一种三聚氰胺检测方法技术

本发明专利技术公开了一种三聚氰胺检测方法，以牛血清白蛋白（BSA）作为还原剂、稳定剂，还原HAuCl4，在碱性水溶液中合成了具有红色荧光的金纳米簇BSA‑AuNCs，并通过构建含有已知三聚氰胺浓度的检测体系，采用荧光光谱仪测定其在635nm处的荧光发射强度并制作标准曲线，然后将经过前处理的待测对象加入巯基苯硼酸修饰纳米金簇溶液中，最后测定其在635nm处的荧光强度，通过对照标准曲线得到待测对象中的三聚氰胺的浓度，准确率高，处理简单，整个流程操作简便，响应快速，能够满足当前人们对牛奶制品中三聚氰胺残留快速筛查的检测需要。

【技术实现步骤摘要】
一种三聚氰胺检测方法
本专利技术属于食品质量检测
，尤其涉及一种三聚氰胺检测方法。
技术介绍
三聚氰胺俗称密胺、蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类。不可燃，在常温下性质稳定。水溶液呈弱碱性（pH值=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。其含氮量高达66.6%，且它是一种白色结晶粉末，没有什么气味和味道，掺杂后不易被发现，对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物，若在100g牛奶中添加0.1g三聚氰胺，就能提高0.4%的蛋白质虚假含量。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.5～6.5）与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。其中三聚氰胺和三聚氰酸通过分子间氢键相互作用，会形成不溶于水的网状缔合大分子复合物，造成严重的肾结石。中国国家食品质量监督检验中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的，故暂未设定像农药残留那样的标准限制。10月8日，卫生部、工业和信息化部、农业部、国家工商行政管理总局和国家质量监督检验检疫总局联合发布公告，制定三聚氰胺在乳与乳制品中的临时管理值：婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1mg/kg，高于1mg/kg的产品一律不得销售。液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。2012年7月5日，联合国负责制定食品安全标准的国际食品法典委员会为牛奶中三聚氰胺含量设定了新标准，以后每公斤液态牛奶中三聚氰胺含量不得超过0.15mg。国际食品法典委员会说，三聚氰胺含量新标准将有助于各国政府更好地保护消费者权益和健康。目前针对三聚氰胺检测主要有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法等。此外，酶联免疫吸附法、毛细管电色谱法、质谱、红外吸收光谱也有文献报道，这些方法一般需要进行复杂的样品前处理，仪器价格昂贵，且方法操作复杂，检测成本高，需要专业人员才能操作，不能完全满足对牛奶中三聚氰胺残留快速筛查的检测需要。所以，提出操作简便，快速响应，且具有较低检测限的三聚氰胺检测方法很有必要。
技术实现思路
本专利技术目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种三聚氰胺检测方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种三聚氰胺检测方法，以牛血清白蛋白BSA作为还原剂、稳定剂，还原HAuCl4制备得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇，并通过构建含有已知三聚氰胺浓度的检测体系，采用荧光光谱仪测定其在635nm处的荧光发射强度并制作标准曲线，然后将经过前处理的待测对象加入巯基苯硼酸修饰纳米金簇溶液中，测定其在635nm处的荧光强度，通过对照标准曲线得到待测对象中的三聚氰胺的浓度。所述巯基苯硼酸修饰的金纳米簇的制备方法包括以下步骤：(1)将10mL浓度为1mM的HAuCl4溶液和10mL浓度为50mg/mL的BSA溶液均匀混合，再加入2mL浓度为0.9M的NaOH溶液，再次搅拌，均匀混合后将混合液放置于超声波清洗器中超声55-65min，然后放入260-300W的微波炉中，微波辐射时间35-45s，得到BSA-AuNCs金纳米簇溶液；(2)在步骤1的产品中加入20μL5mmol/L的巯基苯硼酸溶液，置于50mL圆底烧瓶内，加入磁子，放置在磁力搅拌器上磁力搅拌4-5h；(3)取步骤2所制得的产品10mL置于透析袋内，夹紧两端的夹子，放置于烧杯内，烧杯内加入纯水，浸没过透析袋，再放于磁力搅拌器上透析20-24h，即可得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇。所述三聚氰胺浓度检测体系的构建方法为，配制不同浓度三聚氰胺标准溶液，加入到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇溶液中，静置25-35min，测定其荧光强度，并绘制荧光强度F0-F与三聚氰胺浓度的标准曲线，其中F0代表不加三聚氰胺时金纳米簇在635nm处的荧光强度，F代表加入三聚氰胺时金纳米簇在635nm处的荧光强度。所述对待测对象中的三聚氰胺浓度的检测方法为，将不同种类的奶制品进行预处理，然后加入到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇溶液中，静置25-35min，测定荧光强度，比对标准曲线，即得到样品中三聚氰胺的含量。所述待测对象的预处理方法包括以下步骤：（1）奶粉样品取样5g，液态奶制品20g，准确加入50mL10g/L的三氯乙酸溶液中，再准确加入5mL乙酸铅溶液分离蛋白质，摇匀试液，超声震荡25-35min，静置5-6min，取上层提取液28-32mL转移至离心管，在10000r/min离心机上离心5-6min；（2）分别用3mL甲醇、3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱，准确移取10mL离心液分次上柱，过柱速度0.4-0.6mL/min，再用3mL水和3mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱，抽近干后用3mL5%氨水的甲醇溶液洗脱，洗脱液45度氮气吹干，残渣中加入10mL去离子水，震荡1-2min，过0.45μm滤膜获得待测对象样品。本专利技术的优点是：本专利技术以牛血清白蛋白BSA作为还原剂、稳定剂，还原HAuCl4，在碱性水溶液中合成了具有红色荧光的金纳米簇BSA-AuNCs，其中超声的作用可以推动微粒做往复振动，增强了产物的分散性，有效地阻止纳米粒子出现团聚现象，同时辅以微波辐射，由最先热的内部向外部传热，比起传统加热，它更迅速和均匀，加热的效率也更高，缩短了制备的时间，降低了能耗，由于苯硼酸和三聚氰胺之间形成了多重氢键，促使金纳米簇距离减小，引起不同程度的荧光猝灭，令荧光强度产生差别，再以前处理去除牛奶制品中各种蛋白质等杂质的色泽影响后，加入到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇溶液中，测定荧光强度进行比对，准确率高，处理简单，整个流程操作简便，响应快速，能够满足当前人们对牛奶制品中三聚氰胺残留快速筛查的检测需要。附图说明图1所示为巯基苯硼酸修饰的金纳米簇检测三聚氰胺原理示意图。图2所示为金纳米簇溶液中含有不同浓度的三聚氰胺后的荧光光谱。图3所示为三聚氰胺浓度与荧光强度差值F0-F的关系。具体实施方式以下结合具体的实例对本专利技术的技术方案做进一步说明：将10mL浓度为1mM的HAuCl4溶液和10mL浓度为50mg/mL的BSA溶液均匀混合，再加入2mL浓度为0.9M的NaOH溶液，再次搅拌，均匀混合后将混合液放置于超声波清洗器中超声60min，然后放入280W微波炉中，微波辐射时间40s，可得到BSA-AuNCs金纳米簇溶液，溶液颜色呈亮棕色，置于暗箱式紫外分析仪中溶液发出红色荧光。在上述的产品中加入20μL5mmol/L巯基苯硼酸溶液，置于50mL圆底烧瓶内，加入磁子，放置在磁力搅拌器上磁力搅拌4h。取巯基苯硼酸修饰的金纳米簇10mL置于透析袋内，置于盛有2000mL纯水的烧杯内，透析24h，即可得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇。将不同浓度三聚氰胺标准溶液（0，0.05，0.1，0.2，0.4，0.6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三聚氰胺检测方法，其特征在于，以牛血清白蛋白BSA作为还原剂、稳定剂，还原HAuCl4制备得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇，并通过构建含有已知三聚氰胺浓度的检测体系，采用荧光光谱仪测定其在635nm处的荧光发射强度并制作标准曲线，然后将经过前处理的待测对象加入巯基苯硼酸修饰纳米金簇溶液中，测定其在635nm处的荧光强度，通过对照标准曲线得到待测对象中的三聚氰胺的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种三聚氰胺检测方法，其特征在于，以牛血清白蛋白BSA作为还原剂、稳定剂，还原HAuCl4制备得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇，并通过构建含有已知三聚氰胺浓度的检测体系，采用荧光光谱仪测定其在635nm处的荧光发射强度并制作标准曲线，然后将经过前处理的待测对象加入巯基苯硼酸修饰纳米金簇溶液中，测定其在635nm处的荧光强度，通过对照标准曲线得到待测对象中的三聚氰胺的浓度。2.根据权利要求1所述的三聚氰胺检测方法，其特征在于，所述巯基苯硼酸修饰的金纳米簇的制备方法包括以下步骤：(1)将10mL浓度为1mM的HAuCl4溶液和10mL浓度为50mg/mL的BSA溶液均匀混合，再加入2mL浓度为0.9M的NaOH溶液，再次搅拌，均匀混合后将混合液放置于超声波清洗器中超声55-65min，然后放入260-300W的微波炉中，微波辐射时间35-45s，得到BSA-AuNCs金纳米簇溶液；(2)在步骤1的产品中加入20μL5mmol/L的巯基苯硼酸溶液，置于50mL圆底烧瓶内，加入磁子，放置在磁力搅拌器上磁力搅拌4-5h；(3)取步骤2所制得的产品10mL置于透析袋内，夹紧两端的夹子，放置于烧杯内，烧杯内加入纯水，浸没过透析袋，再放于磁力搅拌器上透析20-24h，即可得到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇。3.根据权利要求1所述的三聚氰胺检测方法，其特征在于，所述三聚氰胺浓度检测体系的构建方法为，配制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张现峰，芦静波，
申请(专利权)人：蚌埠学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34