黑色素瘤和其他癌症的免疫治疗制造技术

本发明专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白、核酸和细胞。特别是，本发明专利技术涉及癌症的免疫疗法。本发明专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(能够例如作为刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗组合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】黑色素瘤和其他癌症的免疫治疗
本专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白质、核酸和细胞。特别是，本专利技术涉及癌症的免疫疗法。本专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗复合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。本专利技术涉及数种新型肽序列及其变体，它们源自人肿瘤细胞的HLA-I类分子，可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物中或作为开发药物/免疫活性化合物和细胞的目标。
技术介绍
黑色素瘤全球范围内，每10万人中黑色素瘤的确诊发病率为3.0，占所有癌症病例的1.7％。2012年，有232,000名女性被诊断患有黑色素瘤。10万名女性的死亡率为0.7，远低于发病率(Ferlayetal.，2013)。罹患黑色素瘤的终生风险白人约为2.4％(1/40)，黑人约为0.1％(1/1,000)，西班牙裔人为0.5％(1/200)。虽然黑色素瘤诊断时的平均年龄为62岁，但它是年轻人(特别是年轻女性)中最常见的癌症之一(AmericanCancerSociety，2015)。对于有局部黑色素瘤的患者，适当进行手术切除预后良好，这反映在相对较低的黑色素瘤死亡率(WorldCancerReport，2014)。同时，I期和II期病变的5年生存率分别超过90％和80％(Kaufmanetal.，2013)。但是，转移性黑色素瘤在很大程度上对当前的疗法有抗性(WorldCancerReport，2014)。IIIA-C期的5年生存率为78-40％，IV期为5-20％(AmericanCancerSociety，2015)。除了阳光照射外，发生黑色素瘤的风险还受其他环境因素影响，如：年龄、性别以及解剖位置和个体易感性。紫外线发光鞣制装置也增加恶性黑色素瘤的风险。在20-40％有黑色素瘤病史的家族中发现到了CDKN2A突变(WorldCancerReport，2014)。黑色素瘤主要发生于皮肤(超过95％的病例)，但也发现于口腔、鼻腔、肛门和阴道黏膜以及较少情况下发生于肠道。此外，结膜、视网膜和脑膜中存在黑色素细胞。黑色素瘤可以在组织学上亚型分类为浅表扩散型黑色素瘤、结节性黑色素瘤、末梢性斑状黑色素瘤和雀斑型黑素瘤。黑色素瘤根据TNM分类方法进行分类。根据美国癌症联合会分期手册的建议，黑色素瘤患者分为三组：无转移证据的局部疾病(I-II期)、区域性疾病(III期)和远处转移性疾病(IV期)(WorldCancerReport，2014)。黑色素瘤的标准疗法是手术完全切除包括周围的健康组织。如果切除不完全或不能完全切除，则患者接受主要的辐射治疗，这种疗法可以与干扰素α联合使用于晚期疾病(IIB/C和IIIA-C期)。在德国，不存在用于治疗晚期和转移性黑色素瘤患者的标准治疗方案。因此，患有晚期和转移性黑色素瘤的患者应在临床研究的背景下进行治疗。治疗选择包括单药化疗，多药化疗和采用特异性抑制剂的靶向治疗。达喀尔巴嗪、替莫唑胺和福莫司汀目前用于单药化疗的试验。在多药化疗试验中研究了不同的化学治疗制剂的组合：CarboTax方案(卡铂+紫杉醇)、GemTreo方案(吉西他滨+曲奥舒凡)、DVP方案(达喀尔巴嗪+长春地辛+顺铂)、BHD方案(卡莫司汀+羟基脲+达喀尔巴嗪)和BOLD方案(博来霉素+长春新碱+洛莫司汀+达喀尔巴嗪)。此外，目前在临床试验中评估了与易普利姆玛联合的化疗方法以及针对各基因内突变的患者给予特异性BRAF、c-KIT和N-RAS抑制剂(S3-LeitlinieMelanom，2013)。增强抗肿瘤免疫反应似乎是晚期黑色素瘤治疗的一种有前景的策略。在美国，免疫检查点抑制剂易普利姆玛以及BRAF激酶抑制剂vemurafenib和dabrafenib和MEK抑制剂trametinib已经被批准用于治疗晚期黑色素瘤。这两种方法均可增加患者的抗肿瘤免疫性——易普利姆玛直接透过减少T细胞抑制起作用，激酶抑制剂间接透过增强黑色素细胞分化抗原的表达起作用(SrivastavaandMcDermott，2014)。Vemurafenib的反应率为40-50％，但中位持续时间仅为5-6个月(WorldCancerReport，2014)。此外，vemurafenib与cobimetinib的组合(后者为另一种针对激酶MEK的MAPK通路抑制剂)获得了FDA的批准(NationalCancerInstitute，2015)。几种不同的疫苗接种方法已经在晚期黑色素瘤中进行了评估。到目前为止，III期临床试验显示相当令人失望的结果，疫苗接种策略显然需要加以改进。T细胞过继转移显示了晚期黑色素瘤治疗的巨大潜力。浸润淋巴细胞的体外增大自体肿瘤以及含有对癌症-睾丸抗原NY-ESO-1具有高亲和力的T细胞受体的T细胞在转移到黑素瘤患者时具有显著有益的和较低的毒性作用。不幸的是，含有对黑素细胞特异性抗原MART1和gp100以及癌症-睾丸抗原MAGEA3具有高亲和力T细胞受体的T细胞在临床试验中诱导相当的毒性作用。因此，T细胞过继转移具有较高的治疗潜力，但这些治疗的安全性和耐受性需要进一步提高(PhanandRosenberg，2013；HinrichsandRestifo，2013)。仅在最近，FDA才批准了第一种溶瘤病毒治疗药物talimogenelaherparepvec(T-VEC)。该机构批准T-VEC用于治疗一些转移性黑色素瘤不能手术切除的患者(NationalCancerInstitute，2015)。考虑到治疗癌症相关的严重副作用和费用，通常有必要确定可用于治疗癌症的因子，尤其是黑色素瘤。通常也有必要确定代表癌症生物标志物的因子，尤其是黑色素瘤，从而更好地诊断癌症、评估预后和预测治疗成功性。癌症免疫治疗代表了癌症细胞特异性靶向作用的一个选项，同时最大限度地减少副作用。癌症免疫疗法利用存在的肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原(TAA)的目前分类主要包括以下几组：a)癌-睾丸抗原：T细胞能够识别的最先确认的TAA属于这一类抗原，由于其成员表达于组织学相异的人肿瘤中、正常组织中、仅在睾丸的精母细胞/精原细胞中、偶尔在胎盘中，因此，它最初被称为癌-睾丸(CT)抗原。由于睾丸细胞不表达HLAI类和II类分子，所以，在正常组织中，这些抗原不能被T细胞识别，因此在免疫学上可考虑为具有肿瘤特异性。CT抗原大家熟知的例子是MAGE家族成员和NY-ESO-1。b)分化抗原：肿瘤和正常组织(肿瘤源自该组织)都含有TAA。大多数已知的分化抗原发现于黑色素瘤和正常黑色素细胞中。许多此类黑色素细胞谱系相关蛋白参与黑色素的生物合成，因此这些蛋白不具有肿瘤特异性，但是仍然被广泛用于癌症的免疫治疗。例子包括，但不仅限于，黑色素瘤的酪氨酸酶和Melan-A/MART-1或前例腺癌的PSA。c)过量表达的TAA：在组织学相异的肿瘤中以及许多正常组织中都检测到了基因编码被广泛表达的TAA，一般表达水平较低。有可能许多由正常组织加工和潜在提呈的表位低于T细胞识别的阈值水平，而它们在肿瘤细胞中的过量表达能够通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQ ID No.1至SEQ ID No.237的氨基酸序列、以及与SEQ ID No.1至SEQ ID No.237具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导T细胞与该变体肽发生交叉反应，其中所述肽不是全长多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.21 GB 1606919.7;2016.04.21 US 62/325,7731.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.237的氨基酸序列、以及与SEQIDNo.1至SEQIDNo.237具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导T细胞与该变体肽发生交叉反应，其中所述肽不是全长多肽。2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽有能力与MHC-I或-II类分子结合，其中所述肽与MHC结合时能够被CD4和/或CD8T细胞识别。3.根据权利要求1或2所述的肽或其变体，其中氨基酸序列包括SEQIDNo.1至SEQIDNo.237中任一个的连续氨基酸延伸区段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽或其变体的总长度为8至100个氨基酸、优选为8至30个氨基酸、更优选为8至16个氨基酸、最优选为该肽由或基本由SEQIDNo.1至SEQIDNo.237中任一项的氨基酸序列组成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽被修饰，和/或包含非肽键。6.根据权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽为融合蛋白的一部分，尤其包含HLA-DR抗原相关不变链(Ii)的N-端氨基酸。7.一种抗体或其片段，特别是可溶性或膜结合性抗体，优选为单克隆抗体，其特异性地识别权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为与MHC分子结合时的权利要求1至5中任一项所述的肽或变体。8.一种T细胞受体或其片段，优选为可溶性或膜结合的T细胞受体，其与HLA配体反应，其中所述配体是权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为与MHC分子结合时的权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体。9.根据权利要求8所述的T细胞受体，其中所述配体氨基酸序列与SEQIDNo.1至SEQIDNo.237中的任一项具有至少88％一致性，或其中所述配体氨基酸序列由SEQIDNo.1至SEQIDNo.237中的任一项组成。10.根据权利要求8或9所述的T细胞受体，其中所述T细胞受体作为可溶性分子提供，且任选地携带其他效应子功能，例如免疫刺激结构域或毒素。11.一种适体，其特异性地识别权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为权利要求1至5中任一项所述的与MHC分子结合的肽或其变体。12.一种核酸，或一种表达该核酸的表达受体，其中所述核酸编码权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段，其任选地与异源启动子序列连接。13.一种重组宿主细胞，其包含权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、或权利要求12所述的核酸或表达载体，其中所述宿主细胞优选地选自抗原提呈细胞，例如树突状细胞、T细胞或NK细胞。14.一种体外制备激活的T淋巴细胞的方法，该方法包括将T细胞与载有抗原的人I或II类MHC分子体外接触一段时间，该时间足以以抗原特异性的方式激活T细胞，人I或II类MHC分子在合适的抗原提呈细胞表面或模拟抗原提呈细胞的人工构建体的表面上表达，其中所述抗原为权利要求1至4中任一项所述的肽。15.一种激活的T淋巴细胞，由权利要求14所述的方法制成，其有选择性地识别一种细胞，该细胞提呈含权利要求1至4任一项中给定氨基酸序列的多肽。16.一种药物组合物，其包含至少一种活性成分、或结合或标记的活性成分，和药学上可接受的的载体，以及任选地，药学上可接受的的赋形剂和/或稳定剂，其中活性成分选自权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、权利要求11所述的适体、权利要求12所述的核酸或表达载体、权利要求13所述的宿主细胞、或权利要求15所述的激活的T淋巴细胞。17.一种制备权利要求1至6中任一项所述的肽或其变体、权利要求7所述的抗体或其片段、或权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段的方法，所述方法包括培养权利要求13所述的宿主细胞，以及从所述宿主细胞和/或其培养基中分离出所述肽或其变体、所述抗体或其片段、或所述T细胞受体或其片段。18.权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、权利要求11所述的适体、权利要求12所述的核酸或表达载体、权利要求13所述的宿主细胞、或权利要求15所述的激活的T淋巴细胞在医学中的用途。19.一种杀灭患者中靶细胞的方法，其中该靶细胞提呈含有权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮卡·桑塔格，托尼·温斯切尼克，安德烈·马尔，奥利弗·施尔，延斯·弗里切，哈普瑞特·辛格，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE