口腔鳞状细胞癌恶性程度相关标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了SIX4基因可作为评估口腔鳞状细胞癌恶化程度的分子标志物。本发明专利技术通过高通量测序和QPCR研究获知，SIX4基因在高分化的口腔鳞状细胞癌中的含量低于低分化的口腔鳞状细胞癌。根据上述研究成果，本发明专利技术还可以开发用于评估口腔鳞状细胞癌恶化程度的试剂盒，该试剂盒检测效果显著，可在临床上推广使用。

【技术实现步骤摘要】
口腔鳞状细胞癌恶性程度相关标志物及其应用
本专利技术涉及生物医学领域，具体地，本专利技术涉及口腔鳞状细胞癌恶性程度相关标志物及其应用，更具体地，涉及SIX4作为口腔鳞状细胞癌恶性程度的分子标志物的应用。
技术介绍
口腔鳞状细胞癌是全球最常见的十大癌症之一，是最常见的口腔肿瘤，占比约达90％以上，每年约有500000新增病例，且近年来仍呈上升趋势。口腔鳞状细胞癌不仅危及患者的生命，还影响其美观和外形，以及患者的咀嚼、语音、吞咽等生存质量。口腔鳞状细胞癌的发生与很多因素有关系，往往是多种因素综合作用的结果。在临床工作中口腔癌定义为包括牙龈癌、舌癌、软硬愕癌、上下颌骨恶性肿瘤、口底癌、口咽癌、涎腺癌、唇癌、和上领窦癌以及发生于颌面部皮肤黏膜的癌症等。口腔癌的发生与以下几点有关：首先，留在扣去内的残根或锐利的牙尖、不合适的口腔修复体长期刺激口腔黏膜，产生慢性溃疡逐渐发展为癌症。其次，患者口腔卫生差，创造了较好的细菌或霉菌在口腔内滋生、繁殖的条件，从而有利于破坏口腔组织的亚硝胺及其前体的形成。另外口腔黏膜疾病，比如：白斑及扁平苔鲜等疾病使一些细胞处于增生状态，对致癌因素更加敏感，如此多种因素可能促进口腔癌的发生。核及各类有放射性的物质辐射对人与动物都有诱发癌症的作用。临床工作中常见的白血病和淋巴瘤放射治疗后的患者，由于放射的作用会引起口腔黏膜表皮样癌和唾液腺恶性肿瘤。现代都市生活中的空气污染也是口腔恶性肿瘤的致病因素，比如：大型重工业生产中排放的所煤烟污染及纺织工业中排放的有毒物质都是致癌因素。还有，维生素A缺乏可引起口腔黏膜上皮增厚、角化过度而与口腔癌的发生有关。人口统计学研究显示摄入维生素A低的国家口腔癌发病率高。也有认为与微量元素摄入不足有关，如食物含锌量低。锌是动物组织生长不可缺少的元素，锌缺乏可能导致黏膜上皮损伤，为口腔癌的发生创造了有利条件。在我国，口腔癌与吸烟也有很大的关系，吸烟的过程中，有害物质可以侵入口腔黏膜上皮，破坏上皮细胞功能，引起机体分子机构的变化而致病。尽管目前有包括手术治疗、放化疗、生物治疗、基因靶向治疗等在内的综合序列治疗法，但是口腔鳞状细胞癌的长期治疗效果仍不理想。据文献报道，约有2/3的口腔鳞状细胞癌患者被诊断时已处于癌症晚期，而在过去的30年中，晚期口腔鳞状细胞癌的5年生存率只有40％～50％。此外，晚期患者经历手术、放疗和化疗等综合治疗后，面部外形严重破坏，生存质量明显降低。但是，对于早期的OSCC患者5年生存率高达85.4％，早期患者治疗后生存质量也显著提高。因此，口腔鳞状细胞癌的早期诊断对提高患者生存预后至关重要。特异性和敏感度高的标记物能对口腔鳞状细胞癌患者的早期诊断，治疗和预后判断提供很大的帮助。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种通过检测SIX4基因或蛋白表达差异来评估口腔鳞状细胞癌恶性程度的方法。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了检测SIX4基因或SIX4蛋白的产品在制备评估口腔鳞状细胞癌恶性程度的工具中的用途。进一步，所述检测SIX4基因或SIX4蛋白的产品包括检测SIX4基因或SIX4蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合SIX4基因的核酸或者能够结合SIX4蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测SIX4基因的表达水平；所述物质能够检测SIX4蛋白的表达水平。本专利技术的检测SIX4基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。上面所述的核酸包括扩增SIX4基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。在本专利技术的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQIDNO.1(正向序列)和SEQIDNO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的检测SIX4蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的检测SIX4蛋白的产品包括特异性结合SIX4蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的检测SIX4蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的SIX4蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对SIX4蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测SIX4基因或SIX4蛋白的产品在制备评估口腔鳞状细胞癌恶性程度的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测SIX4基因或SIX4蛋白的产品在制备评估口腔鳞状细胞癌恶性程度的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测SIX4基因或SIX4蛋白的产品包括检测SIX4基因或SIX4蛋白的表达水平的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用所述产品检测受试者样本中的SIX4基因或SIX4蛋白的表达水平；SIX4基因或SIX4蛋白的表达水平越高，代表口腔鳞状细胞癌恶性程度越高。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述受试者样本的来源是组织。5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合SIX4基因的核酸或者能够结合SIX4蛋白的物质；所述核酸能够检测SIX4基因的表达水平；所述物质能够检测SIX4蛋白的表达水平。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨森，郭丽娟，
申请(专利权)人：遂宁市中心医院，
类型：发明
国别省市：四川,51