单独和在聚合凝块中检测和计数血小板的方法及设备技术

提供了一种用于对血液样本中的血小板进行计数的方法。该方法包括以下步骤：1)将样本滴落在适于静止地保持样本以进行分析的分析腔室内，该腔室由第一平板和第二平板限定，这两个平板都是透明的；2)在样本中掺合染色剂，该染色剂用于使血小板在曝光于一个或多个预定的第一波长的光时发出荧光；3)以第一波长的光照射包含血小板的样本的至少一部分；4)对样本成像，包括产生表示来自血小板的荧光发射的图像信号，该荧光发射具有强度；5)使用图像信号，通过血小板的荧光发射来识别血小板；6)确定在样本内识别出的单独的血小板的平均荧光发射强度值；7)使用样本内的血小板凝块的荧光发射、面积、形状和粒度中的一个或多个来识别样本内的血小板凝块；以及8)使用为样本内的单独的血小板确定的平均荧光发射强度值，对每个血小板凝块内的血小板进行计数。

【技术实现步骤摘要】
单独和在聚合凝块中检测和计数血小板的方法及设备本申请是基于申请日为2009年3月20日、申请号为200980116792.6、专利技术创造名称为“单独和在聚合凝块中检测和计数血小板的方法及设备”的中国专利申请的分案申请。
本专利技术总的来说涉及用于分析血液样本的设备及方法，具体地讲，涉及用于检测和计数血小板、以及从巨血小板中辨别出血小板和从血小板凝块中辨别出巨血小板的设备和方法。
技术介绍
内科医生、兽医和科学家检查人类和动物的生物流体(尤其是血液)，以确定组分的数量以及识别是否存在在健康的受试者中没有发现的异常微粒。通常被测量、定量和识别的组分包括红细胞(RBC)、白细胞(WBC)和血小板。在哺乳动物中，血小板(也被称为凝血细胞(thrombocyte))是小的不规则形状的无核细胞碎片，其由巨核细胞的裂解产生。某些动物(例如，鸟、爬行动物和鱼)中的凝血细胞在功能上类似于哺乳动物的血小板，但是比哺乳动物的血小板大约10倍且是有核的。血小板分析可以包括对样本内的血小板的数目、大小、形状、结构和体积的确定，包括确定样本中是否存在血小板或凝血细胞的凝块。在某些自然形成的条件下，作为对身体所遭遇的损伤(例如，出血、组织损伤等)所作出的有用响应，血小板将在受试者内聚集成凝块。另一方面，采集在血液样本内形成的血小板凝块用来进行分析通常是无用的，并且可能妨碍血液样本的分析。抗凝血剂(例如，EDTA)可以用来防止血小板在样本内凝块，但是如果血液样本与抗凝血剂的混合存在延迟，则凝块仍会形成。一旦凝块形成，抗凝血剂通常不能将它们分成单独的血小板。在被分析的样本内存在血小板凝块通常是有问题的，这是因为它们将导致错误的低血小板计数，这将导致对患者的错误诊断和严重后果。在诸如Wintrobe’sClinicalHematology第12版的医学文献中详细描述的已知的血液检查技术通常将检查方法分为手动、离心和阻抗型方法。手动方法通常涉及产生精确确定的血液或流体样本的体积，该血液或流体样本被定量稀释并且在计数室中被直观计数。用于细胞计数的手动检查方法包括检查其中通过目测确定微粒类型的相对量的外周涂片。离心检查方法涉及对样本进行离心，使得根据组分的相对密度将样本分成多个组分层。可以给组分层染色，以增强可见性或检测性。阻抗型方法涉及检查根据被测量的微粒而处理的血液的精确体积；例如溶解RBC来计数有核细胞以及在导电流体中体积(volumetrically)稀释样本。该过程通常涉及监视施加给通过窄通道的样本的电流或电压，以确定当微粒以单行通过时微粒对电流/电压的影响。其他技术涉及对通过光束入射到以单行通过的微粒的光的强度和散射角的分析。还可以使用流式细胞测定法，该方法涉及利用附着于针对细胞或微粒类型上存在的表面抗原决定簇的抗体的荧光基团给悬浮中的感兴趣的微粒染色、用适当波长的光激发染色微粒、以及分析各个微粒/细胞的发光(emission)。除了外周涂片或离心分离之外，上述所有方法都要求滴涂精确的样本体积。样本体积的不精确将导致相关分析中同一数量的定量误差。除了离心方法之外，上述所有方法还都要求样本与一种或多种液体试剂或稀释剂混合，并且为了获得精确的结果还要求对仪器进行校准。在外周涂片的情况下，需要高度训练来正确地检查涂片。上述的许多方法产生大量的污染物，而处理这些污染物是昂贵的。另外，上述方法不适于确定其中红细胞和凝血细胞有核的鸟、爬行动物和鱼中的以及其中红细胞尺寸非常小并且可能与血小板混淆的某些哺乳动物中的全血计数(CBC)。
技术实现思路
根据本专利技术的一方面，提供了一种用于对基本上未稀释的血液样本中的血小板进行计数的方法。该方法包括以下步骤：1)将样本滴落在适于静止地保持样本以进行分析的分析腔室内，该腔室由第一平板和第二平板限定，这两个平板都是透明的；2)在样本中掺合染色剂，该染色剂用于使血小板在曝光于一个或多个预定的第一波长的光时发出荧光；3)以第一波长的光照射包含血小板的样本的至少一部分；4)对所述的样本的至少一部分成像，包括产生表示来自血小板的荧光发射的图像信号，该荧光发射具有强度；5)使用图像信号，通过血小板的荧光发射来识别血小板；6)确定在所述的样本的至少一部分内识别出的单独的血小板的平均荧光发射强度值；7)使用所述的样本的至少一部分内的血小板凝块的荧光发射、面积、形状和粒度中的一个或多个来识别所述的样本的至少一部分内的血小板凝块；以及8)使用为样本内的单独的血小板确定的平均荧光发射强度值，对每个血小板凝块内的血小板进行计数。本专利技术的优点在于本专利技术提供了血液样本内的精确血小板计数。大多数现有技术的血液分析仪通过假设样本内一定大小的组分实际上是血小板来对样本内的血小板数目进行计数。因此，大于正常尺寸血小板的巨血小板和血小板凝块可能在计数中没有被考虑并且可能被作为白细胞来计数。作为结果的较低血小板计数能够被错误地解释为血小板减少症。本专利技术识别巨血小板和血小板凝块，并且对血小板凝块内的血小板进行计数。因此，提供了一种比大多数现有技术的自动血液分析仪所提供的更加精确的血小板计数，并且避免了会导致错误的低血小板计数和错误的高白细胞计数的将巨血小板和血小板凝块计数为白细胞。本专利技术的另一个优点在于本专利技术能够识别和计数血样样本内的巨血小板。本专利技术的另一个优点在于本专利技术可以用来利用极少的样本量来确定血液样本的特性，该极少的样本量可以通过毛细管穿刺从病人直接获得，从而使得本专利技术对现场护理应用来说更加有用，或者可以根据需要从静脉样本获得该极少的样本量。本专利技术的方法的另一个优点在于其对于外部和内部流体都适用，并且与重力和方位无关，因此该方法适于用在手持式设备中和微重力条件下。通过下面提供的包括附图的详细描述，本专利技术的方法及与其有关的优点将更加显然。附图说明图1至图4是可用在本专利技术的方法中的分析腔室的截面示意图。图5是具有多个分析腔室的条带的示意平面图。图6是具有分析腔室的一次性容器的示意平面图。图7是具有分析腔室的一次性容器的示意截面图。图8是可与本专利技术的方法一起使用的分析设备的示意图。图9是以第一强度放大来成像的包含掺合有吖啶橙荧光染料的基本上未稀释的血液样本的腔室的一部分的彩色图像，其中基本上未稀释的血液样本已被从吸收了该染料的组分(例如，WBC、血小板等)产生荧光发射的波长的光照射过。图10是以大于第一强度放大的第二强度放大来成像的图9所示的彩色图像。图11是包含掺合有吖啶橙荧光染料的基本上未稀释的血液样本的腔室的一部分的彩色图像，其中基本上未稀释的血液样本已被从组分产生荧光发射的波长的光照射过，其示出了WBC、血小板凝块和血小板的不同的发光分布(emissionprofile)。图12是包含掺合有吖啶橙荧光染料的基本上未稀释的血液样本的腔室的一部分的彩色图像，其中基本上未稀释的血液样本已被从组分产生荧光发射的波长的光照射过，其示出了血小板、巨血小板和网状细胞的不同的发光分布。图13是包含掺合有吖啶橙荧光染料的基本上未稀释的血液样本的腔室的一部分的彩色图像，其中基本上未稀释的血液样本已被从组分产生荧光发射的波长的光照射过，其示出了血小板和网状细胞的不同的发光分布。该图像还包括根据图像编辑的WBC和在背景下微弱可见的RBC。图14是图13所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于对血液样本中的血小板进行计数的方法，包括：将样本和一定量的染色剂滴落在分析腔室内，其中，染色剂被血小板吸收，并且在曝光于一个或多个预定的第一波长的光时是可识别的；用第一波长的光照射包含血小板的样本的至少一部分；对所述的样本的至少一部分成像，包括产生表示被血小板吸收的染色剂的第一图像信号；使用第一图像信号来识别血小板；以及对样本中的血小板进行计数。

【技术特征摘要】
2008.03.21 US 61/038,5541.一种用于对血液样本中的血小板进行计数的方法，包括：将样本和一定量的染色剂滴落在分析腔室内，其中，染色剂被血小板吸收，并且在曝光于一个或多个预定的第一波长的光时是可识别的；用第一波长的光照射包含血小板的样本的至少一部分；对所述的样本的至少一部分成像，包括产生表示被血小板吸收的染色剂的第一图像信号；使用第一图像信号来识别血小板；以及对样本中的血小板进行计数。2.如权利要求1所述的方法，其中在暴露于所述一个或多个预定的第一波长的光时，在血小板内吸收的染色剂发出荧光，并且，所述第一图像信号表示来自血小板的荧光发射。3.如权利要求1所述的方法，其中在所述成像步骤期间，所述血液样本静止地停留在分析室内。4.如权利要求1所述的方法，其中所述血液样本实质上未被稀释。5.如权利要求1所述的方法，其中所述血液样本是全血。6.如权利要求1所述的方法，其中所述计数步骤包括以下中的一者或两者：对单独停留在样品内的血小板进行计数，和对一个或多个血小板凝块内的血小板进行计数。7.如权利要求6所述的方法，还包括：确定样本内识别的各个血小板的代表面积，其中对一个或多个血小板凝块内的血小板进行计数的步骤进一步包括使用样本内的各个血小板的代表面积。8.如权利要求1所述的方法，还包括：识别样本内的巨血小板。9.如权利要求8所述的方法，其中通过荧光发射、面积和形状中的一个或多个来识别样本内的巨血小板。10.如权利要求1所述的方法，其中识别血小板的步骤包括：确定样本内识别的各个血小板的代表面积，并将所述代表面积与代表巨血小板的面积的值进行比较。11.如权利要求1所述的方法，还包括步骤：以一个或多个第二波长的光来照射包含血小板的样本的所述至少一部分；...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·C·沃德洛，罗伯特·A·莱文，尼滕·V·拉尔普里亚，
申请(专利权)人：艾博特健康公司，
类型：发明
国别省市：美国,US