诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，本发明专利技术利用抑制剂将人多能性干细胞诱导分化为神经前体细胞；利用Shh、IGF1、EGF生长因子，激活ERK1/2、JNK、Sonic hedgehog信号通路后，细胞呈神经上皮样，然后添加Activin A和Chir99021分别激活TGFβ和Wnt信号通路，将神经上皮细胞诱导分化成视网膜前体细胞；视网膜前体细胞继续贴壁培养得到处于幼稚状态的RPE细胞。本发明专利技术还研究幼稚RPE细胞用于治疗视网膜变性疾病。与现有技术相比，本发明专利技术首次明确了将人多能性干细胞诱导分化为幼稚RPE细胞的三个阶段和所使用的相关小分子物质及生长因子。与成熟RPE相比，本专利分化得到的幼稚RPE移植后可以更有效地治疗视网膜变性疾病。

Method of inducing human pluripotent stem cells to differentiate into RPE cells

The invention relates to a method for inducing human pluripotent stem cells to differentiate into RPE cells. The method uses inhibitors to induce human pluripotent stem cells to differentiate into neural precursor cells. After activating ERK1/2, JNK and Sonic hedgehog signaling pathways by Shh, IGF1 and EGF growth factors, the cells are neuroepithelial-like, and then adding Activin A and Chir99021 to activate TGFbeta and Wnt signaling pathways respectively. Neuroepithelial cells were induced to differentiate into retinal precursor cells. Retinal precursor cells were cultured to obtain RPE cells in immature state. The invention also studies the use of immature RPE cells in the treatment of retinal degeneration diseases. Compared with the prior art, the present invention defines for the first time three stages of inducing and differentiating human pluripotent stem cells into immature RPE cells and related small molecular substances and growth factors used. Compared with mature RPE, immature RPE differentiated from this patent can treat retinal degeneration more effectively after transplantation.

【技术实现步骤摘要】
诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法
本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法。
技术介绍
视网膜变性(Retinaldegeneration,RD)疾病是一种以进行性视功能下降为特征的疾病，具有遗传性和后天性，是临床上多见而又难治的一类致盲性眼病。其主要包括各种类型的视网膜色素变性(Retinitispigmentosa,RP)、Stargardt病以及年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration,AMD)等。RD发病多与眼内的RPE细胞的病变和凋亡相关。RPE是在位于Bruch膜和视网膜中间的一层极性单层色素上皮细胞。RPE在视觉形成过程中承担着十分重要的作用：RPE不仅有助于血脑屏障的形成，而且完成与光感受细胞的营养和代谢产物的交换。在视觉形成中有如此重要的作用的RPE，在人体并没有自身的RPE修复和更新的系统。随着RD的病程的发展，除了营养支持和促进细胞的存活来延缓病程外，RPE细胞的凋亡过程是不可逆的，故RPE细胞的移植治疗已经成为RPE退行性RD疾病的最有治疗前景的治疗方法。RPE细胞移本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导人多能性干细胞分化为神经前体细胞；(2)培养神经前体细胞为神经上皮；(3)诱导神经上皮转化为视神经上皮和视网膜前体细胞；(4)视网膜前体细胞传代培养后形成幼稚RPE细胞。

【技术特征摘要】
1.一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导人多能性干细胞分化为神经前体细胞；(2)培养神经前体细胞为神经上皮；(3)诱导神经上皮转化为视神经上皮和视网膜前体细胞；(4)视网膜前体细胞传代培养后形成幼稚RPE细胞。2.根据权利要求1所述的一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，利用TGFβ受体抑制剂和BMP受体抑制剂培养人多能性干细胞分化为神经前体细胞。3.根据权利要求2所述的一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，所述TGFβ受体抑制剂选用SB431542，所述BMP受体抑制剂选用DMH1。4.根据权利要求1所述的一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中，在Shh、IGF1和EGF存在的条件下，培养神经前体细胞为神经上皮。5.根据权利要求1所述的一种诱导人多能性干细胞分化为RPE细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，添加TGFβ信号通路激活因子和Wnt信号激活...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐国彤，吕立夏，金彩霞，田海滨，欧庆健，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海,31