一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法技术

本发明专利技术公开了一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法及应用。采用的技术方案包括：中药固体发酵培养基制备，液体培养基制备，液体母种培养，共发酵转化，发酵物干燥、超微粉碎。以本发明专利技术的技术方案培养的菌质含有黄芪或三七、中国被毛孢及蝙蝠蛾拟青霉的所有活性成分，在共发酵过程，中药材能激活沉默的真菌次级代谢生物合成基因簇的表达，既模拟天然冬虫夏草的形成过程，又对黄芪和三七进行了转化，因此以本发明专利技术的技术方案培养的菌质高效、稳定，共发酵物具很好的免疫增强作用，疗效好，远优于简单的配伍复方组合。

【技术实现步骤摘要】
一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法
本专利技术涉及微生物培养与转化领域，具体涉及一种冬虫夏草相关真菌共发酵转化生产黄芪三七菌质的方法。
技术介绍
冬虫夏草是我国特有的传统名贵滋补中药材，形成机制复杂。天然冬虫夏草周围环境(菌膜、周围土壤)微生物多样性非常丰富，构成一个复杂的微生态系统，其中中国被毛孢是冬虫夏草的无性型，蝙蝠蛾拟青霉是天然冬虫夏草形成的重要伴生真菌，在冬虫夏草品质形成中起着重要作用，二者在冬虫夏草成熟过程中相互竞争，在不同时期发生着动态变化。蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢菌丝体发酵物均显示广泛的药理活性，如降血脂、止咳祛痰、镇静、解痉等，发酵菌丝体均与冬虫夏草有相似的化学成分和药理作用。但中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的化学成分指纹谱均不能与冬虫夏草的成分完全重叠，与中国被毛孢相比，蝙蝠蛾拟青霉菌丝体与野生冬虫夏草的指纹谱更相似。天然的冬虫夏草仅分布于我国西藏及邻近省份海拔约4000-5000米的高寒地带和雪山草原，具有严格的寄生性和特殊的生长地理环境，产量有限，药源紧缺，为满足市场需求，多以液体深层发酵生产菌丝体替代野生冬虫夏草，但目前，市场上冬虫夏草相关保健品大部分是由单一菌种蝙蝠蛾拟青霉发酵所得，或者由冬虫夏草本身或其菌丝体与其他中药材进行简单的混合制得。利用药用真菌发酵中药材获得菌物药是创制新药的重要途径之一，也是中药炮制的新思路和研究热点。在发酵过程中，药用真菌分泌的酶类将使中药材的有效成分得到分解、转化、催化及结构修饰，产生新的活性成分，达到增加药效、产生新的药味性能、减少原药材的毒性等作用。中药材自身蕴含的丰富活性成分，亦能激活真菌沉默次级代谢生物合成基因簇的表达，产生结构新颖、活性独特的先导化合物，很多发酵后的药物在临床取得了较好的疗效。目前，市面上还没有以黄芪、三七等中药材作为固体发酵基质，以中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉两种真菌进行共培养发酵的方法来制得相关中药菌物药的方法。
技术实现思路
针对现有技术中所存在的不足，本专利技术提供了一种冬虫夏草相关真菌共发酵转化生产黄芪三七菌质的方法，包括以下步骤，S01、中药固体发酵培养基的制备：称取燕麦10～15g、黄芪5～10g、三七5～10g、蜂蛹粉2～5g、大豆粉6～10g、玉米粉3～5g和麸皮2～6g，将上述原料混合后用粉碎机粉碎，过10目筛后，置于干净的容器中，加入60～75ml水，放入高压灭菌锅121℃，灭菌30min，取出后静置，冷却得到中药固体发酵培养基待用；S02、共发酵转化：先以斑点式接种法将由液体培养基培养好的中国被毛孢液体母种接种到到制备好的中药固体发酵培养基，于15℃蓝光定时照射，单独培养至少30天，期间定期进行固体发酵干扰，当中国被毛孢的菌丝生长范围处于45～55％培养基时，再以斑点式接种法将由液体培养基培养好的蝙蝠蛾拟青霉母种接种到所述中国被毛孢的菌丝生长范围约为45～55％的培养基中，15℃蓝光定时照射，共发酵培养，定期进行固体发酵干扰，至整个中药固体发酵培养基上布满菌丝体，且在中药固体发酵培养基底部出现黄色液体后，即完成共发酵培养过程，最后将培养器皿内所有物质作为共发酵产物进行进一步处理即得到所需菌质产品。相比于目前市面上流行的单一菌种发酵或冬虫夏草等相关药材的简单拼配混合，本专利技术具有如下有益效果：⑴两种菌种的共同发酵能够模拟天然冬虫夏草的形成过程，使所得菌质产品的有效活性成分与天然冬虫夏草更接近，而在两种菌种的共培养过程中加入中药成分后，能激活中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉次级代谢生物沉默的合成基因簇的表达，使得菌质产品的药效比普通野生的冬虫夏草更好；⑵在发酵过程中，两菌种分泌的各种酶类可使黄芪、三七的有效成分得到分解与转化，并得到新的活性成分以产生新的药味性能，使得药效进一步增强。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创新特征、达成目的与作用更加清楚及易于了解，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步阐述：本专利技术提供了一种冬虫夏草相关真菌共发酵转化生产黄芪三七菌质的方法，步骤如下:1.配置中药固体发酵培养基：燕麦10～15g、黄芪5～10g、三七5～10g、蜂蛹粉2～5g、大豆粉6～10g、玉米粉3～5g和麸皮2～6g，将上述原料混合后用粉碎机粉碎，过10目筛后，置于干净的1000mL烧杯中，加入60～75ml水，高压灭菌锅121℃灭菌30min，取出后静置，冷却得到中药固体发酵培养基待用；培养基配方中中药成分的加入使真菌能够在繁殖发酵过程中对中药进行生物转化，具体有益效果会在步骤4中写明。2.配置液体培养基：称取蛋白胨3～3.3g、酵母膏2～2.2g、葡萄糖16～19g，磷酸二氢钾1.8～2.2g，硫酸镁0.2～0.4g置于干净的烧杯中，加1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌至上述全物质溶解完全；调节溶液pH6.8～7.2；取数个洁净的250mL锥形瓶中，每个锥形瓶倒入100mL培养液，将装好的锥形瓶放入高压灭菌锅121℃灭菌30min，取出后静置，冷却得到液体培养基待用；3.液体母种培养：取在15℃下培养60～90天的中国被毛孢菌落，用手术刀切成中国被毛孢菌落小块，将3～8g中国被毛孢菌落小块移入盛有100mL液体培养基的250mL锥形瓶中，于15℃低速振荡培养至少21天，得中国被毛孢的液体母种；取在25℃下培养25～30天的蝙蝠蛾拟青霉菌落，用手术刀切成蝙蝠蛾拟青霉菌落小块，将3～8g蝙蝠蛾拟青霉菌落小块移入盛有100mL液体培养基的250mL锥形瓶中，于25℃低速振荡培养至少10天，得蝙蝠蛾拟青霉液体母种。中国被毛孢需要低温培养，蝙蝠蛾拟青霉常温培养即可，为保证液体母种的质量，将二者分开进行不同温度下的培养，低速震荡的方法在不干扰菌种繁殖的情况下加速了菌种与液体培养基的混合，使菌种繁殖更快，缩短液体母种培养时间。4.共发酵转化：先以斑点式接种法将由液体培养基培养好的中国被毛孢液体母种接种到制备好的中药固体发酵培养基，于15℃蓝光定时照射，单独培养至少30天，期间定期进行固体发酵干扰，当中国被毛孢的菌丝生长范围处于45～55％培养基时，再以斑点式接种法将由液体培养基培养好的蝙蝠蛾拟青霉母种接种到到所述中国被毛孢的菌丝生长范围约为45～55％的培养基中，15℃蓝光定时照射，共发酵培养，定期进行固体发酵干扰，至整个中药固体发酵培养基上布满菌丝体，且在中药固体发酵培养基底部出现黄色液体后，即完成共发酵培养过程，最后将培养器皿内所有物质作为共发酵产物进行进一步处理即得到所需菌质产品。此步为本专利技术的关键步骤，既模拟天然冬虫夏草的形成过程，又利用真菌对中药进行生物转化，对天然冬虫夏草的形成过程进行模拟，使所得菌质产品的有效活性成分与天然冬虫夏草更接近，而培养基中的中药成分能激活两菌种次级代谢生物沉默的合成基因簇的表达，使得所得菌质产品的药效比普通野生的冬虫夏草更好，同时，在发酵过程中，两菌种分泌的酶类可使黄芪、三七的有效成分得到分解与转化，减少原药材的毒性，并得到新的活性成分以产生新的药味性能，使得药效进一步增强。5.发酵物干燥粉碎：将上一步得到的共发酵产物于真空低温干燥，再精细超微粉碎，达到1000目，压片机压片或灌装胶囊，得到最终的破壁菌质产品。以上所有相关工作均在无菌条件下展开，保证了冬虫夏草相关菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法，其特征在于，包括以下步骤，S01、中药固体发酵培养基的制备：称取燕麦10～15g、黄芪5～10g、三七5～10g、蜂蛹粉2～5g、大豆粉6～10g、玉米粉3～5g和麸皮2～6g，将上述原料混合后用粉碎机粉碎，过10目筛后，置于干净的容器中，加入60～75ml水，放入高压灭菌锅121℃，灭菌30min，取出后静置，冷却得到中药固体发酵培养基待用；S02、共发酵转化：先以斑点式接种法将由液体培养基培养好的中国被毛孢液体母种接种到制备好的中药固体发酵培养基，于15℃蓝光定时照射，单独培养至少30天，期间定期进行固体发酵干扰，当中国被毛孢的菌丝生长范围处于45～55％培养基时，再以斑点式接种法将由液体培养基培养好的蝙蝠蛾拟青霉母种接种到所述中国被毛孢的菌丝生长范围约为45～55％的培养基中，15℃蓝光定时照射，共发酵培养，定期进行固体发酵干扰，至整个中药固体发酵培养基上布满菌丝体，且在中药固体发酵培养基底部出现黄色液体后，即完成共发酵培养过程，最后将培养器皿内所有物质作为共发酵产物进行进一步处理即得到所需菌质产品。

【技术特征摘要】
1.一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法，其特征在于，包括以下步骤，S01、中药固体发酵培养基的制备：称取燕麦10～15g、黄芪5～10g、三七5～10g、蜂蛹粉2～5g、大豆粉6～10g、玉米粉3～5g和麸皮2～6g，将上述原料混合后用粉碎机粉碎，过10目筛后，置于干净的容器中，加入60～75ml水，放入高压灭菌锅121℃，灭菌30min，取出后静置，冷却得到中药固体发酵培养基待用；S02、共发酵转化：先以斑点式接种法将由液体培养基培养好的中国被毛孢液体母种接种到制备好的中药固体发酵培养基，于15℃蓝光定时照射，单独培养至少30天，期间定期进行固体发酵干扰，当中国被毛孢的菌丝生长范围处于45～55％培养基时，再以斑点式接种法将由液体培养基培养好的蝙蝠蛾拟青霉母种接种到所述中国被毛孢的菌丝生长范围约为45～55％的培养基中，15℃蓝光定时照射，共发酵培养，定期进行固体发酵干扰，至整个中药固体发酵培养基上布满菌丝体，且在中药固体发酵培养基底部出现黄色液体后，即完成共发酵培养过程，最后将培养器皿内所有物质作为共发酵产物进行进一步处理即得到所需菌质产品。2.如权利要求1所述的一种冬虫夏草相关真菌共发酵生产黄芪三七菌质的方法，其特征在于，还包括在所述S02步骤之前的制备中国被毛孢及蝙蝠蛾拟青霉的液体母种步骤，其具体过程为：液体培养基的制备：称取蛋白胨3～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：张传博，王艳丽，杜静，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52