一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，包括虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡和/或虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡和层析稀释液，其中，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗原胶体金层析检测试剂，虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗体胶体金层析检测试剂，所述层析稀释液由终浓度1％casein，0.4％Tween‑20和10mMPBS缓冲系统组成；所述试剂盒具有特异性、敏感性等特点。

A Kit for Detecting Antigen and Antibody of Shrimp Hemocyte Iridovirus

The invention provides an antigen and antibody detection kit for shrimp hemocyte iridovirus, which comprises a shrimp hemocyte iridovirus antigen detection test card and/or a shrimp hemocyte iridovirus antibody detection test card and a chromatographic dilution solution. The shrimp hemocyte iridovirus antigen detection test card contains a colloidal gold chromatographic detection reagent for shrimp hemocyte iridovirus antigen and an anti-shrimp hemocyte iridovirus antigen. The physical examination paper card contains a colloidal gold chromatographic reagent for detecting the antibody of shrimp hemocyte iridovirus. The chromatographic dilution solution consists of a buffer system of 1% casein, 0.4% Tween 20 and 10 mMPBS. The kit has the characteristics of specificity and sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒
本专利技术涉及试剂盒领域，尤其是一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒。
技术介绍
自1954年Xeros在沼泽大蚊(Tiphoneulapaludosa)中发现首例虹彩病毒以来，人们已经陆续从两栖类、甲壳类、鱼类和爬行类中发现虹彩病毒。根据国际病毒分类委员会第九次报告，虹彩病毒科(Iridoviridae)下设五个属：即虹彩病毒属(Iridovirus)，绿虹彩病毒属(Chloriridovirus)，蛙病毒属(Ranavirus)，淋巴囊肿病毒属(Lymphocystivirus)和细胞肿大病毒属(Megalocytivirus)，其中后面三个属的虹彩病毒可以感染鱼类。虹彩病毒病是一种广泛存在于水生动物且危害较大的病毒性疾病。目前，虹彩病毒成为一些鱼类、两栖类动物的新型病原体，特别是水产养殖业中的经济类品种再加上其特殊的生物学特性，因此越发引起人们的关注和重视。对虾感染虹彩病毒，最早于1993年Lightner和Redman在靠近厄瓜多尔对虾养殖场发现了被虹彩病毒感染的原糙对虾(ProtrachypeneprecipuaBurkenroad)。这是首次报道十足目动物能够感染虹彩病毒。对感染虹彩病毒的原糙对虾组织病理学观察发现，表皮上皮细胞(鳃、胃内层甚至遍布全身)呈现典型的虹彩病毒的感染；造血组织，触角腺上皮组织，以及心脏、肌肉、皮下组织、鳃、肝胰腺中的结缔组织细胞和吞噬细胞也被虹彩病毒感染。2017年，中科院黄海研究所科研人员在浙江严重死亡的南美白对虾上发现一种新病毒，相关研究报道称新分离的病毒属于虹彩病毒科，但不属于虹彩病毒科下已建立的五个属，感染该病毒的虾造血组织、鳃丝、肝胰腺、附肢和肌肉的血细胞中出现嗜碱性包涵体和核固缩现象，因此命名为虾血细胞虹彩病毒(SHIV)。对于虾血细胞虹彩病毒，我们的了解不是很多，也还没有正式的文献报道,建立一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，能够方便在疫病发生早期快速、准确的诊断疫病，为疫病的防控提供有效的参考。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，包括虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡和/或虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡和层析稀释液，其中，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗原胶体金层析检测试剂，虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗体胶体金层析检测试剂，所述层析稀释液由终浓度1％casein，0.4％Tween-20和10mMPBS缓冲系统组成，其中，所述虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒亲和纯化抗体的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒亲和纯化抗体，室温标记和封闭，离心后用复溶液悬浮；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒亲和纯化抗体免疫金和鸡IgY免疫金混合铺金，过夜烘干；包被：C线：在NC膜上包被抗鸡IgY多抗，加入保护剂做保护；T线：在NC膜上包被重组抗原亲和纯化抗体，加入保护剂做保护；所述虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒抗原的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒抗原，室温标记和封闭，离心后用复溶液将沉淀复溶；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒抗原免疫金和鸡IgY免疫金混合铺金，过夜烘干；包被：C线：在NC膜上包被抗鸡IgY多抗，并加入抗体保护剂保护；G线：在NC膜上包被抗人IgG单抗，并加入保护剂进行保护；M线：在NC膜上包被抗人IgM单抗，并加入保护剂进行保护。优选地，上述的虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，其虾血细胞虹彩病毒抗原检测试剂盒包含30μl滴管，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡，层析稀释液及虾血细胞虹彩病毒抗原检测试剂盒说明书，其虾血细胞虹彩病毒抗体检测试剂盒包含5μl直吸管，虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡，层析稀释液及虾血细胞虹彩病毒抗体检测试剂盒说明书；或者为抗原抗体二合一检测试剂盒，即包括30μl滴管+5μl直吸管，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡+虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡，层析稀释液及虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒说明书。上述的虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒的制备方法，步骤如下：(1)通过分子克隆、蛋白表达好验证以及蛋白纯化的方式获得NP蛋白；(2)SFTSV病毒免疫豚鼠，制得的多抗血清经过NP蛋白亲和纯化得到抗SFTSVNP豚鼠多抗；(3)NP蛋白免疫豚鼠获得NP蛋白多抗血清后与NP蛋白亲和纯化抗NP蛋白多抗；(4)利用步骤(2)中产物进行虾血细胞虹彩病毒抗原诊断免疫金的制备；利用步骤(3)中产物进行虾血细胞虹彩病毒抗原诊断包被膜的制备；利用步骤(1)中产物进行虾血细胞虹彩病毒抗体检测免疫金的制备。本专利技术的有益效果是：所述虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒能够检测虾血细胞虹彩病毒抗原抗体。其中，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试剂盒能够方便、快捷地检测出血清中是否含有虾血细胞虹彩病毒抗原；虾血细胞虹彩病毒抗体检测试剂盒可以为虾类疾病监测提供灵敏快捷的工具；IgM抗体检测痛抗原检测联合使用具有早期诊断的价值，具有特异性、敏感性等特点。具体实施方式为使本专利技术目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进行详细说明。实施例1一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，具有如下：材料方法与结果1.NP蛋白的制备1.1序列合成：NCBI上搜索基因序列(GenBank：KC292285.1)，送往金唯智生物科技有限公司合成。1.2分子克隆：(1)将合成的含有目的基因序列对应的穿刺菌扩增，获得扩增质粒；(2)将质粒进行双酶切(BamHI&NdeI)，同时使用相同的限制性内切酶酶切表达质粒pET-28a，37℃酶切1小时；(3)核酸电泳，将母的片段回收，方法参考天根琼脂糖凝胶回收试剂盒说明书；(4)连接；体系如下：GeneNP3μlpEt-28a2μl5×T4ligasebuffer2μlT4Ligase1μlddH2O2μl室温连接25分钟；(5)转化T1感受态将连接产物加入T1感受态中，冰浴30min；42℃热激90sec，迅速放入冰上，静置2min；加入1mlLB液体培养基，37℃培养1小时；5000rpm，离心3min，弃900μl上清，重悬菌体，涂布于含有卡那霉素的LB固体培养基上；37℃培养过夜；(6)挑取单克隆，37℃过夜震荡培养；(7)提取质粒，具体步骤参考天根质粒小提试剂盒说明书；(8)双酶切验证：酶切体系如下：pET-28a-NP6μl10×GreenBuffer2μlBamHI1μlNdeI1μlddH2O10μl1.3表达验证(1)将酶切正确的质粒转化入表达菌株BL21(DE3)，转化方法同转化T1感受态；(2)挑取三个单克隆于5mlLB液体培养基，37℃过夜震荡培养；(3)吸取1ml培养物转接至5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于：包括虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡和/或虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡和层析稀释液，其中，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗原胶体金层析检测试剂，虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗体胶体金层析检测试剂，所述层析稀释液由终浓度1％casein，0.4％Tween‑20和10mMPBS缓冲系统组成，其中，所述虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒亲和纯化抗体的标记：选择胶体金用0.2M K2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒亲和纯化抗体，室温标记和封闭，离心后用复溶液悬浮；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2M K2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒亲和纯化抗体免疫金和鸡IgY免疫金混合铺金，过夜烘干；包被：C线：在NC膜上包被抗鸡IgY多抗，加入保护剂做保护；T线：在NC膜上包被重组抗原亲和纯化抗体，加入保护剂做保护；所述虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒抗原的标记：选择胶体金用0.2M K2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒抗原，室温标记和封闭，离心后用复溶液将沉淀复溶；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2M K2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒抗原免疫金和鸡IgY免疫金混合铺金，过夜烘干；包被：C线：在NC膜上包被抗鸡IgY多抗，并加入抗体保护剂保护；G线：在NC膜上包被抗人IgG单抗，并加入保护剂进行保护；M线：在NC膜上包被抗人IgM单抗，并加入保护剂进行保护。...

【技术特征摘要】
1.一种虾血细胞虹彩病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于：包括虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡和/或虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡和层析稀释液，其中，虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗原胶体金层析检测试剂，虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡包含虾血细胞虹彩病毒抗体胶体金层析检测试剂，所述层析稀释液由终浓度1％casein，0.4％Tween-20和10mMPBS缓冲系统组成，其中，所述虾血细胞虹彩病毒抗原检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒亲和纯化抗体的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒亲和纯化抗体，室温标记和封闭，离心后用复溶液悬浮；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒亲和纯化抗体免疫金和鸡IgY免疫金混合铺金，过夜烘干；包被：C线：在NC膜上包被抗鸡IgY多抗，加入保护剂做保护；T线：在NC膜上包被重组抗原亲和纯化抗体，加入保护剂做保护；所述虾血细胞虹彩病毒抗体检测试纸卡是由下述方法得到的：病毒抗原的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，加入虾血细胞虹彩病毒抗原，室温标记和封闭，离心后用复溶液将沉淀复溶；鸡IgY的标记：选择胶体金用0.2MK2CO3调节其pH值，用鸡IgY室温标记，标记后室温封闭，离心后用复溶液悬浮；免疫金的制备：将病毒抗原免疫金和鸡IgY免疫金...

【专利技术属性】
技术研发人员：文珊，
申请(专利权)人：文珊，
类型：发明
国别省市：湖南,43