一种里氏木霉微生物培养方法技术

本发明专利技术公开了一种里氏木霉微生物培养方法，其特征在于产酶培养基包括纤维素衍生物作为碳源。与现有技术相比，本发明专利技术的促进里氏木霉合成纤维素酶的方法，在以羟丙基甲基纤维素为碳源的培养基中，添加微量的PEG，无需额外的通风工序，可有效促进里氏木霉合成纤维素酶，具有很好的产业实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种里氏木霉微生物培养方法
本专利技术涉及微生物
，具体的涉及一种里氏木霉微生物培养方法。
技术介绍
纤维素酶是一种复合酶，主要有内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶组成，三种组分协同作用可将纤维素大分子降解为葡萄糖。微生物特别是真菌具有产生这种复合酶的能力，其中产酶活力较强的有木霉、曲霉、根霉和青霉等，尤以木霉属菌种居多。目前，研究得最多的是里氏木霉(Trichodermareesei)，它具有降解纤维素和半纤维素的完全酶系，能产生8种不同的纤维素酶组分。丝状真菌里氏木霉(Trichodermareesei)是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌(Hypocreajecorina)的无性型,隶属于丛梗孢目(Moniliales)木霉属(Penicillium)。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶——纤维二糖水解酶I(cellobiohydrolaseI)，由单拷贝基因编码，其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50％。但是，里氏木霉的纤维素酶产率不高，如何提高其纤维素酶产率，一直是科技工作者关注的难题。中国石油化工股份有限公司的专利申请CN101250485A公开了一种采用调节通风量控制溶液溶解氧浓度，从而提高里氏木霉(Trichodermareesei)纤维素酶产率的方法。其特征在于产酶过程中调节通风量，使产酶主要阶段溶解氧浓度控制在20％～30％，不但使得产酶液溶解氧浓度不低于临界浓度，而且降低了尾气中二氧化碳浓度，有利于菌体生长。采用这种方法产酶，与固定通风量产酶相比较，滤纸酶活可提高30％，产酶时间可缩短14％。但是上述方法存在需要额外调节通风量的工序，不可避免的涉及到设备改造以及能源消耗的问题。南京林业大学的专利申请CN105462946A公开了一种促进里氏木霉合成β-甘露聚糖酶的方法，在以微晶纤维素为碳源的发酵培养基中，添加半乳甘露聚糖促进里氏木霉合成β-甘露聚糖酶。本专利技术在以微晶纤维素为碳源的培养基中，添加微量的半乳甘露聚糖，在半乳甘露聚糖添加量≤0.6g/L范围内，可有效促进里氏木霉β-甘露聚糖酶的合成。上述方法以促进促进里氏木霉合成β-甘露聚糖酶为目标，而没有考虑如何促进纤维素酶的整体产量和酶活性。到目前为止，寻找合适的提高纤维素酶产量的里氏木霉培养参数和条件，是国内外同行的重要研究方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种里氏木霉微生物培养方法。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：本专利技术一方面涉一种里氏木霉微生物培养方法，其特征在于产酶培养基包括纤维素衍生物作为碳源。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的纤维素衍生物为羟丙基甲基纤维素。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述羟丙基甲基纤维素在产酶培养基中的含量为5～15g/L。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的产酶培养基中还包括PEG(聚乙二醇)。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述产酶培养基中PEG的含量为≤10g/L。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的里氏木霉微生物培养方法所得到的纤维素酶的滤纸酶活力为3.0IU/mL以上；优选为3.2IU/mL以上；进一步优选为3.5IU/mL以上。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的促进里氏木霉合成纤维素酶的方法，在以羟丙基甲基纤维素为碳源的培养基中，添加微量的PEG，无需额外的通风工序，可有效促进里氏木霉合成纤维素酶，具有很好的产业实用性。附图说明图1：PEG添加量对于纤维素酶的产量的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定，本专利技术中所用的方法及其相关的试剂，可以有其他可选择和替代方案，能够达到相同技术结果即可。实施例1产酶培养基：羟丙基甲基纤维素10g/L，葡萄糖5g/L，60mLMandels营养盐，培养基用柠檬酸缓冲液调节pH值为4.5-5.0。发酵产酶：50mL产酶培养基置于250mL带棉塞的三角瓶中，里氏木霉接种量为10％。置于28-30℃、170转/分的恒温摇床中培养4天。培养液于3000转/分下离心10min。取上清测定纤维素酶的活力。结果表明，里氏木霉以羟丙基甲基纤维素为碳源发酵制备纤维素酶，纤维素酶滤纸酶活力为3.5IU/mL，与CN101250485A公开的方法所得到的酶活力相当。实施例2产酶培养基：羟丙基甲基纤维素10g/L，葡萄糖5g/L，PEG，60mLMandels营养盐，培养基用柠檬酸缓冲液调节pH值为4.5-5.0。在上述产酶培养基中分别添加PEG2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L、12g/L和14g/L。取上清测定纤维素酶的活力，结果如图1所示。结果表明，里氏木霉以羟丙基甲基纤维素为碳源发酵制备纤维素酶，在培养基中添加适量(≤10g/L)PEG可以促进里氏木霉合成纤维素酶；但添加较多的PEG则不利于里氏木霉纤维素酶的合成。以上具体实施方式仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。以上所述是本专利技术的优选实施例，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种里氏木霉微生物培养方法，其特征在于产酶培养基包括纤维素衍生物作为碳源。

【技术特征摘要】
1.一种里氏木霉微生物培养方法，其特征在于产酶培养基包括纤维素衍生物作为碳源。2.根据权利要求1所述的培养方法，所述的纤维素衍生物为羟丙基甲基纤维素。3.根据权利要求2所述的培养方法，所述羟丙基甲基纤维素在产酶培养基中的含量为5～15g/L。4.根据权利要求2所述的培养方法，所述的产酶培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：周玉珍，汪伟，徐建明，赵利琴，鄢贵龙，
申请(专利权)人：淮阴师范学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32