用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法技术

本发明专利技术属于日用品技术领域，具体是涉及一种用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法。用0.02mg/mLTTC琼脂培养基快速评价日化产品的抑菌效果，其将48h的抑菌效果评价实验缩短到24h报出结果，具有快速检测的意义。本发明专利技术采用的方法步骤为（1）不同的灭菌方式对TTC的影响；（2）不同浓度TTC显色培养基对阳性菌的影响；（3）TTC显色培养基在日化产品抑菌效果检测中的应用。本发明专利技术根据TTC可被活细胞中的脱氢酶还原生成三苯甲臜类物质而沉积,使细胞显示出相应的红色或紫色的原理，在24h培养观察的回收菌数与48h培养观察的回收菌数结果无明显差异。

Rapid Detection of Bacteriostatic Effect of Daily Chemicals by TTC Agar Medium

The invention belongs to the technical field of daily necessities, in particular to a method for rapidly detecting the bacteriostatic effect of daily chemical products with TTC agar medium. 0.02mg/mLTTC agar medium was used to rapidly evaluate the bacteriostasis effect of daily chemical products. The 48-hour bacteriostasis evaluation experiment was shortened to 24 hours and the results were reported. It has the significance of rapid detection. The method and steps of the invention are: (1) the influence of different sterilization methods on TTC; (2) the influence of different concentration of TTC color medium on positive bacteria; (3) the application of TTC color medium in the detection of bacteriostatic effect of daily chemical products. According to the principle that TTC can be reduced to triphenyltoluene by dehydrogenase in living cells and deposited, the cells show the corresponding red or purple color. There is no significant difference in the number of recovered bacteria observed in 24 h culture and 48 h culture.

【技术实现步骤摘要】
用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法一、
：本专利技术属于日用品
，具体是涉及一种用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法。二、
技术介绍
：洗涤剂抑菌性能测试方法主要为GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》、QB/T2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》和卫法监发[2002]282号《消毒技术规范》[2002年版]。采用悬液法对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌进行抑菌性能测定时，三种方法均需在35℃±2℃培养48h计算回收菌数。平板计数法计数准确、可靠度高、成本低，但因需要进行细菌培养，检测耗时长、效率低。《化妆品安全技术规范》(2015版)菌落总数的检验方法中，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL，0.5％TTC溶液。实验发现此添加量对金黄色葡萄球菌有抑制生长现象。三、
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的提供一种日化产品抑菌效果快速检测方法，用0.02mg/mLTTC琼脂培养基快速评价日化产品的抑菌效果，其将48h的抑菌效果评价实验缩短到24h报出结果，具有快速检测的意义。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法，其特征在于：所述的方法步骤为：S1.不同的灭菌方式对TTC的影响：配制质量百分比0.1％TTC溶液500mL，分装于3个螺口玻璃瓶中，分别采用单独避光高压灭菌，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基A；经0.45um微孔滤膜过滤除菌后，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基B；加入营养琼脂混匀高压灭菌制得培养基C；分别将培养基A、B、C与对照组营养琼脂培养基进行大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌回收菌数对比验证，确定配制培养基A的配制方法进行S2试验；S2.不同浓度TTC显色培养基对阳性菌的影响：按照培养基A的配制方法配制TTC系列梯度的营养琼脂5瓶，各瓶含TTC的浓度依次为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL；S3.按照QB/T2738-2012方法，无菌操作取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的24h新鲜培养物，分别制备阳性菌悬液；S4.吸取0.1mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀后，取混合液0.5mL加入到4.5mLPBS试管中，做梯度稀释，取其中2～3个稀释度的稀释液，吸取0.5mL置于灭菌平皿内,分别倾注S2中的5瓶营养琼脂中各2个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h，以营养琼脂培养的回收菌数作为对照，以平板菌落数在30～300的范围计数；吸取0.1mL的大肠埃希菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀后，取混合液0.5mL加入到4.5mLPBS试管中，做梯度稀释，取其中2～3个稀释度的稀释液，吸取0.5mL置于灭菌平皿内,分别倾注S2中的5瓶营养琼脂中各2个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h，以营养琼脂培养的回收菌数作为对照，以平板菌落数在30～300的范围计数，确定抑菌试验选用TTC的最佳使用浓度不超过0.02mg/mL；S5.选购市场上常见的含各种色素的日化洗涤剂产品，按照QB/T2738《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》的要求进行悬液法抑菌试验，TTC可被活细胞中的脱氢酶还原生成三苯甲臜类物质而沉积,使细胞显示出相应的红色或紫色,样品中所含的各种色素对TTC显色无干扰，24h即可观察结果。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和效果：本专利技术利用TTC可被活细胞中的脱氢酶还原生成三苯甲臜类物质而沉积,使细胞显示出相应的红色或紫色的原理，控制合理灭菌方式及TTC使用浓度，实现细菌的快速检测。所述方法简便快捷，检测结果稳定可靠。该专利技术方法所使用的显色试剂常见易得，所述方法操作简便，，容易通过肉眼判断。该方法可实现快速检测。四、附图说明：图1中为采用悬液法抑菌试验，①、②为不同时间培养的金黄色葡萄球菌，③、④为不同时间培养的大肠埃希菌，20h均可通过肉眼判断结果。图2为采用抑菌环法抑菌试验，在TTC显色培养基上抑菌圈清晰完整。五、具体实施方式下面结合具体的实施方式来对本专利技术的技术方案做进一步的限定：本专利技术通过研究选用0.02mg/mL氯化三苯四氮唑(简称TTC)添加到营养琼脂培养基中，应用到日化产品的抑菌效果评价中，期望能快速测定抑菌效果，以提高配方开发的效率。用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法，所述的检测方法的步骤为：S1.不同的灭菌方式对TTC的影响：配制质量百分比0.1％TTC溶液500mL，分装于3个螺口玻璃瓶中，分别采用单独避光高压灭菌，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基A；经0.45um微孔滤膜过滤除菌后，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基B；加入营养琼脂混匀高压灭菌制得培养基C；分别将培养基A、B、C与对照组营养琼脂培养基进行大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌回收菌数对比验证，确定配制培养基A的配制方法进行S2.试验；所述的对照组为营养琼脂；S2.不同浓度TTC显色培养基对阳性菌的影响：按照培养基A的配制方法配制TTC系列梯度的营养琼脂5瓶，各瓶含TTC的浓度依次为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL；S3按照QB/T2738-2012方法，无菌操作取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的24h新鲜培养物，分别制备阳性菌悬液；S4.吸取0.1mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀；将试管按需要数量分别排列于试管架上，每管加入18.0mLPBS液，各组由左向右，逐管标上10-1、10-2、10-3.将菌悬液样本在涡旋仪上混合20s，随即吸取2.0mL加入到10-1管内，如此类推，直至最后一管。选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为30cfu～300cfu者为宜)，吸取其中混合均匀的悬液0.5mL加于无菌平皿内,分别倾注S2中的5瓶营养琼脂各5个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h。吸取0.1mL的大肠埃希菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀；将试管按需要数量分别排列于试管架上，每管加入18.0mLPBS液，各组由左向右，逐管标上10-1、10-2、10-3.将菌悬液样本在涡旋仪上混合20s，随即吸取2.0mL加入到10-1管内。如此类推，直至最后一管。选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为30cfu～300cfu者为宜)，吸取其中混合均匀的悬液0.5mL加于无菌平皿内,分别倾注步骤2)中的5瓶营养琼脂各5个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h，确定抑菌试验选用TTC的最佳使用浓度不超过0.02mg/mL。所述的对照组为营养琼脂；验证方法：1实验试剂及设备1.1主要试剂2,3,5—三苯基氯化四氮唑，又称氯化三苯基四氮唑[triphenyltet2razoliumchloride(TTC)]、红四唑等，化学式C19H15ClN4[2]，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)，自配；标准硬水(硬度342mg/L)，自配；营养琼脂培养基，生化试剂，北京路桥技术有限公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法，其特征在于：所述的方法步骤为：S1.不同的灭菌方式对TTC的影响：配制质量百分比0.1％TTC溶液500mL，分装于3个螺口玻璃瓶中，分别采用单独避光高压灭菌，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基A；经0.45um微孔滤膜过滤除菌后，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基B；加入营养琼脂混匀高压灭菌制得培养基C；分别将培养基A、B、C与对照组营养琼脂培养基进行大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌回收菌数对比验证，确定配制培养基A的配制方法进行S2试验；S2.不同浓度TTC显色培养基对阳性菌的影响：按照培养基A的配制方法配制TTC系列梯度的营养琼脂5瓶，各瓶含TTC的浓度依次为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL；S3.按照QB/T 2738‑2012方法，无菌操作取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的24h新鲜培养物，分别制备阳性菌悬液；S4.吸取0.1mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀后，取混合液0.5mL加入到4.5mLPBS试管中，做梯度稀释，取其中2～3个稀释度的稀释液，吸取0.5mL置于灭菌平皿内,分别倾注S2中的5瓶营养琼脂中各2个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h，以营养琼脂培养的回收菌数作为对照，以平板菌落数在30～300的范围计数；吸取0.1mL的大肠埃希菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀后，取混合液0.5mL加入到4.5mLPBS试管中，做梯度稀释，取其中2～3个稀释度的稀释液，吸取0.5mL置于灭菌平皿内,分别倾注S2中的5瓶营养琼脂中各2个平皿，摇匀待冷却后翻转平皿至36℃±1℃培养48h，以营养琼脂培养的回收菌数作为对照，以平板菌落数在30～300的范围计数，确定抑菌试验选用TTC的最佳使用浓度不超过0.02mg/mL；S5.选购市场上常见的含各种色素的日化洗涤剂产品，按照QB/T 2738《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》的要求进行悬液法抑菌试验，TTC可被活细胞中的脱氢酶还原生成三苯甲臜类物质而沉积,使细胞显示出相应的红色或紫色,样品中所含的各种色素对TTC显色无干扰，24h即可观察结果。...

【技术特征摘要】
1.用TTC琼脂培养基快速检测日化产品抑菌效果的方法，其特征在于：所述的方法步骤为：S1.不同的灭菌方式对TTC的影响：配制质量百分比0.1％TTC溶液500mL，分装于3个螺口玻璃瓶中，分别采用单独避光高压灭菌，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基A；经0.45um微孔滤膜过滤除菌后，再与50℃营养琼脂混匀制得培养基B；加入营养琼脂混匀高压灭菌制得培养基C；分别将培养基A、B、C与对照组营养琼脂培养基进行大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌回收菌数对比验证，确定配制培养基A的配制方法进行S2试验；S2.不同浓度TTC显色培养基对阳性菌的影响：按照培养基A的配制方法配制TTC系列梯度的营养琼脂5瓶，各瓶含TTC的浓度依次为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL；S3.按照QB/T2738-2012方法，无菌操作取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的24h新鲜培养物，分别制备阳性菌悬液；S4.吸取0.1mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，加入到含5.0mLPBS的试管中，迅速混匀后，取混合液0.5mL加入到4...

【专利技术属性】
技术研发人员：于文，谷爱军，
申请(专利权)人：西安开米股份有限公司，上海开米科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61