PQQ 与Lys及Arg反应行为研究的方法技术

PQQ与Lys及Arg反应行为研究的方法，是PQQ与晚期糖基化终产物AGEs抑制作用研究的第一部分，属于生物分析技术领域。Lys和Arg是参与葡萄糖反应的DNA主要游离氨基酸。为弄清其作用机制，本发明专利技术研究了PQQ与Lys及Arg反应行为，优化了UPLC色谱分离条件，避免使用高浓度的盐溶液对色谱柱的损伤，对映体也得到了分离。确定了PQQ浓度的标准曲线、精确度和检测限，PQQ与Arg、Lys反应游离PQQ浓度的测定，UPLC‑MS鉴别PQQ与Lys或Arg反应产物的结构，测定质谱结果发现了新的化合物PQQ‑Lys，PQQ‑Arg，而且还发现一分子PQQ同时能与一分子Lys和一分子Arg反应，得新化合物PQQ‑Lys‑Arg，PQQ通过与Lys和Arg反应抑制AGEs的形成，为探讨PQQ抑制AGEs形成的可能机制提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】
PQQ与Lys及Arg反应行为研究的方法
PQQ（吡咯并喹呤醌）与Lys（赖氨酸）及Arg（精氨酸）反应行为研究的方法，是PQQ与晚期糖基化终产物AGEs抑制作用研究的第一部分，属于生物分析

技术介绍
晚期糖基化终产物（advancedglycationendproducts，AGEs)是蛋白慢性非酶糖基化产物。AGEs在正常人体内普遍存在，随着年龄的增高血浆AGEs的水平也会随之升高，它是机体衰老的重要生物标志物，在糖尿病患者及老年人体内AGEs水平普遍增高。据报道，AGEs的形成可能发生在阿尔茨海默症（AD）早期斑块的形成过程中。AGEs与细胞表面RAGE(AGEs受体)结合，可引起氧化应激反应，触发炎症级联反应、动脉粥样硬化、甚至形成血栓。体内AGEs的累积引起多种并发症，因此AGEs是一个值得研究的靶点。AGEs的形成包括一系列复杂反应，首先由糖的羰基基团和蛋白质DNA游离氨基酸（主要是赖氨酸Lys和精氨酸Arg）氨基共价结合形成希夫（Schiffbase）碱，这种希夫碱不稳定，迅速重排得到更稳定的Amadori产物（早期糖基化产物），Amadori产物再经过一系列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PQQ 与Lys及Arg反应行为研究的方法，其特征在于步骤为：（1）UPLC色谱分离条件UPLC分析条件，色谱柱：ACQUiTY UPLC@ BEH C18 column (2.1×100mm,1.7μm)，流动相A：H2O+0.1%甲酸，B：甲醇；2/98 B/A洗脱5min，20min梯度洗脱至60/40 B/A； PDA检测；流动相中加入0.1%甲酸和梯度洗脱后，能将PQQ 与反应产物较好的分离；（2）标准曲线、精确度和检测限测定准确称取一定量的PQQ，配制成浓度为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mM的标准溶液，分别进样，所得积分面积对样品浓度作图，进行线性回归，得回归方程为...

【技术特征摘要】
1.PQQ与Lys及Arg反应行为研究的方法，其特征在于步骤为：（1）UPLC色谱分离条件UPLC分析条件，色谱柱：ACQUiTYUPLC@BEHC18column(2.1×100mm,1.7μm)，流动相A：H2O+0.1%甲酸，B：甲醇；2/98B/A洗脱5min，20min梯度洗脱至60/40B/A；PDA检测；流动相中加入0.1%甲酸和梯度洗脱后，能将PQQ与反应产物较好的分离；（2）标准曲线、精确度和检测限测定准确称取一定量的PQQ，配制成浓度为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mM的标准溶液，分别进样，所得积分面积对样品浓度作图，进行线性回归，得回归方程为y=6E+06x-7834.9，R2=0.9998；线性范围0.2~1.0mM；在上述色谱条件下于同一天内连续进样6次，根据峰面积计算所得日内相对标准偏差为2.2%，n=6；隔天连续三天进样，日间标准偏差为4.3%，n=3；最小检出量为2.0ng，S/N≥3；（3）PQQ与Arg、Lys反应后游离PQQ浓度的测定将PQQ分别与Arg、Lys按v/v为1/1混合反应，另将PQQ与Arg和Lys按v/v/v为1/1/1混合反应，避光，置于37℃水浴孵育，于0、0.5、1、2、4、6、8、24h各时间点抽取反应液10μL，UPLC分析，所得峰面积代入线性方程，计算出游离PQQ的浓度；所得PQQ浓度对时间作图，得到PQQ-反应时间曲线图，由PQQ-反应时间曲线图可见PQQ与Lys反应速度快于PQQ与Arg，24h后PQQ与L...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡刚明，周杏琴，钦晓峰，徐希杰，顾晓波，张荣军，俞惠新，包建东，
申请(专利权)人：江苏省原子医学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32