一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D‑氨基酸的方法，该方法是将鹅去氧胆酸和α‑酮酸置于含7α‑HSDH和DAADH及NADP的溶液体系中进行酶催化反应，反应液采用超滤膜分离得到浓缩混合酶液，透析液经过调节pH进行结晶，过滤分离，得到7‑KLCA湿粉和滤液；滤液通过层析处理得到D‑氨基酸；7‑KLCA湿粉置于含葡萄糖、NADP、7β‑HSDH及GDH溶液体系中进行酶催化反应，反应液采用超滤膜分离，得到浓缩的混合酶液，透析液通过结晶、过滤分离，得到熊去氧胆酸。该方法可以同时获得UDCA和高手性纯度的D‑氨基酸，且酶利用率高，简化了合成步骤，成本降低，同时，反应过程不需加入金属还原试剂和有机溶剂，条件温和，环境友好，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法
本专利技术涉及一种熊去氧胆酸和D-氨基酸的合成方法，特别涉及一种利用酶法偶联技术合成熊去氧胆酸(UDCA)和高手性纯度D-氨基酸的方法，属于生物催化

技术介绍
熊去氧胆酸(UrsodeoxycholicAcid，UDCA)，化学名为3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸，被人们从熊胆中被发现。目前，UDCA在临床上被广泛用于治疗各种胆石疾病，各种急性、慢性肝病，同时也能提高肝脏移植手术后的成活率。天然熊去氧胆酸来源于熊胆汁，即活熊胆汁引流。然而随着市场的需求量不断增加以及活熊取胆有违野生动物保护法，天然熊去氧胆酸早已不能满足市场需求。因此，通过人工合成获得熊去氧胆酸变得越来越重要。目前，国内外主要以鹅去氧胆酸(CDCA)为原料，通过化学法或酶法制备UDCA。化学法通过对CDCA的氧化和还原反应，制备UDCA，中间用到了大量的有机溶剂和氧化还原试剂，且处理过程复杂，产生的废水很难处理。中国专利CN105861613A报道了采用酶法制备UDCA的方法，但是反应体系中加入了大量有机试剂，生产过程中需要对溶剂进行回收处理。其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D‑氨基酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将鹅去氧胆酸和α‑酮酸置于含7α‑HSDH和DAADH及NADP的溶液体系中进行酶催化反应，得到含7‑KLCA和D‑氨基酸的酶反应液；2)将含7‑KLCA和D‑氨基酸的酶反应液采用超滤膜分离，膜内为浓缩的混合酶液，膜外透析液经过调解pH至3.0～6.0进行结晶，过滤分离，得到7‑KLCA湿粉和滤液；3)所述滤液调节pH至5～9后，采用树脂进行层析处理，得到D‑氨基酸；4)所述7‑KLCA湿粉置于含葡萄糖、NADP、7β‑HSDH及GDH溶液体系中进行酶催化反应，得到含熊去氧胆酸的酶反应液；5)将含...

【技术特征摘要】
1.一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将鹅去氧胆酸和α-酮酸置于含7α-HSDH和DAADH及NADP的溶液体系中进行酶催化反应，得到含7-KLCA和D-氨基酸的酶反应液；2)将含7-KLCA和D-氨基酸的酶反应液采用超滤膜分离，膜内为浓缩的混合酶液，膜外透析液经过调解pH至3.0～6.0进行结晶，过滤分离，得到7-KLCA湿粉和滤液；3)所述滤液调节pH至5～9后，采用树脂进行层析处理，得到D-氨基酸；4)所述7-KLCA湿粉置于含葡萄糖、NADP、7β-HSDH及GDH溶液体系中进行酶催化反应，得到含熊去氧胆酸的酶反应液；5)将含熊去氧胆酸的酶反应液采用超滤膜分离，膜内为浓缩的混合酶液，膜外透析液调解pH至3.0～6.0进行结晶，过滤分离，得到熊去氧胆酸。2.根据权利要求1所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：步骤1)中，α-酮酸用量为鹅去氧胆酸摩尔量的1～2倍；7α-HSDH用量为鹅去氧胆酸质量的0.4～1.0倍*1Mu/kg；DAADH用量为鹅去氧胆酸质量的0.4～1.0倍*1Mu/kg；NADP用量为鹅去氧胆酸质量的1‰～5‰。3.根据权利要求2所述的一种基于酶法偶联技术合成熊去氧胆酸和高手性纯度D-氨基酸的方法，其特征在于：所述α-酮酸具有式1结构：其中，R为脂肪烃基或芳基。4.根据权利要求2所述的一种基于酶法偶联技术合成...

【专利技术属性】
技术研发人员：王胜锋，黄毅，曾红宇，许岗，
申请(专利权)人：湖南宝利士生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43