靶向补体抑制剂在制备改善脑死亡供肝药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了靶向补体抑制剂在制备改善脑死亡供肝药物中的应用。本发明专利技术利用补体受体2(Complement receptor 2,CR2)连接膜结合性调节因子Crry，通过CR2靶向性结合到补体活化和损伤局部，利用膜结合性调节因子特异性调节补体级联反应的不同阶段，通过建立小鼠脑死亡模型，比较CR2‑Cryy治疗组与对照组的肝功能改变，结果表明靶向补体抑制剂CR2‑Crry有效改善脑死亡后供体肝的损伤，并减轻肝脏炎症反应、氧化应激损伤，减少肝细胞凋亡。本发明专利技术还通过补体基因敲除小鼠进一步验证了该补体抑制剂在改善脑死亡后供体肝功能的作用。

【技术实现步骤摘要】
靶向补体抑制剂在制备改善脑死亡供肝药物中的应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及靶向补体抑制剂在制备改善脑死亡供肝药物中的应用。
技术介绍
肝脏移植已成为治疗终末期肝病最有效的方法，然而器官供需比例紧张，供肝无法满足患者需要，目前供肝主要来自脑死亡供体。临床研究表明：与活体肝移植比较，脑死亡后供肝质量明显降低，移植后早期移植器官功能不全(earlyallograftdysfunction)甚至原发性无功能(primarynofunction,PNF)的发生率显著增高，这主要归因于脑死亡引起的损伤(Braindeath-inducedinjury,BDI)。因此，脑死亡供体的合理使用是解决供体来源紧缺最有前景的方案之一。BD可引起机体一系列严重复杂的病理生理改变，包括交感神经兴奋引起儿茶酚胺大量释放，产生强烈的血管收缩，造成血管内皮细胞损伤，诱发各种炎症介质的高表达、隐蔽抗原的暴露等形成供体的“前炎症状态”(pro-inflammatorystate)以及血流动力学不稳定造成低灌注、缺血缺氧异常改变，组织细胞氧需/氧供失衡，从而出现不同程度的器官损伤。研究发现：补体(complement)还参与不同器官移植的免疫应答及损伤机制；例如心脏、肾脏移植存在补体的活化并参与移植损伤，靶向性抑制补体显著减轻BDD移植肾及移植心的损伤。然而基于BDD肝移植背景下损伤(BDI、IRI、级联损伤)与修复中补体相关机制研究鲜见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供靶向补体抑制剂在制备改善脑死亡供肝药物中的应用。专利技术人前期已有研究发现小鼠肝脏缺血再灌注模型中，肝脏补体明显活化，而通过靶向补体抑制剂CR2-Crry处理可明显改善肝脏缺血再灌注损伤。专利技术人利用补体受体2(Complementreceptor2,CR2)连接膜结合性调节因子(Crry)，通过CR2靶向性结合到补体活化和损伤局部，利用膜结合性调节因子特异性调节补体级联反应的不同阶段，通过建立小鼠脑死亡模型，比较CR2-Cryy治疗组与对照组的肝功能改变，结果表明靶向补体抑制剂CR2-Crry有效改善脑死亡后供体肝的损伤，并减轻肝脏炎症反应、氧化应激损伤，减少肝细胞凋亡。本专利技术还通过补体基因敲除小鼠进一步验证了该补体抑制剂在改善脑死亡后供体肝功能的作用。因此，本专利技术的第一个目的是提供靶向补体抑制剂CR2-Crry在制备改善脑死亡供肝药物中的应用，所述的靶向补体抑制剂CR2-Crry，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。优选，所述的改善脑死亡供肝药物为减轻脑死亡后供体肝损伤的药物。优选，所述的改善脑死亡供肝药物为减轻脑死亡后供体肝炎症反应的药物。优选，所述的改善脑死亡供肝药物为减少脑死亡后供体肝氧化应激损伤和细胞凋亡的药物。优选，所述的改善脑死亡供肝药物为减少脑死亡后供体肝肝细胞线粒体损伤的药物。本专利技术的第二个目的是提供一种改善脑死亡供肝的药物，其含有有效量的靶向补体抑制剂CR2-Crry作为活性成分，所述的靶向补体抑制剂CR2-Crry，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术具有以下有益效果：1.靶向补体抑制剂CR2-Crry具有靶向性强、高效、安全、不影响宿主全身免疫功能等优点。2.该靶向补体抑制剂可改善脑死亡后供体肝肝功能。脑死亡前30min向供体注射CR2-Crry0.25mg，脑死亡后4h、6h，取肝脏组织及血清，通过病理学及血清学检测到肝功能改变。3.该靶向补体抑制剂可改善脑死亡后供体肝炎症反应。4.该靶向补体抑制剂可改善氧化应激损伤及肝细胞凋亡。5.该靶向补体抑制剂可减少脑死亡后供体肝肝细胞线粒体损伤。附图说明图1是脑死亡后小鼠动脉血压；脑死亡模型组血压均低于假手术组(Sham)，野生鼠脑死亡组(BD)血压波动与补体缺乏组(KO)及CR2-Crry处理组(BD+CR2-Crry)无显著差异。图2是脑死亡供体的肝脏损伤情况及血清学检测肝、肾、心功能变化情况；A：脑死亡后4h和6h，各组小鼠肝组织HE染色；B：HE染色评分情况。；C-H：血清学检测肝、肾、心功能改变，检测指标依次分别为血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清肌酐(CRE)、血尿素氮(BUN)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I水平；*，与Sham组比较，P均<0.05；**，与Sham组比较，P均<0.01；#，与BD组比，P均<0.05。图3是脑死亡后肝组织补体C3沉积水平。图4是脑死亡供肝的炎症因子表达水平，A-C：分别为通过Elisa检测血清MCP-1、IL-6、TNF-α结果；*，与假手术组比较，P<0.01；#,表示与野生鼠脑死亡组比较，P<0.01。图5是脑死亡供肝的粘附分子表达水平，A-D：依次分别为RT-PCR检测组织中VCAM-1、ICAM-1、P-SELE、E-SELERNA表达情况。图6是脑死亡后小鼠肝组织凋亡情况，A图上半部分：脑死亡后4、6h各组小鼠肝组织凋亡情况；A图下半部分：透射电镜观察各组线粒体损伤情况；B：TUNEL检测统计结果；*，与假手术组比较，P<0.01；#，表示与野生鼠脑死亡组比较，P<0.01。图7是检测线粒体凋亡途径相关指标表达水平，A：WB检测线粒体凋亡途径中CytC、bcl-2、bax、caspase3、caspase9蛋白的表达情况；B-D：RT-PCR检测肝组织中氧化应激指标SOD2，HIF1α，HSP70.2的表达情况；*，与假手术组比较，P<0.01；#，表示与野生鼠脑死亡组比较，P<0.01。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。以下实例中未具体注明的实验方法，均可按照常规方法进行，或按照所用产品生产厂商的使用说明；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径得到。以下实施例中所用的野生型小鼠均为C57BL/6野生型小鼠。靶向补体抑制剂CR2-Crry的制备：是将补体受体2(Complementreceptor2,CR2)连接膜结合性调节因子(Crry)而制备得到的，具体制备参见：AtkinsonC,SongH,LuB,etal.TargetedcomplementinhibitionbyC3drecognitionamelioratestissueinjurywithoutapparentincreaseinsusceptibilitytoinfection.JClinInvest.2005；115(9):2444-2453文中Methods中CR2-Crryfusionprotein的制备。制备的用于实施例中的靶向补体抑制剂CR2-Crry的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，含585个氨基酸。补体C3基因敲除小鼠(C3-/-小鼠、C3敲除小鼠)为B6；129S4-C3tm1Crr/J品系，购自TheJacksonLaboratories(BarHarbor,Maine,USA)。实施例11.实验相关整体模型的建立小鼠麻醉后通过颈动脉插管监测小鼠动脉压，将小鼠仰卧固定于手术架上，行气管切开接导管。然后将小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.靶向补体抑制剂CR2‑Crry在制备改善脑死亡供肝药物中的应用，所述的靶向补体抑制剂CR2‑Crry，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.靶向补体抑制剂CR2-Crry在制备改善脑死亡供肝药物中的应用，所述的靶向补体抑制剂CR2-Crry，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的改善脑死亡供肝药物为减轻脑死亡后供体肝损伤的药物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的改善脑死亡供肝药物为减轻脑死亡后供体肝炎症反应的药物。4.根据权利要求1所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：何松青，林承杰，雷彪，胡志高，袁观斗，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：广西,45