一株黑曲霉菌株及其制备的具有降血脂功效普洱茶制造技术

本发明专利技术属于微生物和食品生物技术领域，具体涉及一株黑曲霉菌株及其制备的具有降血脂功效普洱茶。本发明专利技术所述的黑曲霉，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.15884。本发明专利技术所述的黑曲霉菌株应用于普洱茶加工工艺中，在含有丰富木香的基础上，增添了清香气味，且能够在茶叶中代谢洛伐他汀类物质，由其制备得到普洱茶具有降血脂功能。

【技术实现步骤摘要】
一株黑曲霉菌株及其制备的具有降血脂功效普洱茶
本专利技术属于微生物和食品生物
，涉及一株黑曲霉0066-AN及其在普洱茶加工工艺中的应用，以及茶叶的降血脂功能。
技术介绍
普洱茶以云南大叶种晒青茶为原料制成，被认为是变化最丰富、最有故事的中国茶。普洱熟茶属于后发酵茶，是以晒青毛茶为原料经过一个月以上的渥堆发酵制得。普洱茶中的发酵微生物众多，包括黑曲霉、米曲霉、酵母等。黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中，在发酵工业中主要用于生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等。随着社会经济份发展，人民生活水平不断提高，饮食结构有了明显的改变，社会劳动强度普遍降低，促使肥胖病、脂肪肝、高脂血症等慢性疾病的发病率呈现明显上升趋势，且这一趋势在我国越来越突出。洛伐他汀是临床上应用较多，较为重要的降血脂药物。普洱茶中茶多酚等成分对具有合成洛伐他汀能力的真菌具有促进或抑制的作用，对于伏马曲霉能够抑制其代谢洛伐他汀的能力，而对于塔宾曲霉则能够促进其代谢洛伐他汀。
技术实现思路
为此，本专利技术主要解决的技术问题是提供了一株能够高效合成洛伐他汀的黑曲霉，并提供了一种制备具有降血脂功能普洱茶的方法。为解决上述技术问题，本专利技术所述的一株黑曲霉0066-AN，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.15884。上述的微生物菌株，由昆明中茶普洱茶存储仓或陈年普洱茶中分离纯化得到，遗传稳定，符合普洱茶高温汽蒸等生产要求的菌株，包括如下步骤：1、选取五年普洱产品、十年普洱产品进行取样并粉碎稀释，同时在昆明中茶普洱茶储存仓分别选取几个地点，利用空气沉降法和表面涂抹取样法进行取样；2、取样后于PDA固体培养基进行培养，于28-30℃条件下培养10天进行倒置培养，同时进行空白对照组培养，记录菌落生长情况；3、记录菌落生长情况，进行菌落识别；选取代表性菌落，菌落形态相互区别的菌落进行下一步纯化；4、挑取菌落划线接种至PDA固体培养基上，于28-30℃条件下培养5-10天，直至得到各个菌株的单菌落；5、将获得的菌株进行菌株鉴定，挑选能够在20-45℃生长，在20-75℃生存，可应用于普洱茶生产，抑制杂菌能力强，且遗传稳定的菌株。利用本专利的黑曲霉菌株制备普洱茶工艺，其特征在于，所述的普洱发酵工艺是在渥堆发酵工序前接入含有所述保藏编号为CGMCCNo.15884菌株经培养后得到的液体种子，所述液体种子通过如下方法制备：1、取活化后的黑曲霉(CGMCCNo.15884)菌株接种至液体培养基。所述的液体培养基包括PDB液体培养基以及利用茶叶、茶粉制备茶汁的液体培养基。2、将于28-30℃条件下，在无菌条件下于摇床中进行培养。所述液体种子的密度为(5-9)*106cfu/mL以上。本专利技术菌株应用于普洱茶生产加工中，不仅对普洱茶的品质有很大的积极作用，在含有丰富木香的基础上，增添了清香气味，而且能够在茶叶中代谢洛伐他汀类物质，由其制备得到普洱茶具有降血脂功能。所述标准化普洱工艺包括毛茶拼配、混料、喷洒接种、渥堆发酵、翻堆、开沟干燥，按如下方法进行：1、将不同原料按要求进行拼配、混匀后，要求混料后茶叶无花杂；2、将制备的液体种子接种到茶叶原料中，使用小型喷雾器将菌液均匀喷洒到茶叶上，接种量为30％-38％，菌液喷洒均匀、茶叶不结块；3、将接种后的茶叶堆放成高1米、长宽为(2-3)*(2-3)米的茶堆，进行渥堆发酵，堆芯温度在35-50度左右，堆表面温度为30-35度，水分含量在40％-50％左右；4、每隔7天翻堆一次，让堆芯茶叶与堆表茶叶混合均匀，并保持堆芯温度以及水分含量；5、发酵20-27天后，在茶堆上开沟，进行通风干燥。具体实施方式本专利技术下述实施例中所述的PDA培养基按照现有技术中常规方法制备。本专利技术中黑曲霉(CGMCCNo.15884)的选育方法，包括如下步骤：1、选取五年普洱产品、十年普洱产品进行取样并粉碎稀释，同时在昆明中茶普洱茶储存仓分别选取几个地点，利用空气沉降法和表面涂抹取样法进行取样；2、将取样后的PDA培养基，于28-30℃条件下培养10天，进行倒置培养，同时进行空白对照组培养，记录菌落生长情况；3、记录菌落生长情况，进行菌落识别；选取代表性菌落，菌落形态相互区别的菌落进行下一步纯化；4、挑取菌落划线接种至PDA固体培养基上，于28-30℃条件下培养5-10天，直至得到各个菌株的单菌落；5、将获得的菌株进行菌株鉴定，挑选能够在20-45℃生长，在20-75℃生存，可应用于普洱茶生产，抑制杂菌能力强，且遗传稳定的菌株。将由上述步骤中分离得到的菌株0066-AN，在PDA培养基上，菌落黑色，表面粗糙，菌丝发达，分支较多。通过菌体微观形态、菌落宏观形态，结合分子测序的ITS基因序列、钙调蛋白基因序列和β微管蛋白基因序列，确认该菌株为黑曲霉。该菌株遗传稳定，有良好的耐热性，符合生产要求，送样编号为0066-AN，菌株于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.15884，Aspergillusniger。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年6月19日，目前状态为存活。将该菌株用于普洱茶发酵生产，在常规工艺中增加制备液体种子和接种步骤，所述的液体种子是利用黑曲霉(CGMCCNo.15884)按照如下方法制备：1、取活化后的黑曲霉(CGMCCNo.15884)菌株接种至液体培养基。所述的液体培养基包括PDB液体培养基以及利用茶叶、茶粉制备茶汁的液体培养基。2、将于28-30℃条件下，在无菌条件下于摇床中进行培养。所述液体种子的密度为(5-9)*106cfu/mL以上。所述标准化普洱工艺包括毛茶拼配、混料、喷洒接种、渥堆发酵、翻堆、开沟干燥，按如下方法进行：1、将不同原料按要求进行拼配、混匀后，要求混料后茶叶无花杂；2、将制备的液体种子接种到茶叶原料中，使用小型喷雾器将菌液均匀喷洒到茶叶上，接种量为30％-38％，菌液喷洒均匀、茶叶不结块；3、将接种后的茶叶堆放成高1米、长宽为(2-3)*(2-3)米的茶堆，进行渥堆发酵，堆芯温度在35-50度左右，堆表面温度为30-35度，水分含量在40％-50％左右；4、每隔7天翻堆一次，让堆芯茶叶与堆表茶叶混合均匀，并保持堆芯温度以及水分含量；5、发酵20-27天后，在茶堆上开沟，进行通风干燥。实施例1降血脂普洱茶按照本专利技术的方法进行单菌株发酵，制备普洱熟茶。按如下方法进行：1、将2种不同产区的云南大叶种晒青毛茶原料按要求进行拼配、混匀后，要求混料后茶叶无花杂；2、取活化后的黑曲霉(CGMCCNo.15884)菌株接种至PDB液体培养基。3、将液体培养基于28℃，在无菌条件下置于摇床中培养。所述液体种子的密度为8*106cfu/mL。4、将拼配后的茶叶原料置于洁净的生产线上，将制备的液体种子接种到茶叶中，使用小型喷雾器均匀喷洒将菌液均匀喷洒到茶叶上，同时不停搅拌、翻动，液体种子的接种量为38％，要求菌液喷洒均匀、茶叶不结块；5、将接种后的茶叶堆放成高1米、长宽为2*2米的茶堆，于空气相对湿度为60％条件下，进行渥堆发酵，要求发酵过程中堆芯温度在40度，堆表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黑曲霉0066‑AN，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.15884。

【技术特征摘要】
2018.07.13 CN 201810772639X1.一种黑曲霉0066-AN，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.15884。2.根据权利要求1所述的微生物菌株，其特征在于，由昆明中茶普洱茶存储仓或陈年普洱产品中分离纯化得到，遗传稳定，符合普洱茶生产要求的菌株，包括如下步骤：S11、选取五年普洱产品、十年普洱产品进行取样并粉碎稀释，同时在昆明中茶普洱茶储存仓分别选取几个地点，利用空气沉降法和表面涂抹取样法进行取样；S12、取样后于PDA固体培养基进行培养，于28-30℃条件下培养10天进行倒置培养，同时进行空白对照组培养，记录菌落生长情况；S13、记录菌落生长情况，进行菌落识别；选取菌落形态相互区别的菌落进行下一步纯化；S14、挑取S13筛选菌落划线接种至PDA固体培养基上，于28-30℃条件下培养5-10天，直至得到各个菌株的单菌落；S15、将S14获得的菌株进行菌株鉴定，挑选能够在20-45℃生长，在20-75℃生存，可应用于普洱茶生产，抑制杂菌能力强，且遗传稳定的菌株，保藏编号为CGMCCNo.15884。3.利用权利要求1或2所述的黑曲霉菌株制备普洱茶工艺，其特征在于，所述的普洱发酵工艺是在渥堆发酵工序前接入...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛玉泊，邹广田，李颂，官云平，郝彬秀，魏珍珍，田海霞，孙婷婷，周方勇，顾红惠，
申请(专利权)人：云南中茶茶业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53