一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法技术

本发明专利技术公开了一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，该方法步骤如下：采用培养基培养获得亚心形扁藻和中肋骨条藻的培养液，然后再将微藻培养液与灭菌海水，以及脱落酸和乙酰胆碱混合成的助诱剂混合，得到真宽水蚤的培养液；将真宽水蚤成体放养于培养液中，再采用光照、温度与盐度联合刺激，获得真宽水蚤休眠卵。本发明专利技术提供的一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，可操作性强，可重复性高，休眠卵发生率高，诱导效率高，该方法充分利用光照、温度与盐度联合刺激的措施，利用递进下降式温度‑光照刺激法，获得了更多、能量存储更充足的真宽水蚤休眠卵。

A Method of Inducing Dormant Eggs of Pacific Water Flea

The invention discloses a method for inducing the dormant eggs of Pacific true wide water flea. The steps of the method are as follows: obtaining the culture solution of Platymonas subcordiformis and Skeletonema costatum by culture medium, then mixing the culture solution of microalgae with sterilized seawater, as well as an attractant composed of abscisic acid and acetylcholine, to obtain the culture solution of true wide water flea; releasing the adult of true wide water flea into culture medium; In the solution, light, temperature and salinity were used to stimulate the dormant eggs of Daphnia magna. The invention provides a method for inducing the dormant eggs of the Pacific true wide water flea, which has strong operability, high repeatability, high incidence of dormant eggs and high induction efficiency. The method takes full advantage of the combined stimulation of light, temperature and salinity, and uses the progressive descending temperature and light stimulation method to obtain more dormant eggs of the true wide water flea with sufficient energy storage.

【技术实现步骤摘要】
一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法
本专利技术涉及水产生物
，尤其是涉及一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法。技术背景桡足类，隶属于节肢动物门、甲壳纲、桡足亚纲，是浮游动物的重要组成部分，为小型甲壳动物，体长<3mm，营浮游与寄生生活，分布于海洋、淡水或半咸水中。因其是大多数鱼类幼体的开口饵料之一，故在水生态系统食物网和水产养殖中具有重要意义。太平洋真宽水蚤隶属于哲水蚤目、宽水蚤科、真宽水蚤属，是低盐区十分常见的暖水性沿岸桡足类物种之一。太平洋真宽水蚤主要出现在夏秋季，到秋末开始产休眠卵，休眠卵沉入海底被埋入海泥并间续孵化以补充种群。桡足类是水域生态系统的关键类群，在物质循环、能量流动和信息传递中起着重要作用。休眠卵是桡足类的重要生存策略，在抵抗不利环境、维持种群延续等方面起着重要作用，对桡足类种群的季节动态和物种延续具有十分重要的意义。休眠卵是桡足类在不良环境条件下进行有性生殖延续后代的产物，休眠卵具有抵抗外界不良环境、易于扩散和通过重组产生遗传多样性等特点，也是浮游动物集约化培养的重要种源，通过桡足类快速的孤雌生殖在短时间内大量繁殖，使得桡足类作为鲜活饵料为水产经济动物的苗种生产起到极其重要的作用。休眠卵的产生、诱导休眠卵的形成以及休眠卵的适时孵化利用也是水产养殖业中非常有意义的课题。桡足类因其体内富含某些必需脂肪酸，特别是EPA和DHA，在水产育苗上有很多应用，常常被用来作为一些经济鱼类的开口饵料。随着研究的深入和科学技术的发展，通过桡足类休眠卵获得大量无节幼体逐渐被人们重视和利用，休眠卵的规模培养将在现代海水养殖中发挥重要作用，具有广阔的应用前景。然而研究休眠卵的结构等课题则受限于一年之内只有一个季节才能在海区采集休眠卵，且研究发现太平洋真宽水蚤生产休眠卵的节律性，主要是其母代所经历的外界环境刺激，如温度、光照周期和环境盐度等外界因子，或其动物行为如性选择、寄生行为、产卵行为等，对子代表现型差异性的影响，因此如何诱导生产大量休眠卵是一个亟待解决的难题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可操作性强，可重复性高，休眠卵发生率高，诱导效率高的诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，该方法充分利用光照、温度、盐度联合刺激的措施来完成高效率诱导，利用递进下降式温度-光照刺激法，获得更多、能量存储更充足的真宽水蚤休眠卵。本专利技术针对
技术介绍
中提到的问题，采取的技术方案为：一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，是通过对真宽水蚤成体进行递进下降式光照、温度与盐度联合刺激，获得并收集休眠卵。该方法简单便捷，充分利用光照、温度与盐度联合刺激的措施来完成高效率诱导，利用递进下降式温度-光照刺激法能够刺激真宽水蚤母代有性生殖，获得更高的休眠卵发生率，实现快速高效地诱导生产休眠卵的目的。作为优选，递进下降式光照、温度与盐度联合刺激的具体步骤为：步骤1：调节培养液盐度为2.8～3.1％，在温度为24～27℃、光照强度为2500～3000lux、明暗时间为16h:8h的条件下，暂养3～5d；步骤2：将培养液盐度调为3.3～3.6％，在温度为18～22℃，光照强度为1800～2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23～26h；步骤3：将培养液盐度调为3.3～3.6％，在温度为15～18℃，光照强度为1800～2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23～26h；步骤4：将培养液盐度调为3.3～3.6％，在温度为12～16℃，光照强度为1800～2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，培养至休眠卵产生。光照、温度、水环境盐度、湿度、食物等非生物因素对浮游动物的生殖及休眠卵的生产均有一定的诱导作用，比如在较高的温度下，真宽水蚤成体会加速发育，缩短性成熟所需的时间，加快和促进了真宽水蚤的生长和生殖，而较低的温度能够诱发桡足类的两性生殖；而其他非生物因素也都对真宽水蚤的生殖量和休眠卵发生率有明显的影响。作为优选，真宽水蚤成体在培养液中的种群密度为0.06～1.6个/ml。种群密度是动物自我调节以保持种群稳定的一个重要因素，随着种群密度增加，真宽水蚤之间碰撞率增大，产生休眠卵的几率显著增多，而适量控制种群密度，能避免种群密度过大时，会引起的食物不足和空间拥挤，进而避免减少其生殖量。作为优选，休眠卵的收集是使用孔径为45～50μm的筛绢进行收集。作为优选，诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵所用的培养液中包含由脱落酸和乙酰胆碱组成的助诱剂。脱落酸与乙酰胆碱在接受光照刺激后，形成高度活跃状态，其分子中含有的α与β不饱和酮结构，容易与蛋白质中氨基酸的氢原子结合，进而与卵母细胞膜上的滞育激素受体结合，提高了卵母细胞膜上海藻糖酶的活性，从而将母体血液中的海藻糖分解成葡萄糖，葡萄糖通过细胞膜进入卵母细胞，在卵母细胞中合成大量的糖原并贮备下来，使得产下的受精卵在胚胎真皮分化完成前的胚胎初期进入休眠状态，致使休眠卵的发生率得到进一步提升的同时，能够为休眠卵存储更充足的能量。进一步优选，最优的技术方案为，助诱剂中脱落酸和乙酰胆碱的重量比为2～2.5:1.5。进一步优选，诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵所用的培养液中还包含亚心形扁藻和中肋骨条藻的培养液，其制备步骤为：将亚心形扁藻和中肋骨条藻接种于MS液体培养基上，调节培养基pH为7.5～8.5，盐度为15～35‰，在温度20～30、℃光照强度5000～10000lux的条件下，培养即得。单胞藻不仅大小合适能被浮游动物摄食，更重要的能在动物体内被快速消化吸收，并含有丰富的营养，有助于动物的生长发育，由于种类繁多和其浮游特性成为浮游动物的觅食对象，经过营养搭配之后便是理想的浮游动物饵料。进一步优选，诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵所用的培养液包含以下重量份原料：5～10份亚心形扁藻和中肋骨条藻培养液、20～25份灭菌海水、0.25～0.55份助诱剂。再进一步优选，灭菌海水是取天然海水用孔径为35～45μm的筛绢滤去浮沙和杂物后，灭菌并连续充气20～25h即得。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1)本专利技术中提供的诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法有效解决了太平洋真宽水蚤休眠卵的采集问题，可以不受限于野外海区的采集和生物产卵的节律性，能够获得更多、能量存储更充足的休眠卵；2)本专利技术中在诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的过程中，利用光照、温度与盐度联合刺激的措施来完成高效率诱导，利用递进下降式温度-光照刺激法来刺激真宽水蚤母代的有性生殖，获得了更高的休眠卵发生率，实现了快速高效地诱导生产休眠卵的目的；3)本专利技术中提供的诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法简单便捷，可操作性强，具有可重复性，休眠卵发生率高，且诱导效率高，能获得较高比例的休眠卵。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方案作进一步说明：实施例1：一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，是通过对经2个世代驯化培养、活力好的真宽水蚤成体进行递进下降式光照、温度与盐度联合刺激，获得并收集休眠卵。该方法简单便捷，可操作性强，充分利用光照、温度与盐度联合刺激的措施来完成高效率诱导，利用递进下降式温度-光照刺激法能够刺激真宽水蚤母代有性生殖，获得更高的休眠卵发生率，实现快速高效地诱导生产休眠卵的目的。递进下降式光照、温度与盐度联合刺激本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，其特征在于：通过对真宽水蚤成体进行递进下降式光照、温度与盐度联合刺激，获得并收集休眠卵；所述递进下降式光照、温度与盐度联合刺激的具体步骤为：步骤1：调节培养液盐度为2.8~3.1%，在温度为24~27℃、光照强度为2500~3000lux、明暗时间为16h:8h的条件下，暂养3~5d；步骤2：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为18~22℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23~26h；步骤3：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为15~18℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23~26h；步骤4：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为12~16℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，培养至休眠卵产生。

【技术特征摘要】
1.一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，其特征在于：通过对真宽水蚤成体进行递进下降式光照、温度与盐度联合刺激，获得并收集休眠卵；所述递进下降式光照、温度与盐度联合刺激的具体步骤为：步骤1：调节培养液盐度为2.8~3.1%，在温度为24~27℃、光照强度为2500~3000lux、明暗时间为16h:8h的条件下，暂养3~5d；步骤2：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为18~22℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23~26h；步骤3：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为15~18℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，养殖23~26h；步骤4：将培养液盐度调为3.3~3.6%，在温度为12~16℃，光照强度为1800~2000lux，明暗时间为12h:12h的条件下，培养至休眠卵产生。2.根据权利要求1所述的一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，其特征在于：所述真宽水蚤成体在培养液中的种群密度为0.06~1.6个/ml。3.根据权利要求1所述的一种诱导太平洋真宽水蚤产休眠卵的方法，其特征在于：所述休眠卵的收集是使用孔径为45~50μm的筛绢进行收集。4.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶莹莹，夏立萍，李继姬，张建设，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33