一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法技术

本发明专利技术公开一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。该方法为：将第2‑10代小鼠胚胎成纤维细胞接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化，稀释，铺板。在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h后，向不同的孔中加入不同浓度的油酸进行诱导，在37℃，5% CO2孵育24h后，诱导完成，进行油红O染色观察。本发明专利技术用不同浓度OA直接在体外诱导分化出脂肪细胞，成功率高，而且诱导周期短只需要24h，大大缩短了传统方法的诱导周期，而且该方法操作简单，诱导出的脂肪细胞形态均一，大小可控，为体外构建脂肪细胞模型提供了一个简单高效的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法
本专利技术涉及脂肪细胞诱导领域,尤其涉及一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。
技术介绍
由于人们生活水平的提高，肥胖人群和肥胖病的发病率也越来越多。世界卫生组织将肥胖定义为一种危及人体健康的体内堆积脂肪过多或分布异常的疾病。肥胖是一种慢性的持续状态,以身体脂肪过多为特点.它是慢性疾病发生的主要诱因，可以诱发与心血管疾病相关的多种代谢功能异常，会增加2型糖尿病、冠心病、中风、等的发病率和死亡率。所以目前对于肥胖的研究和治疗，也是越来越迫切。肥胖问题的根本原因就是体内脂质代谢异常，摄入的能量大于消耗的能量，导致脂质在体内过度积累。脂肪组织作为主要的储脂组织，已有大量的研究关注于脂肪组织的脂代谢对于全身代谢的影响，越来越多的学者认为脂肪组织在代谢中占据着中心的位置。而脂肪细胞的脂质代谢异常和功能紊乱就是肥胖的核心机制之一，所以构建脂肪细胞模型是研究肥胖问题的一个关键途径。由于从脂肪组织中分离高纯度且处于同一时期的脂肪细胞难度较大，因此人们对于脂肪细胞增殖分化及调控方面的了解主要来源于体外细胞培养模型。前体脂肪细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将第2‑10代小鼠胚胎成纤维细胞（3T3‑L1）接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化下来，离心和重悬，进行传代；步骤二、将消化下来的细胞悬液，再稀释成相应的细胞浓度，在不同孔径大小的细胞板中进行铺板，在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h至细胞完全贴壁；步骤三、向不同的孔中加入不同浓度的油酸（Oleic acid ，OA）进行诱导，在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h，完成诱导；步骤四、将诱导成功的脂肪细胞，进行油红O染色，在显微镜下观察。

【技术特征摘要】
1.一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将第2-10代小鼠胚胎成纤维细胞（3T3-L1）接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化下来，离心和重悬，进行传代；步骤二、将消化下来的细胞悬液，再稀释成相应的细胞浓度，在不同孔径大小的细胞板中进行铺板，在37℃，5%CO2的细胞培养箱中孵育24h至细胞完全贴壁；步骤三、向不同的孔中加入不同浓度的油酸（Oleicacid，OA）进行诱导，在37℃，5%CO2的细胞培养箱中孵育24h，完成诱导；步骤四、将诱导成功的脂肪细胞，进行油红O染色，在显微镜下观察。2.如权利要求1所述用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，步骤一中，3T3-L1细胞接种的细胞培养瓶为T25。3.如权利要求1所述用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，步骤一中，所述消化的步骤为：将T25细胞培养瓶中的上清液吸出，加入1-2mlPBS，轻轻摇晃，再将PBS吸出，加入1-2ml0.25%Trypsin-EDTA，消化2-5min，待细胞变圆不再贴壁，加入2-4ml含有10%FBS、1%青链霉素的DMEM培养基终止消化。4.如权利要求1所述用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，步骤一中，所述离心和重悬的步骤为：将消化后的细胞从细胞培养瓶中吸出，收集到15ml离心管中，在1000-1500r/min下离心五分钟，然后去除上清液，加入3-5ml含有10%...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏坤，万淑倩，杨业国，牛雪明，罗逍，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44