一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法技术

本发明专利技术公开了一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法。本发明专利技术包括下列步骤：步骤1、软骨细胞的分离、培养；步骤2、骨髓间充质干细胞的分离、培养；步骤3、骨髓间充质干细胞与软骨细胞按照比例接种到培养器具中共培养。骨髓间充质干细胞与软骨细胞共培养可以提高软骨细胞的增殖能力，可以为软骨组织工程提供种子细胞，为生物反应器的研制提供实验室数据。

A Co-culture Method for Increasing the Proliferative Activity of Chondrocyte and Maintaining the Phenotype of Chondrocyte

The invention discloses a co-culture method for improving chondrocyte proliferation activity and maintaining cartilage phenotype. The invention comprises the following steps: step 1, isolation and culture of chondrocyte; step 2, isolation and culture of bone marrow mesenchymal stem cells; step 3, co-culture of bone marrow mesenchymal stem cells and chondrocyte in proportions into the culture apparatus. Co-culture of bone marrow mesenchymal stem cells and chondrocytes can improve the proliferation of chondrocytes, provide seed cells for cartilage tissue engineering, and provide laboratory data for the development of bioreactor.

【技术实现步骤摘要】
一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法
本专利技术涉及一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法。
技术介绍
组织工程在人类疾病治疗、康复、健康保障等方面具有重要的应用前景。组织工程中软骨组织工程给关节软骨缺损的修复带来了希望。由创伤和各种疾病引起的关节软骨缺损在临床上十分常见，我国随着人口老龄化，患病人数与日俱增，但是关节软骨的自我修复作用非常有限，因此关节软骨损伤的修复重建一直是人们渴望解决的难题，关节软骨修复及相关研究显得尤为重要。当前国内外进行的软骨修复、重建主要通过组织工程的方法。种子细胞的选取是组织工程中最重要的环节和前提条件。以软骨细胞作为种子细胞的软骨组织修复工程，可改进修复组织的质量。但是软骨组织工程需要大量的种子细胞，自体来源的软骨细胞数量和质量有限，且要获取大量的软骨细胞对机体的创伤势必加重，软骨细胞的体外扩增能力有限，易出现“去分化”现象。因此软骨细胞作为软骨组织工程的种子细胞受到很大的限制。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述问题提供一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，用以迅速有效的为软骨组织工程提供优良的种子细胞，解决本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于其包括下列步骤：步骤1、软骨细胞的分离、培养；步骤2、骨髓间充质干细胞的分离、培养；步骤3、骨髓间充质干细胞与软骨细胞按照比例接种到培养器具中共培养。

【技术特征摘要】
1.一种提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于其包括下列步骤：步骤1、软骨细胞的分离、培养；步骤2、骨髓间充质干细胞的分离、培养；步骤3、骨髓间充质干细胞与软骨细胞按照比例接种到培养器具中共培养。2.根据权利要求1所述的提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于所述步骤3还包括：对培养中的细胞进行加载，在力学环境下使细胞受到力学刺激。3.根据权利要求2所述的提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于所述步骤3中的力学环境为：正弦波，拉伸幅度5%~15%，0.5Hz。4.根据权利要求1所述的提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于：步骤3中骨髓间充质干细胞与软骨细胞的接种比例为2：1。5.根据权利要求1所述的提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于所述步骤1还包括：软骨细胞的鉴定。6.根据权利要求5所述的提高软骨细胞增殖活性、维持软骨表型的共培养方法，其特征在于所述步骤1中软骨细胞的分离、培养、鉴定的方法包括：切取哺乳动物的关节面软骨组织，将软骨片切成5mm×5mm小块，PBS液清洗2-3次；加入浓度为0.25%的胰酶/EDTA，37℃消化30min后，去上清液，加入浓度为0.2%Ⅱ型胶原酶，37℃消化4-6h后，通过孔径为200目筛网滤去杂质，以1000r/min离心5min，去上清，加含15%胎牛血清的DMEM/F12完全培养基制成细胞悬液，以1×109个/L的细胞浓度接种于培养瓶内，置于饱和湿度、37℃、体积分数5%的CO2培养箱培养，每3天换液1次，倒置相差显微镜下观察细胞生长情况；待细胞长到80-90%时，0.25%胰蛋白酶/EDTA消化，按1∶2的比例传代；取第3代细胞，用PBS洗涤2次，先制备细胞爬片，甲苯胺蓝染色阳性，提示软骨细胞分泌出软骨基质，Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性。7.根据权利要求1所述的提高软...

【专利技术属性】
技术研发人员：王国辉，谢永芳，杨晶，王菁，王林萍，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37