重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒及其构建和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒的构建方法，首先构建pDC316‑IL‑7‑Linker载体，然后将IL‑15片段通过基因克隆的方法连到pDC316‑IL‑7‑Linker上，构建pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15；最后将pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15和骨架载体pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞进行包装，得到表达融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15的腺病毒。重组IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒作为佐剂应用在结核亚单位疫苗中，调控疫苗免疫后记忆性T细胞的分化，增强了疫苗诱导的中央记忆性T细胞介导的免疫应答，提高了结核亚单位疫苗的免疫保护作用。

【技术实现步骤摘要】
重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒及其构建和应用
本专利技术具体涉及一种重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建；本专利技术同时还涉及该融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15作为细胞免疫佐剂在结核亚单位疫苗中的应用策略，属于疫苗制造

技术介绍
结核病（tuberculosis）是一种主要由结核分枝杆菌感染（Mycobacteriatuberculosis）引起的慢性传染性疾病。其病死率在传染性疾病中已经居于第一位，是全世界的第九大死因。预防和控制传染病的最佳方式就是有效疫苗的接种，结核病难于控制的主要原因是缺乏有效的结核病疫苗。目前唯一临床批准的预防结核病的疫苗是牛分枝杆菌减毒活疫苗卡介苗（BacilleCalmette-Guérin，BCG）。它可以有效控制儿童严重结核病的发生，但是对成人肺结核的保护效果不确定，保护性免疫应答随着年龄的增加逐渐减弱。研究报道，主要是因为BCG的持续刺激，诱导更多的寿命较短的效应记忆性T细胞和效应T细胞产生，而提供长效免疫保护效果的中央记忆性T细胞较少所致。蛋白亚单位疫苗是一种新型的结核疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒，其特征在于：重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15的基因序列如下：

【技术特征摘要】
1.重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒，其特征在于：重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15的基因序列如下：。2.如权利要求1所述一种重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建方法，首先构建了pDC316-IL-7-Linker载体；然后PCR扩增IL-15基因片段，将IL-15基因片段通过限制性内切酶酶切和连接酶连接的方法连接到pDC316-IL-7-Linker中，构建成pDC316-IL-7-Linker-IL-15；最后将pDC316-IL-7-Linker-IL-15和骨架载体pBHGlox△E1、3Cre转染HEK293细胞并进行包装，通过验证并将包装成功，得到重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15的腺病毒；其中Linker为(GGGS)3。3.如权利要求2所述一种重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建方法，其特征在于：pDC316-IL-7-Linker的载体构建，是以pUC57-IL-7-Linker质粒为载体，采用上游、下游两条引物，PCR扩增出IL-7-Linker基因产物；该PCR产物经纯化后，用BglII和HindIII进行双酶切，克隆构建在质粒pDC316上，构建成pDC316-IL-7-Linker载体。4.如权利要求3所述一种重组融合细胞因子IL-7-Linker-IL-15腺病毒的构建方法，其特征在于：所述上游引物为：5’-3’GAAGATCTATGTTCCATG...

【专利技术属性】
技术研发人员：祝秉东，白春香，何娟娟，吕薇，唐君霞，周利军，韩江媛，牛红霞，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62