一种用于检测PEDV-TGEV核酸的双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及检验检疫领域，旨在提供一种用于检测PEDV‑TGEV核酸的双重荧光定量RT‑PCR检测试剂盒。(1)反转录和荧光定量RT‑PCR扩增混合液：该混合液包含反转录和荧光定量扩增引物以及探针，其序列如SEQ ID NO：1～6所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)阴性对照；(3)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明专利技术具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测PEDV-TGEV核酸的双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒
本专利技术提供了一种用于同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸的双重荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒，可实现同时检测2种引起猪病毒性腹泻症候群的病原，属于检验检疫领域。
技术介绍
猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirusofswine,TGEV)是目前危害我国养猪场中哺乳和断奶仔猪腹泻的最重要的病原，其发病率和死亡率都较高，且发病和传播迅速，比较难以控制，给养猪业带来重大损失。一旦感染该病，仔猪常表现出水样腹泻、常脱水直至死亡。猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒都属于冠状病毒科成员，临床上呈单独感染或者混合感染，由于PEDV和TGEV引起的临床症状、病理变化十分相似，在临床上的鉴别诊断较困难，因此应用实验室的检测方法快速准确区分由哪种病原感染，对于防控病毒性腹泻疾病具有重要的意义。由于该发病迅速，及时的诊断是防控该病有效手段，目前尚没有一种方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测PEDV‑TGEV核酸的双重荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：(1)反转录和荧光定量RT‑PCR扩增混合液：该混合液包含反转录和荧光定量扩增引物以及探针，其序列如SEQ ID NO：1～6所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)阴性对照；(3)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的阳性对照质粒。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测PEDV-TGEV核酸的双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：(1)反转录和荧光定量RT-PCR扩增混合液：该混合液包含反转录和荧光定量扩增引物以及探针，其序列如SEQIDNO：1～6所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)阴性对照；(3)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的阳性对照质粒。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述序列SEQIDNO：1-2是猪流行性腹泻病毒扩增引物；所述序列SEQIDNO：4-5是猪传染性胃肠炎病毒扩增引物；所述序列SEQIDNO：5是猪流行性腹泻病毒带荧光标记的探针；所述序列SEQIDNO：6是猪传染性胃肠炎病毒带荧光标记的探针。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，阳性对照来自病毒核酸RNA经反转录后，其特异基因片段与质粒连接所得的重组质粒混合物；其中特异基因分别为猪流行性腹泻病毒的N基因、猪传染性胃肠炎病毒的N基因；其中，猪流行性腹泻病毒的N基因序列如SEQIDNO：7所示，猪传染性胃肠炎病毒的n基因序列如SEQIDNO：8所示。4.利用权利要求1所述试剂盒实现检测PEDV-TGEV的双重荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)磁珠法提取样品DNA/RNA；用磁珠DNA/RNA共提取试剂盒和全自动核酸提取仪同时提取样品中的RNA，得到200μL样品；(2)双重荧光定量RT-PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓杜，宋厚辉，吴瑗，周莹珊，邵春艳，章先，程昌勇，姜胜，孙静，周彬，宋泉江，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33