猪圆环病毒2型抗原、其制备的免疫原性组合物、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，该含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物包含免疫量的猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原以及药学上可接受的载体。本发明专利技术的免疫原性组合物具有良好的、广谱的免疫原性，能对不同地域来源、不同基因亚型的猪圆环病毒2型毒株感染以及混合感染具有保护作用。

Porcine circovirus type 2 antigen, its immunogenicity composition, preparation method and Application

The invention relates to an immunogenic composition containing porcine circovirus type 2 antigen, wherein the immunogenicity composition containing the porcine circovirus type 2 antigen contains a porcine circovirus type 2 new gene subtype Cap protein antigen and a pharmaceutically acceptable carrier. The immunogenic composition of the invention has good and broad-spectrum immunogenicity, and can protect the infection of porcine circovirus type 2 strains and mixed infection of different geographical origins and different gene subtypes.

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒2型抗原、其制备的免疫原性组合物、制备方法和应用
本专利技术属于兽药领域，具体涉及猪圆环病毒2型抗原，其制备的免疫原性组合物、制备方法和应用。
技术介绍
猪圆环病毒(Porcinecircoviruses，PCV)是单股环状的DNA病毒，基因组长度约为1.7kb，是最小的动物DNA病毒之一。已经确定有两种类型的PCV，即猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)。PCV1于1974年首次在PK细胞培养物中作为一种污染物鉴定而发现，其对猪只没有致病性。PCV2于1998年首次报道，其在临床条件下能引起猪只的猪圆环病毒相关疾病(Porcinecircovirusassociateddiseases，PCVAD)，主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征，肺炎,猪皮炎和肾病综合征和繁殖障碍，主要表现为呼吸、泌尿、肠道、淋巴、心血管、神经、繁殖系统以及皮肤的功能紊乱，对全世界的生猪养殖造成了重大的经济损失。PCV2主要有两种基因亚型PCV2a和PCV2b，两者基因组长分别为1767和1768个核苷酸，还有一种PCV2c仅在丹麦有过报道。2003年之前PCV2a是主要流行株，之后PCV2b开始出现并迅速扩大范围，2009年又发现新的基因亚型PCV2d。临床上，随着PCV2疫苗的普遍应用，在免疫压力下，PCV2的变异速度加快。近年来，一类介于PCV2b与PCV2d之间的新的基因亚型的毒株开始流行，这类病毒特征是ORF2基因中存在突变或存在不同基因亚型基因之间的重组。由于该新的PCV2基因亚型毒株的流行，且其抗原与现有的基因亚型之间存在差异，而现有的商品化疫苗均以PCV2a或PCV2b为疫苗株来制备的，不能对最新流行的毒株进行完全的保护，因此针对该最新流行的毒株制备新的疫苗，对猪场疾病控制十分重要。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供一种预防和/或治疗新的猪圆环病毒2型基因亚型感染的免疫原性组合物，该免疫原性组合物能对新型猪圆环病毒2型提供有效的保护，显示出显著的免疫特性。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种猪圆环病毒2型免疫原性蛋白，其制备的免疫原性组合物能有效保护流行株的攻击。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗新型猪圆环病毒2型感染的免疫原性组合物，其中，所述免疫原性组合物包括免疫量的所述的猪圆环病毒2型抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述猪圆环病毒2型抗原为所述免疫原性蛋白或重组有所述免疫原性蛋白基因的活载体。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗猪圆环病毒2型不同基因亚型单独感染或它们混合感染导致的相关疾病的免疫原性组合物。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗猪圆环病毒2型和其他病原混合感染导致的疾病的免疫原性组合物。本专利技术的另一个目的是提供一种制备所述免疫原性组合物的方法，所述制备方法包括：步骤(1)克隆所述猪圆环病毒2型免疫原性蛋白基因；步骤(2)重组、转化所述步骤(1)中克隆的免疫原性蛋白基因；步骤(3)表达所述重组的猪圆环病毒2型免疫原性蛋白；步骤(4)分离纯化所述表达的重组猪圆环病毒2型免疫原性蛋白，使用非离子表面活性剂处理所述纯化的重组猪圆环病毒2型免疫原性蛋白；步骤(5)将所述步骤(4)得到的猪圆环病毒2型免疫原性蛋白抗原与佐剂按比例混合，乳化。本专利技术还涉及所述的免疫原性组合物在制备预防和/或治疗猪圆环病毒2型相关疾病的药物中的应用。本专利技术还涉及所述的免疫原性组合物在制备预防和/或治疗猪圆环病毒2型混合感染的药物中的应用。本专利技术首次采用目前新的猪圆环病毒2型免疫原性蛋白基因高效表达后，制备免疫原性组合物，可预防或治疗猪圆环病毒2型相关疾病引起的疫情，也可预防或治疗猪圆环病毒2型混合感染引起的疫情。本专利技术猪圆环病毒2型免疫原性蛋白制备的免疫原性组合物，其免疫原性好，低含量、一次免疫即能对猪只的攻毒产生完全保护，并能有效对多种地域来源的野毒株进行预防，即在临床应用上能对猪圆环病毒2型的感染、蔓延进行预防、治疗和控制。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。“猪圆环病毒2型new基因亚型”是指一种新的PCV2基因亚型，其在ORF2基因中存在突变或经不同基因亚型的ORF2基因之间重组而来，具有PCV2b的标签序列，但在遗传进化分析中组成一个独立分支，猪只感染该基因亚型的毒株后出现的临床表征有：持续性高温，食欲减退、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦和生长速度减缓，剖检均出现不同程度肺实变、淋巴肿大、肾有坏死点。本专利技术提供的新的猪圆环病毒2型病毒基因组长为1768个核苷酸，具有PCV2b的标签序列，但在进化分析中却组成一个独立分支，ORF2基因中存在突变或经不同基因亚型的ORF2基因之间重组而来，是一种新PCV2基因亚型病毒。本专利技术涉及一种含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物包含免疫量的猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原以及药学上可接受的载体；其中，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原为猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白或重组有所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白基因的活载体。本专利技术首次采用目前新的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因高效表达后，其制备的亚单位抗原或含有其重组基因的活载体均能在一次免疫后就产生良好的免疫效力，对猪只提供100％的保护，有效地抵抗猪圆环病毒2型new基因亚型的攻毒。本专利技术所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物具有良好的免疫原性，一次免疫即能对猪圆环病毒2型病毒进行完全保护。本专利技术所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物能对不同基因亚型的猪圆环病毒2型病毒进行完全保护。本专利技术所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物具有广谱性，能对不同地域来源的猪圆环病毒2型病毒进行完全保护。术语“免疫原性组合物”指含有猪圆环病毒2型免疫原性的药物组合物，该药物组合物可诱发、刺激或增强猪只针对猪圆环病毒2型的免疫反应。术语“免疫量”应当理解为“免疫有效量”，又称免疫保护量或产生免疫应答的有效量，为可在接受者体内有效诱导免疫应答的抗原量，该量足以预防或改善疾病的体征或症状，包括不利的健康影响或其并发症。所述免疫应答可能足以用于诊断目的或其它试验，或可能适合用于预防疾病的征兆或症状，包括由病原体引起的感染所造成的不利的健康结果或其并发症。体液免疫力或由细胞介导的免疫力或此二者均可被诱导。动物对免疫原性组合物的免疫应答可通过例如测量抗体效价、淋巴细胞增殖分析而间接评估，或在以野生型毒株攻击后通过监测征兆或症状来直接评估，而该由免疫原性组合物提供的保护性免疫力可通过测量例如受试动物的临床征兆如健康产仔的减少、死胎数量的增加、受试动物总体生理状况及总体健康和表现来评估。所述免疫应答可包括但不限于诱导细胞性和/或体液免疫力。本专利技术所述的猪圆环病毒2型Cap蛋白抗原可以是重组表达的Cap蛋白亚单位抗原，其表达体系可以为原核表达系统、真核表达系统，也可以是通过人工合成的合成肽抗原；或者可以是重组有所述猪圆环病毒Cap蛋白基因的活载体。“亚单位抗原”指的是利用基因工程方法将病原体的保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中，使其高效表达而制成的抗原。它比全病毒抗原引起副反应的可能性小。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物包含免疫量的猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原以及药学上可接受的载体；其中，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原为猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白或重组有所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白基因的活载体。

【技术特征摘要】
1.一种含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物包含免疫量的猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原以及药学上可接受的载体；其中，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白抗原为猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白或重组有所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白基因的活载体。2.根据权利要求1所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白为SEQIDNO.1编码的蛋白。3.根据权利要求1所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白含量为≥20μg/ml；优选地，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白含量为20μg/ml～100μg/ml；更优选地，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白含量为20μg/ml～50μg/ml；更优选地，所述猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白含量为30μg/ml～50μg/ml。4.根据权利要求1所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述重组有猪圆环病毒2型new基因亚型Cap蛋白基因的活载体为重组减毒沙门氏菌、重组新城疫病毒、重组痘病毒、或重组腺病毒。5.根据权利要求1所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物还包含由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病病毒抗原、猪流感病毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、猪细小病毒抗原、猪乙型脑炎病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪链球菌抗原、猪波氏杆菌抗原、猪传染性胸膜肺炎抗原、猪多杀性巴氏杆菌抗原、猪霍乱沙门氏菌抗原、猪肺炎支原体抗原、猪鼻支原体抗原；优选地，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物包含由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒减毒抗原、猪伪狂犬病病毒减毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒抗原、猪细小病毒亚单位抗原、副猪嗜血杆菌灭活抗原、猪肺炎支原体灭活抗原；优选地，所述含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物还包含由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒减毒抗原、猪伪狂犬病病毒灭活抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒抗原、猪细小病毒亚单位抗原、副猪嗜血杆菌灭活抗原、猪肺炎支原体灭活抗原。6.根据权利要求5所述的含猪圆环病毒2型抗原的免疫原性组合物，其中，所述猪瘟病毒减毒抗原为猪瘟病毒兔化弱毒株、所述猪伪狂犬病病毒减毒抗原为HN1201-R株、所述猪伪狂犬病病毒灭活抗原为HN1201株灭活全病毒抗原、所述猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，廖永洪，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41