蔓荆子分级多糖及医药用途制造技术

本发明专利技术公开了蔓荆子分级多糖及医药用途，分级多糖通过如下方法制备：将蔓荆子用水热回流提取，醇沉、洗涤，干燥，Sevag法除蛋白，再次醇沉、洗涤，干燥得到粗多糖；将粗多糖用水溶解，取上清液利用Q‑Sepharose FF色谱进行分级，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L、1.2mol/L NaCl溶液洗脱，分别收集不同浓度NaCl溶液洗脱液，透析，冻干。本发明专利技术提供的蔓荆子分级多糖具有明显的抑制乳腺癌MCF‑7细胞的作用，可以开发成治疗乳腺癌的药物。

Graded polysaccharide from Vitex negundo and its medical use

The present invention discloses the graded polysaccharide of Vitex negundo and its medicinal use. The graded polysaccharide is prepared by the following methods: extracting Vitex negundo by hydrothermal reflux, alcohol precipitation, washing, drying, removing protein by Sevag method, then alcohol precipitation, washing and drying to obtain crude polysaccharide; dissolving crude polysaccharide in water, extracting supernatant by Q_Sepharose FF chromatography, and grading it in turn by distilled water, 0.2 mol/L and 0.4 mol/L. L, 0.6mol/L, 0.8mol/L, 1.0mol/L and 1.2mol/L NaCl solution were eluted, and different concentration NaCl solution eluents were collected, dialyzed and lyophilized. The graded polysaccharide of Vitex negundo provided by the invention has obvious effect of inhibiting breast cancer MCF_7 cells, and can be developed as a medicine for treating breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
蔓荆子分级多糖及医药用途
本专利技术属于化学医药领域，涉及蔓荆子分级多糖及医药用途。
技术介绍
乳腺癌是严重危害女性健康的主要恶性肿瘤之一，2017年全球约220万人被诊断为乳腺癌，约有80万人死于该病，是发展中国家主要致死原因之一，乳腺癌具有高度异质性，容易出现化疗耐药和复发转移。所以，寻找高效、低毒且广谱的抗乳腺癌药物具有重要的研究意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供蔓荆子分级多糖及医药用途。本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：一种蔓荆子分级多糖，通过如下步骤制备：步骤S1，粗多糖制备：蔓荆子粉碎，称取粉末，加入水，加热提取，滤过，滤液离心，取上清液，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥；加蒸馏水溶解，Sevag法除蛋白，离心，取上清液减压浓缩，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥即得；步骤S2，分级处理：称取粗多糖，加适量蒸馏水溶解，配成质量浓度为50g/L的粗多糖溶液，10000r/min离心6min，取上清液利用Q-SepharoseFF色谱进行分级，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/LNaCl溶液洗脱20BV，收集0.8mol/LNaCl溶液洗脱液，透析，冻干，即得。优选地，步骤S1中加入粉末15倍量水。优选地，步骤S1中于100℃水浴回流提取3次，每次3h。优选地，步骤S1中加热提取滤过所得滤液于5000r/min离心10min。优选地，步骤S1中Sevag法除蛋白后用10000r/min离心10min。上述蔓荆子分级多糖在制备抗乳腺癌的药物中的应用。有益效果：本领域技术人员知道，“体外抑瘤实验中，合成化合物或植物提取物纯品的半数抑制浓度IC50＜10μg/mL或植物粗提物的IC50＜20μg/mL”认为具有抑瘤作用(参见司徒镇强编著的《细胞培养》，2007版，第165页)。因此，蔓荆子分级多糖A、B、C、D、F具有明显的抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用，而蔓荆子分级多糖E抑制作用不明显。蔓荆子分级多糖A、B、C、D、F可以开发成治疗乳腺癌的药物。附图说明图1为蔓荆子分级多糖A～F对乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的IC50值。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆(VitextrifoliaL.Var.SimplicifoliaCham.)或蔓荆(VitextrifoliL.)的干燥成熟果实，购自黑龙江哈尔滨三棵树中药材市场。人乳腺癌细胞株MCF-7由吉林大学提供；DMEM培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶均购自美国Gibco公司；青霉素、链霉素购自上海生物工程技术服务有限公司。二、实验方法1、蔓荆子分级多糖的制备步骤S1，粗多糖制备：蔓荆子粉碎，称取粉末3kg，加入15倍量水，100℃水浴回流提取3次，每次3h；滤过，合并滤液，滤液5000r/min离心10min，取上清液，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥；加20倍量蒸馏水溶解，Sevag法除蛋白，10000r/min离心10min，取上清液减压浓缩，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥即得；步骤S2，分级处理：称取粗多糖，加适量蒸馏水溶解，配成质量浓度为50g/L的粗多糖溶液，10000r/min离心6min，取上清液利用Q-SepharoseFF色谱进行分级，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L、1.2mol/LNaCl溶液洗脱20BV，分别收集不同浓度NaCl溶液洗脱液，透析，冻干，得蔓荆子分级多糖A～F。2、分级多糖活性测定2.1细胞培养人乳腺癌MCF-7细胞培养于DMEM培养基(含105U/L青霉素、100mg/L链霉素)中，于37℃、5％CO2饱和湿度的孵箱中贴壁培养，隔天换液，显微镜下观察待融合度达到90％后，用0.25％胰蛋白酶(含0.02％二乙烯四乙酸二钠)消化传代。2.2肿瘤抑制作用的IC50值测定人乳腺癌MCF-7细胞传代3代后，将处于对数生长期的细胞用0.25％胰蛋白酶消化，计数，以每孔1×104个细胞的密度接种于96孔板内，培养24h，待细胞完全贴壁后，分别加入不同浓度的蔓荆子分级多糖A～F，对照组加入DMEM培养基，每组平行设6个复孔，培养48h，每孔加入5g/LMTT溶液20μl，在37℃培养箱中孵育4h，加入DMSO150μl，振荡仪上室温振摇10min，使结晶物充分溶解，在自动酶标仪波长570nm处测定各孔吸光度值，以上实验重复3次。计算不同药物及不同浓度药物对MCF-7细胞株的生长抑制率，用Bliss’s软件计算半数抑制浓度(IC50)值。生长抑制率(％)＝(对照组吸光度值－实验组吸光度值)/对照组吸光度值×100％。2.3统计学方法采用SPSS17.0进行数据处理及统计分析。数据均以均值±标准差表示，两组间的比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。三、实验结果蔓荆子分级多糖A～F对乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的IC50值如表1和图1所示。表1蔓荆子分级多糖A～F对乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的IC50值本领域技术人员知道，“体外抑瘤实验中，合成化合物或植物提取物纯品的半数抑制浓度IC50＜10μg/mL或植物粗提物的IC50＜20μg/mL”认为具有抑瘤作用(参见司徒镇强编著的《细胞培养》，2007版，第165页)。因此，蔓荆子分级多糖A、B、C、D、F具有明显的抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用，而蔓荆子分级多糖E抑制作用不明显。蔓荆子分级多糖A、B、C、D、F可以开发成治疗乳腺癌的药物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蔓荆子分级多糖，其特征在于，通过如下步骤制备：步骤S1，粗多糖制备：蔓荆子粉碎，称取粉末，加入水，加热提取，滤过，滤液离心，取上清液，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥；加蒸馏水溶解，Sevag法除蛋白，离心，取上清液减压浓缩，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥即得；步骤S2，分级处理：称取粗多糖，加适量蒸馏水溶解，配成质量浓度为50g/L的粗多糖溶液，10000r/min离心6min，取上清液利用Q‑Sepharose FF色谱进行分级，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/LNaCl溶液洗脱20BV，收集0.8mol/LNaCl溶液洗脱液，透析，冻干，即得。

【技术特征摘要】
1.一种蔓荆子分级多糖，其特征在于，通过如下步骤制备：步骤S1，粗多糖制备：蔓荆子粉碎，称取粉末，加入水，加热提取，滤过，滤液离心，取上清液，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥；加蒸馏水溶解，Sevag法除蛋白，离心，取上清液减压浓缩，加乙醇调至醇体积分数为75％，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥即得；步骤S2，分级处理：称取粗多糖，加适量蒸馏水溶解，配成质量浓度为50g/L的粗多糖溶液，10000r/min离心6min，取上清液利用Q-SepharoseFF色谱进行分级，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗金民，
申请(专利权)人：罗金民，
类型：发明
国别省市：吉林,22