2:1:1混合而成基质。与现有技术相比本专利技术的优点是：近年来随着集体林权制度改革的推进和商品材价格的上涨，林农经营苏木的积极性加大，苏木经营水平和良种意识的不断提高，对苏木良种壮苗的需求日益增加。而目前苏木主要采用扦插、嫁接和播种等传统方式进行育苗，存在育苗成本高，苗木长势不好、参差不齐、良种潜力未能得到充分发挥等缺点，使得目前苏木优质壮苗的供应还无法满足市场的需求。为了满足市场对苏木苗的巨大需求，本专利技术以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了苏木离体再植株，建立苏木组织培养快速繁殖技术体系，可以保持苏木无性系母本的优良性状，有利于苏木优良无性系苗木的规模化生产。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：（1）外植体采集及消毒：采取苏木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗5h，浸泡于3%洗衣粉溶液8min，用软毛刷3%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗63min，用蒸馏水冲洗6次，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡23s，无菌水冲洗8次，再用含有0.01%吐温-20的0.3%升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约1.8cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为1800lx，置于培养温度为23℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后诱导率达98%。所述的诱导培养基为：MS+0.5mg/LNAA+5.3mg/L6-BA+1.8mg/LKT+1.1g/LAC+28g/L蔗糖+5.3g/L琼脂，pH为5.6。（3）丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为1800lx，置于培养温度为23℃，空气相对湿度为75%的条件下培养43天后芽数11个以上。所述的增殖培养基为：MS+0.5mg/L2,4-D+3.8mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+1.3g/LAC+28g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.6。（4）生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株无根嫩梢2～3cm从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照18小时，光照强度为2300lx，置于培养温度为23℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后生根达到99%以上。所述的生根培养基为：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苏木组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，外植体采集及消毒：采取苏木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗 6h，浸泡于3%～5%洗衣粉溶液13分钟，用软毛刷3%～5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗93min，用蒸馏水冲洗8次，于超净工作台中以75%～80%乙醇溶液浸泡63s，无菌水冲洗8次，再用含有0.08%吐温‑20的0.8%升汞溶液消毒18min，无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;步骤2，诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约1.8cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2300lx，置于培养温度为28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养33天后统计诱导情况; 诱导培养基为：MS+1.3mg/L NAA+8.3mg/L 6‑BA+3.3mg/L KT+1.8g/L AC+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤3，丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养43天后统计发芽数; 增殖培养基为：MS+0.8mg/L 2,4‑D+5.3mg/L 6‑BA+1.3mg/L NAA+1.8g/L AC+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤4，生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株无根嫩梢6cm从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于每天光照17小时，光照强度为3300lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养33天后统计生根情况; 生根培养基为：White+1.3mg/L NAA+3.3mg/L IBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤5，炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下8天后，打开瓶盖6天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在 1000 倍的生物菌剂中浸泡13min，然后移栽至盛有所设计的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗,置于带有遮阴网的自动喷雾的塑料大棚内保温保湿温度控制在 15～35℃，湿度应保持在 75％～85％左右，避免阳光直射，移栽33天后统计成活率，移栽培养基质为由泥炭土:蛭石:珍珠炭:松木=2:2:1:1混合而成基质。...

【技术特征摘要】
1.一种苏木组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，外植体采集及消毒：采取苏木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗6h，浸泡于3%～5%洗衣粉溶液13分钟，用软毛刷3%～5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗93min，用蒸馏水冲洗8次，于超净工作台中以75%～80%乙醇溶液浸泡63s，无菌水冲洗8次，再用含有0.08%吐温-20的0.8%升汞溶液消毒18min，无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;步骤2，诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约1.8cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2300lx，置于培养温度为28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养33天后统计诱导情况;诱导培养基为：MS+1.3mg/LNAA+8.3mg/L6-BA+3.3mg/LKT+1.8g/LAC+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9；步骤3，丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养,接种后置于每天光照17小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度...

【专利技术属性】
技术研发人员：林登淞，
申请(专利权)人：林登淞，
类型：发明
国别省市：广西,45