抗-TNFRSF25抗体制造技术

公开了抗‑TNFRSF25抗体及其变体，包括与氨基酸48‑71区域中的表位结合的那些。还设想了所述抗体在研究、诊断和治疗应用中的用途。

Anti-TNFRSF25 antibody

Anti-TNFRSF25 antibodies and their variants, including those binding to epitopes in the amino acid 48 71 region, are disclosed. The application of the antibody in research, diagnosis and treatment is also envisaged.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-TNFRSF25抗体相关申请的交叉引用本申请要求2016年6月9日提交的美国临时申请序列号62/348,009的优先权的权益。
该文献涉及抗TNFRSF25抗体，及其在研究、治疗和诊断目的中的用途。
技术介绍
肿瘤坏死因子受体超家族成员25(TNFRSF25)是TNF-受体超家族成员，其优先由活化和经历抗原的T淋巴细胞表达。TNFRSF25被其配体TL1A(也称为TNFSF15)活化，其在抗原呈递细胞中和Toll样受体或Fc受体活化后的一些内皮细胞中被快速上调。TNFRSF25可刺激NF-κB活性，并且还可刺激胱天蛋白酶活化以调节细胞凋亡(Bodmer等，Immunity6(1):79-88,1997和Kitson等，Nature384(6607):372-375,1996)。393个氨基酸长的人TNFRSF25蛋白的结构组织与TNF受体1(TNFR1)最同源。TNFRSF25的细胞外结构域包括四个富含半胱氨酸的结构域，并且细胞质区域含有已知凋亡信号的死亡结构域。选择性剪接产生多种不同的TNFRSF25同种型，其中大多数是潜在的分泌分子。TNFRSF25基因在B细胞和T细胞中的选择性剪接在T细胞活化时遇到程序改变，其主要产生全长的膜结合同种型，并且被认为参与控制由T细胞活化诱导的淋巴细胞增殖。TNFRSF25的活化依赖于T细胞受体的先前接合。在TNARSF25与TL1A结合后，TNFRSF25信号传导增加T细胞对内源性IL-2的敏感性，并增强T细胞增殖。由于TNFRSF25的活化是T细胞受体依赖性的，TNFRSF25的体内活性对遇到同源抗原的T细胞是特异性的。在静止时，并且当没有潜在的自身免疫时，大多数经常遇到同源抗原的T细胞是FoxP3+调节性T细胞。在没有任何其它外源信号的情况下刺激TNFRSF25，在5天内刺激FoxP3+调节性T细胞从所有CD4+T细胞的8-10％的基线至所有CD4+T细胞的35-40％的高度特异性增殖(Schreiber等，JClinInvest120(10):3629-3640,2010)。TNFRSF25的治疗性激动剂可以用于刺激Treg扩增，其可在哮喘、同种异体实体器官移植和眼角膜炎的实验模型中减轻炎症(Schreiber等，同上，Reddy等，JVirol86(19):10606-10620,2012；和Wolf等，Transplantation94(6):569-574,2012)。类似地，因为TNFRSF25活化是抗原依赖性的，TNFRSF25与自身抗原或疫苗抗原的共刺激可分别导致免疫病理学恶化或增强的疫苗刺激免疫(Schreiber等，JImmunol189(7):3311-3318,2010)。
技术实现思路
本文至少部分基于靶向TNFSF25内特定表位的抗体的开发。在一些实施方案中，抗体可以在物种之间交叉反应。例如，在一些实施方案中，本文提供了可以以在彼此的100倍以内(例如，10倍以内)的Kd值与啮齿类动物和人TNFRSF25多肽结合的抗体。在一些情况下，本文描述的抗体能够引发与TL1A(例如，啮齿类动物或人TL1A)与TNFRSF25结合的信号传导活性一致的信号传导事件。在一些实施方案中，抗体能够与人TNFRSF25的氨基酸C48-L71区域中的表位结合。例如，抗体可以与氨基酸P64-T69区域中的表位特异性结合。本文还至少部分地基于靶向TNFRSF25的亲和力成熟抗体的开发。与亲本抗-TNFRSF25抗体相比，亲和力成熟的抗体对TNFRSFS25具有增强的亲和力，或者与亲本抗-TNFRSF25抗体相比，亲和力成熟抗体可具有增强的活性，或者与亲本抗-TNFRSF25抗体相比，亲和力成熟抗体可具有增强的TNFRSF25亲和力和增强的活性。因此，在第一方面，本文的特征在于抗-TNFRSF25抗体或其抗原结合片段。抗体或抗体片段可包括(i)含有重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中重链CDR1序列为GFTFSNHDLN(SEQIDNO:12)，重链CDR2序列为YISSASGLISYADAVRG(SEQIDNO:14)；以及重链CDR3序列为DPAYTGLYALDF(SEQIDNO:26)；和(ii)含有轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中轻链CDR1序列为TLSSELSWYTIV(SEQIDNO.25)，轻链CDR2序列为LKSDGSHSKGD(SEQIDNO:21)以及轻链CDR3序列为CGAGYTLAGQYGWV(SEQIDNO:23)。抗体或抗体片段可包括(i)含有重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中重链CDR1序列为GFTFSNHDLN(SEQIDNO:12)，重链CDR2序列为YISSASGLISYADAVRG(SEQIDNO:14)；以及重链CDR3序列为DPPYSGLYALDF(SEQIDNO:16)；和(ii)含有轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中轻链CDR1序列为TLSSELSWYTIV(SEQIDNO:25)，轻链CDR2序列为LKSDGSHSKGD(SEQIDNO:21)，以及轻链CDR3序列为CGAGYTLAGQYGWV(SEQIDNO:23)。抗体或抗体片段可包括(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中重链CDR1序列为GFTFSNHDLN(SEQIDNO:12)，重链CDR2序列为YISSASGLISYADAVRG(SEQIDNO:14)；以及重链CDR3序列为DPAYTGLYALDF(SEQIDNO:26)；和(ii)包含轻链CDR1，CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中轻链CDR1序列为TLSSELSGFTIV(SEQIDNO:27)，轻链CDR2序列为LKSDGSHSKGD(SEQIDNO:21)，以及轻链CDR3序列为CGAGYTLANQYGWV(SEQIDNO:28)。抗体或抗原结合片段还可包含根据式(FW1)-(CDR1)-(FW2)-(CDR2)-(FW3)-(CDR3)-(FW4)并置在CDR之间的可变区框架(FW)序列，其中重链可变区中的可变区FW序列是重链可变区FW序列，并且其中轻链可变区中的可变区FW序列是轻链可变区FW序列。可变区FW序列可以是人。抗体或抗原结合片段还可含有人重链和轻链恒定区。恒定区可选自由人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4组成的组。恒定区是IgG1或IgG4。在以约0.1mg/kg至约50mg/kg的剂量向受试者施用抗体或抗原结合片段后，可以增加受试者中的肿瘤细胞凋亡。在另一方面，本文的特征在于含有药学上可接受的载体和本文公开的抗体或抗原结合片段的药物组合物。在另一方面，本文的特征在于含有上述药物组合物和至少一种用于治疗癌症的另外的剂的制品。所述至少一种另外的剂可以是靶向CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、Tim-3、TNFRSF4、TNFRSF9、TNFRSF18、CD27、CD39、CD47、CD73或CD278的剂，或者可以是A2A受体拮抗剂或TGF-β拮抗剂。所述至少一种另外的剂可以是B7家族共刺激分子、TNF受体超家族共刺激分子、疫苗组合物或化学治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗TNFRSF25抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段包含：(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列为GFTFSNHDLN(SEQ ID NO:12)，所述重链CDR2序列为YISSASGLISYADAVRG(SEQ ID NO:14)；以及所述重链CDR3序列为DPAYTGLYALDF(SEQ ID NO:26)或DPPYSGLYALDF(SEQ ID NO:16)；和(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列为TLSSELSWYTIV(SEQ ID NQ：25)，所述轻链CDR2序列为LKSDGSHSKGD(SEQ ID NO:21)，以及所述轻链CDR3序列为CGAGYTLAGQYGWV(SEQ ID NO:23)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.09 US 62/348,0091.一种抗TNFRSF25抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段包含：(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列为GFTFSNHDLN(SEQIDNO:12)，所述重链CDR2序列为YISSASGLISYADAVRG(SEQIDNO:14)；以及所述重链CDR3序列为DPAYTGLYALDF(SEQIDNO:26)或DPPYSGLYALDF(SEQIDNO:16)；和(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列为TLSSELSWYTIV(SEQIDNQ：25)，所述轻链CDR2序列为LKSDGSHSKGD(SEQIDNO:21)，以及所述轻链CDR3序列为CGAGYTLAGQYGWV(SEQIDNO:23)。2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其还包含根据式(FW1)-(CDR1)-(FW2)-(CDR2)-(FW3)-(CDR3)-(FW4)并置在CDR之间的可变区框架(FW)序列，其中所述重链可变区中的可变区FW序列是重链可变区FW序列，并且其中所述轻链可变区中的可变区FW序列是轻链可变区FW序列。3.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中所述可变区FW序列是人。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其还包含人重链和轻链恒定区。5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其中所述恒定区选自由以下组成的组：人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述恒定区是IgG1。7.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其中所述恒定区是IgG4。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中在以约0.1mg/kg至约50mg/kg的剂量向所述受试者施用所述抗体或抗原结合片段后，所述受试者中的肿瘤细胞凋亡增加。9.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和权利要求1至8中任一项的抗体或抗原结合片段。10.一种制品，其包含权利要求9的药物组合物和至少一种用于治疗癌症的另外的剂。11.根据权利要求10所述的制品，其中所述至少一种另外的剂是靶向CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、Tim-3、TNFRSF4、TNFRSF9、TNFRSF18、CD27、CD39、CD47、CD73或CD278的剂，或是A2A受体拮抗剂或TGF-β拮抗剂。12.根据权利要求10所述的制品，其中所述至少一种另外的剂是B7家族共刺激分子、TNF受体超家族共刺激分子、疫苗组合物或化学治疗剂。13.根据权利要求10所述的制品，其中所述至少一种另外的剂包括用于体外或受试者中的过继T细胞疗法的嵌合抗原受体转染的T细胞或扩增的肿瘤浸润淋性巴细胞。14.根据权利要求10所述的制品，其中可在自体T细胞疗法的体外制造过程中使用所述至少一种另外的剂。15.一种治疗受试者的肿瘤的方法，其包括向所述受试者施用一定量的权利要求9的组合物，所述组合物可有效诱导所述肿瘤中表达TNFRSF25的肿瘤细胞的凋亡。16.一种刺激受试者中CD8+T细胞增殖的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求9的组合物。17.根据权利要求16所述的方法，其中如通过抗原特异性CD8+T细胞的流式细胞术分析所测定的，与所述施用前的基线增殖水平相比，CD8+T细胞的增殖增加至少约20％。18.一种在受试者中引发免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求9的组合物。19.一种刺激受试者中CD4+FoxP3+调节性T细胞增殖的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求9的组合物。20.一种特异性结合人TNFRSF25的分离的单克隆抗体或其Fab片段，其中所述抗体或其Fab片段在与TNFRSF25结合后引发信号传导事件，所述信号传导事件与通过TL1A与TNFRSF25的结合所引发的信号传导事件一致，并且其中所述抗体与人TNFRSF25的氨基酸C48-L71区域中的表位结合。21.根据权利要求20所述的分离的单克隆抗体或Fab片段，其中所述抗体或片段与含有TNFRSF25的以下残基中的至少一个的表位结合：SEQIDNO:1的C48、R49、G50、C51、P52、A53、G54、H55、Y56、L57、K58、A59、P60、C61、T62、E63、P64、C65、G66、N67、S68、T69、C70或L71。22.根据权利要求20所述的分离的单克隆抗体或Fab片段，其中所述抗体或片段与TNFRSF25的结合阻断TL1A与TNFRSF25的结合。23.根据权利要求20所述的分离的单克隆抗体或Fab片段，其中所述抗体是人源化抗体。24.根据权利要求20所述的分离的单克隆抗体或Fab片段，其中所述抗体是人抗体。25.根据权利要求20所述的分离的单克隆抗体或Fab片段，其中所述抗体是IgG抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·H·施瑞博，J·T·哈特池恩斯，
申请(专利权)人：派立卡恩治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US