An application of the sex label piR_mmu_72274 of the semi-smooth tongue sole is described. The sex label piR_mmu_72274 originates from the exosome of fish seminal plasma. Through small RNA sequencing analysis, the label piRNAs with significant difference expression between the two fishes are screened as candidates. Through real-time quantitative PCR verification, the label piRNA biomarker with indicating effect on the two fishes is finally determined, and the label piRNAs is piR. MMU 72274, sequence GCATTGTGGTTCAGTGGTGGTAGAATTCTCGCCT, and on this basis, the detection kit was developed and prepared. The method has the advantages of non-invasive, high efficiency and reliable identification results. It is the first time to determine the genetic sex of the Half-Smooth tongue sole by quantitative detection.
【技术实现步骤摘要】
半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用
本专利技术属于鱼类生物
,特别是涉及一种半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用。
技术介绍
半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)由于雌、雄鱼生长速度和体型的巨大差异,以及养殖中雄鱼比例高,经济价值低的问题,产业发展受到一定程度的制约。研究发现雄鱼中有很大比例的伪雄鱼,即遗传上是雌鱼,但表型上是雄鱼。而用伪雄鱼作为父本,后代也会遗传父亲的特征成为伪雄鱼,导致了雄鱼比例高的问题。因此鉴别伪雄鱼对于半滑舌鳎育种产业具有重要的意义。传统的雌性特异微卫星分子标记法需要琼脂糖电泳条带识别,具有一定的误差;而染色体鉴定准确性受制片效果的制约,这两种方法都是定性的判断。本专利技术开发了半滑舌鳎精浆外泌体piRNAs标志物,应用定量PCR的方法定量考察piRNA的表达量以实现鉴别半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼,具有准确性高、结果稳定可靠的优势。主要存在于动物生殖系统的piRNA(Piwi-interactiingRNA)是一类长度约为26-32nt(nucleotides)的非编码RNA。piRNA在动物发育和生殖调控中起重要作用,在果蝇卵巢生殖细胞中,经PIWI家族蛋白的协同、加工,piRNA经过乒乓循环(“Ping-Pong”cycle)在细胞中的大量扩增,其具体作用机制还有待发掘。在海洋动物中外泌体来源的piRNAs作为生物标志物的研究几乎没有报道,本专利技术开发了的一种半滑舌鳎精浆外泌体piRNAs标志物,解决了半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼遗传性别的识别问题,具有创新性。
技术实现思路
本专利技术要解决的 ...
【技术保护点】
1.一种半滑舌鳎性别标签piR‑mmu‑72274的应用,所述的性别标签piR‑mmu‑72274来源于半滑舌鳎的精浆外泌体piRNA,序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT。
【技术特征摘要】
1.一种半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用,所述的性别标签piR-mmu-72274来源于半滑舌鳎的精浆外泌体piRNA,序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT。2.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用,其特征在于所述精浆外泌体piRNA的筛选方法,具体步骤如下:1)精浆外泌体分离鉴定后,对精浆外泌体smallRNA进行测序分析,SmallRNA种类繁多,将cleanreads依次和Rfam数据库、cDNA序列、物种重复序列库、piRBase数据库进行比对,以对测序结果中的smallRNA进行分类注释;将注释后的序列和piRBase数据库比对,进行已知piRNA的统计;使用未注释上的序列进行新的piRNA预测,piRNA差异表达分析,差异表达piRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析,最后与雄鱼、伪雄鱼样品进行相关性匹配,筛选出一种或者多种对雄鱼和伪雄鱼两种样品具有指示作用的pi...
【专利技术属性】
技术研发人员:张博,贾磊,高磊,赵娜,刘克奉,鲍宝龙,李仰真,车金远,
申请(专利权)人:天津渤海水产研究所,
类型:发明
国别省市:天津,12
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