胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。本发明专利技术还提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒的制备方法。采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、定量检测准确、快速，从检测到出结果只需20分钟；采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫诊断
，具体涉及一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
Ⅰ型糖尿病(T1DM)是易感个体胰岛β细胞自身免疫性损害所致,呈现胰岛素(Ins)分泌逐渐减少或缺乏。胰岛细胞抗体(ICA)是T1DM患者体液免疫异常时可在血清中检测到的抗体之一,是缓慢进展的β细胞损伤的血清学标志。胰岛由多种内分泌细胞组成,β细胞分布于胰岛中央,分泌胰岛素,位于胰岛周边的α细胞也参与胰岛素分泌的调控。ICAs按其与胰岛细胞结合的部位可分为胰岛细胞胞浆抗体(ICA)与胰岛细胞表面抗体(ICSA)两类。ICA阳性提示β细胞出现自身免疫损害,因此是T1DM的预测指标。胰岛细胞抗体(ICA)作为一类自身抗体,发现于1974年,当时认为与胰岛的所有细胞均存在反应。1型糖尿病的儿童中,70％～80％在明确诊断时ICA为阳性。在成年发病的糖尿病人群中,2型糖尿病占绝大多数,但约有10％～25％具有2型糖尿病临床表型的患者在诊断糖尿病时被证实存在胰岛的自身免疫反应。ICA是这些患者体内存在的标志性抗体。这其中包括一部分成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者。但这部分病人的临床表现也各有不同。现公认ICAs对IDDM易感个体的鉴定、IDDM发生与发展的监测、糖尿病分型及早期IDDM的免疫抑制治疗及胰腺或胰岛移植的适宜时间的选择及移植后移植物功能存活的监测等均有重要的价值。目前ICA的测定,但方法不尽相同,有免疫荧光、免疫组化及酶联免疫吸附法(ELISA)三大类。主要检测方法有间接免疫荧光(IF)、酶标法、免疫组化技术、ELISA方法，但实际应用中都均存在一些固有缺陷,其中，IF法荧光易猝灭,切片背景不清晰,不能长期保存,定位困难,而且有造成判断上的困难等缺点；酶标法的免疫组化技术操作比较复杂,且O型血人胰腺来源较为困难；ELISA方法对ICA抗体进行检测,准确性及重复性不稳定,尚需进一步验证。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的ICA的检测方法准确性及重复性不稳定的问题，而提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法。为达到以上目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术首先提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。优选的是，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒的质量分数是0.007％～0.1％。优选的是，所述的链霉亲和素磁颗粒悬浮液中，链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～1μm。优选的是，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。优选的是，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3～20。优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯和三联吡啶钌。优选的是，所述偶联标记的胰岛细胞抗原中，胰岛细胞抗原与偶联标记物的摩尔比为1:5～20。优选的是，所述偶联标记物为生物素。优选的是，所述的试剂盒还包括化学发光预激发液A、化学发光激发液B及清洗液，所述化学发光激发液A为硝酸溶液，化学发光激发液B为氢氧化钠溶液；清洗液为PB。本专利技术还提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒的制备方法，包括：步骤一：链霉亲和素磁颗粒悬浮液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂，得到链霉亲和素磁颗粒悬浮液；步骤二：化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的制备将抗人IgG放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存；步骤三：偶联标记的胰岛细胞抗原的制备取胰岛细胞抗原，pH6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～3h，再转入室温继续反应10～30min，最后加入赖氨酸反应10～30min，经纯化，加入等体积甘油和NaN3或ProClin300，得到偶联标记的胰岛细胞抗原。本专利技术有益效果(1)采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、定量检测准确、快速，从检测到出结果只需20分钟；(2)采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度；(3)采用本方法制备的试剂盒与样品所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，且分别由吖啶酯标记的抗人IgG及生物素标记的胰岛细胞抗原进行检测，不仅增加了发光率同时扩大了大了反应级，大大提高了试剂的特异性及检测速度；(4)采用本方法制备的试剂盒可直接用于全自动生化分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。(5)本专利技术的检测试剂盒为化学发光免疫分析法，该方法具有种操作简单，无放射性风险及其检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测；另一方面，胰岛细胞抗体化学发光免疫测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。附图说明图1是本专利技术胰岛细胞抗体检测试剂盒剂反应校准曲线。具体实施方式为了使本专利技术的优点、目的和方法更加详实易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了诸多细节以便于理解，但本专利技术可以以不同与描述的其他方式来实施。本专利技术首先提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。按照本专利技术，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒的质量分数优选是0.007％～0.1％。按照本专利技术，所述的链霉亲和素磁颗粒悬浮液中，链霉亲和素磁颗粒的粒径优选为0.05～1μm。当链霉亲和素磁颗粒的粒径低于0.05μm时，抗原或者抗体与磁珠结合率低，可能导致整体光量子数偏低；当链霉亲和素磁颗粒的粒径高于1μm时，非特异性结合效果明显，可能导致试剂盒灵敏度差等。按照本专利技术，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG，抗人IgG抗体与化学发光标记物的摩尔比优选为1:3～20；所述化学发光标记物优选为吖啶酯和三联吡啶钌，更优选为吖啶酯。按照本专利技术，所述偶联标记的胰岛细胞抗原中，胰岛细胞抗原与偶联标记物的摩尔比优选为1:5～20；所述偶联标记物优选为生物素。按照本专利技术，所述的试剂盒还包括化学发光预激发液A、化学发光激发液B及清洗液，所述化学发光激发液A为硝酸溶液，化学发光激发液B为氢氧化钠溶液；清洗液为PB。按照本专利技术，所述校准品的浓度分别为0U/mL，10U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL、350U/mL的胰岛细胞抗体溶液。本专利技术还提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒的制备方法，包括：步骤一：链霉亲和素磁颗粒悬浮液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂，得到链霉亲和素磁颗粒悬浮液；所述的链霉亲和素磁颗粒溶液的浓度优选为50～100mg/ml；链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。

【技术特征摘要】
1.一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。2.根据权利要求1所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒的质量分数是0.007％～0.1％。3.根据权利要求1所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的链霉亲和素磁颗粒悬浮液中，链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～1μm。4.根据权利要求1所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。5.根据权利要求1所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3～20。6.根据权利要求1、4、5所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯和三联吡啶钌。7.根据权利要求1所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记的胰岛细胞抗原中，胰岛细胞抗原与偶联标记物的摩尔比为1:5～20。8.根据权利要求1或7所述的一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物为生物素。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冬梅，高智玲，高威，孙成艳，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22