本发明专利技术涉及一种结直肠癌相关环状RNA基因、结直肠癌分子标志物及其应用。该结直肠癌分子标志物与病人的年龄、性别无关，而与肿瘤的大小和TNM分期及远处转移有相关性，能较好地反映结直肠肿瘤的发生发展，可用于监测结直肠肿瘤对治疗措施的反应等，是一种良好的结直肠癌分子标志物。该结直肠癌分子标志物的发现，为进一步研究结直肠癌的发病机理，探索结直肠癌的治疗靶点提供了新的实验理论基础和新的方向，并可应用在制备诊断或检测结直肠癌患者试剂的领域，丰富了结直肠癌的诊断和检测手段。
【技术实现步骤摘要】
结直肠癌相关环状RNA基因、结直肠癌分子标志物及其应用
本专利技术涉及结直肠癌领域，特别是涉及一种结直肠癌相关环状RNA基因、结直肠癌分子标志物及其应用。
技术介绍
结直肠癌是常见的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌，是近几十年来发病数和死亡数在世界大多数国家和地区上升最快的肿瘤之一。近年的流行病学资料显示，结直肠癌已上升为全球第三位最常见的癌症，2000年全世界有70万人患结直肠癌，其中50万人因此而死亡。在我国，随着人们生活方式及饮食习惯的改变，发病患者数也在增加，尤其是在北京、上海等发达的城市或地区。据北京市肿瘤防治研究所资料显示，目前北京市每年新增癌症患者约2万名，发病率为179/10万，其中结肠癌位居第二位。据上海地区调查显示，我国肠癌发病率的增速是世界平均水平的两倍。环状RNA(circRNA)有较强的组织、细胞特异性和高度的保守性，其闭合环状结构使其比线性RNA更稳定，不易被RNA酶降解，表明circRNA有作为疾病分子诊断标志物的潜能。研究发现人外周血中含有大量的circRNAs，同时，在外泌体中也有大量的circRNAs富集，而人体的外周血血清中即含有大量的外泌体，这样通过对患者的血清进行检测即可完成circRNAs的检测。最近有研究发现circRNAhsa_circ_0000190在胃癌病人的血浆和组织中表达均降低，且与传统的胃癌标志物CEA和CA19-9相比，hsa_circ_0000190具有更好的特异性和敏感性。另一circRNAciRS-7的表达水平与肝癌中AFP表达水平密切相关。这些均表明环状RNAs作为肿瘤早期标志物的筛查是一项切实可行的检测手段。还有研究发现circRNAciRS-7在结直肠癌中表达水平增加且与病人的预后生存率相关。但与结直肠癌相关的环状RNA还有很多，研究寻找这些环状RNA对结直肠癌的防治诊断具有重要的研究价值和临床价值。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种与结直肠癌相关的环状RNA基因。一种与结直肠癌相关的环状RNA基因，具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了上述环状RNA基因在制备诊断或检测结直肠癌试剂中的应用。本专利技术还提供了上述环状RNA基因在制备诊断或检测结直肠癌基因检测芯片中的应用。本专利技术还提供了一种结直肠癌分子标志物，所述结直肠癌分子标志物为环状RNA，其具有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了上述结直肠癌分子标志物在制备诊断或检测结直肠癌试剂中的应用。本专利技术还提供了上述结直肠癌分子标志物在制备诊断或检测结直肠癌基因检测芯片中的应用。本专利技术还提供了一种PCR引物，包括可特异性扩增上述结直肠癌分子标志物的上游引物和下游引物。在一个实施例中，所述上游引物具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述下游引物具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了一种用于检测结直肠癌的试剂盒，包括上述PCR引物。在一个实施例中，还包括RNA提取试剂。专利技术人对结直肠癌患者的癌组织与周围正常肠粘膜组织进行了测序分析，筛选到了23个差异表达显著地环状RNA，其中3个表达上调，20个表达下调。进一步地，对其中10个在结直肠癌与癌旁组织中差异最显著的环状RNA，通过荧光定量PCR的方式进行了验证，发现荧光定量PCR的结果与测序结果一致，其中上述结直肠癌分子标志物在测序分析和荧光定量PCR结果中组间差异均非常显著。进一步地通过对收集的病人临床资料进行分析，发现该结直肠癌分子标志物与病人的年龄、性别无关，而与肿瘤的大小和TNM分期及远处转移有相关性，能较好地反映结直肠肿瘤的发生发展，可用于监测结直肠肿瘤对治疗措施的反应等，是一种良好的结直肠癌分子标志物。该结直肠癌分子标志物的发现，为进一步研究结直肠癌的发病机理，探索结直肠癌的治疗靶点提供了新的实验理论基础和新的方向，并可应用在制备诊断或检测结直肠癌患者试剂的领域，丰富了结直肠癌的诊断和检测手段。附图说明图1为测序样本文库的检测大小结果图；图2为差异circRNA聚类图；图3为差异circRNA的亲本基因的GO功能分类统计图；图4为差异circRNA的亲本基因的KEGG富集散点图；图5为差异circRNA的荧光定量PCR结果与测序分析结果的对比图；图6为FISH探针检测circ_0000826在结直肠癌组织中表达的显微照片；图7为circ_0000826经外扩及内扩引物的扩增片段的琼脂糖凝胶电泳图；图8为circ_0000826的Sanger测序结果图；图9为circ_0000826的形成示意图；图10为circ_0000826的序列比对图；图11为circ_0000826在30例结直肠癌组织中的倍比关系图；图12为circ_0000826在配对结直肠正常和癌组织中的平均表达水平图；图13为circ_0000826在7种结直肠癌细胞和正常结直肠粘膜上皮细胞NCM460中的表达图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。下面主要结合具体实施方式和附图对结直肠癌相关环状RNA基因、结直肠癌分子标志物及其应用作进一步详细的说明。一、样品RNA-seq测序1.1RNA的抽提与纯化首先收集3例结直肠癌患者的癌组织和周围正常粘膜组织，并采用MirVanaTMmiRNAIsolation提取试剂盒(Cat#AM1561,Ambion)根据其标准操作流程进行样品的总RNA抽提。抽提所得总RNA经AgilentBioanalyzer2100(Agilenttechnologies,SantaClara,CA,US)电泳质检合格后，使用RNACleanXPKit(CatA63987,BeckmanCoulter,Inc.KraemerBoulevardBrea,CA,USA)和RNase-FreeDNaseSet(Cat#79254,QIAGEN,GmBH,Germany)纯化总RNA。1.2RNA质检测序实验起始样本为总RNA，总RNA经NanoDropND-2000分光光度计及AgilentBioanalyzer2100进行质检，质检合格的RNA可进行后续的测序实验。质控标准如表1所示，其中RIN即RNAIntegrityNumber，RNA完整性的检测指标，从0-10，分值越高，RNA的完整性越好。表1RNA质控标准及说明1.3文库构建及质检对纯化后的总RNA进行rRNA去除、片段化、第一链cDNA合成、第二链cDNA合成、末端修复、3’末端加A补平、接头连接、扩增富集等步骤，完成测序样本文库构建。其中，所用试剂如表2所示。表2文库构建和质检所用试剂所建文库使用2.0Fluorometer检测浓度，Agilent2100检测文库的大小，结果如本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与结直肠癌相关的环状RNA基因，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
2018.08.27 CN 20181098007821.一种与结直肠癌相关的环状RNA基因，其特征在于，具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的环状RNA基因在制备诊断或检测结直肠癌试剂中的应用。3.如权利要求1所述的环状RNA基因在制备诊断或检测结直肠癌基因检测芯片中的应用。4.一种结直肠癌分子标志物，其特征在于，所述结直肠癌分子标志物为环状RNA，其具有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。5.如权利要求4所述的结直肠癌分子标志物在制备诊...
【专利技术属性】
技术研发人员：张哲莹，杨瑞，王海军，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南,41
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