一种丹参的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种丹参的检测方法。本发明专利技术检测方法包括：薄层层析检测、丹参酮类物质含量检测、丹酚酸B含量检测，以及指纹图谱检测。本发明专利技术检测方法中，通过对薄层层析展开剂以及色谱条件的优化，使得各杂质峰分离效果更好，检测结果更准确；同时，本发明专利技术检测方法耐受性、重现性和专属性更好。

【技术实现步骤摘要】
一种丹参的检测方法
本专利技术涉及中药质量检测领域，具体而言，涉及一种丹参的检测方法。
技术介绍
丹参，为唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根和根茎，在我国大部分地区都有所分布。其具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的功效，在临床上多用于心血管疾病的治疗，例如复方丹参片、复方丹参滴丸、丹七片、冠心丹参片等，都是临床常用药剂。对于丹参的质量标准检测，在药典等标准方法中，也都提供了多种相应的方法。然而，现有的标准检测方法中，虽然能够满足标准要求，但偏差较大，检测结果准确度和精度仍有待提高。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种丹参的检测方法，具有良好的耐受性、重现性和专属性，检测结果准确。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种丹参的检测方法，包括：(a)取丹参对照药材制得对照药材溶液；取丹参酮IIA和丹酚酸B分别得到相应的对照品溶液；以乙酸乙酯-丁酮-冰醋酸为展开剂，采用薄层层析法对丹参供试品溶液进行检测；(b)采用高效液相色谱法，对丹参中的丹参酮类物质含量进行检测；其中，所述高效液相色谱法中，采用如下条件进行梯度洗脱：其中，流动相A为乙腈；流动相B为pH3.2～3.6的缓冲溶液与乙腈的混合液，缓冲溶液与乙腈的比例为93～95:5～7；(c)采用高效液相色谱的方法，对丹参中的丹酚酸B进行含量检测，采用如下条件进行梯度洗脱：其中，流动相A为乙腈，流动相B为pH3.0～4.0的缓冲溶液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术检测方法中，通过对色谱条件的优化，使得各杂质峰分离效果更好，检测结果更准确；同时，本专利技术检测方法耐受性、重现性和专属性更好。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例1薄层层析对照检测结果图；图2为本专利技术实施例2线性标准曲线；图3为本专利技术实施例3线性标准曲线；图4为本专利技术实施例4中精密度相似度评价系统匹配图；图5为本专利技术实施例4中重复性相似度评价系统匹配图；图6为本专利技术实施例4中稳定性相似度评价系统匹配图；图7为本专利技术实施例4中15批丹参药材相似度评价系统匹配图；图8为本专利技术实施例4中丹参药材对照指纹图谱。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本专利技术所提供的丹参检测方法，是在药典等标准检测方法的基础上所进行的优化，通过对于薄层层析分离中所用展开剂，高效液相色谱中所用洗脱剂以及洗脱方法的调整和优化，改善了杂质分离效果，提高了检测结果的准确度。本专利技术检测方法中，主要是通过薄层层析以及高效液相色谱的方法，对丹参中相关物质进行检测。具体的：(1)薄层层析检测薄层层析能够在薄层板上同时分析多个样品，其色谱彩色图像特征性强，易于平行观察、辨识和比较，是中药鉴别常用方法之一。现有标准方法中，主要是采用以丹参乙醇提取物离心上清液为供试品溶液，然后以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6：4：8：1：4)为展开剂，展至约4cm，取出，晾干，再以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，展至约8cm，取出，晾干，分别在日光及紫外光灯(365nm)下检视的方法进行检测。此方法操作较为繁琐，需要依次在不同展开剂中进行多次展开，且需要进行长时间的监测。本专利技术中，则是将待检测原料丹参进行粉碎后，过三号筛得到丹参粉末；然后，将丹参粉末加入乙醚中超声处理6～10min，滤过，除去滤渣，所得滤液蒸干后，以乙醇进行溶解，作为丹参供试品溶液；同时，将丹参对照药材制按照丹参供试品溶液相同的方法制得丹参对照药材溶液；丹参酮IIA和丹酚酸B分别加乙醇制成相应的对照品溶液。然后，将丹参供试品溶液，丹参对照药材溶液，丹参酮IIA对照溶液，以及丹酚酸B对照溶液分别在相同环境条件下，以体积比为8:1:2的乙酸乙酯，丁酮，以及冰醋酸的混合溶液进行展开；展开约8cm，取出，晾干，分别在日光以及紫外灯(365nm)下进行对比检视。由如上所介绍的本专利技术薄层层析方法可知，本专利技术检测方法无需在不同溶液中进行多次展开，而且所用溶剂也不含苯、甲苯等对于人体具有较大伤害的有机溶剂，安全性好。(2)高效液相色谱法对丹参样品中丹参酮类物质含量的检测对照品溶液制备方法参考如下：丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；供试品溶液制备方法参考如下：待检测丹参粉末(过三号筛)约0.3g，置于塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率140W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温20℃；检测波长为270nm；理论板数按丹参酮IIA峰计算应不低于60000；以乙腈为流动相A；以体积比为(93～95):(5～7)的pH3.2～3.6的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液与乙腈的混合液为流动相B，按照如下条件进行梯度洗脱：0～5min，流动相A10→20％，流动相B90→80％(体积比，二者之和为100％，下同)；5～22min，流动相A20→60％，流动相B80→40％；22～22.5min，流动相A60→10％，流动相B40→90％；22.5～25min，流动相A10％，流动相B90％。相较于药典等现有技术中所公开的洗脱方法而言，本专利技术检测方法中，通过对于洗脱剂和洗脱方法的调整，能够进一步改善杂质分离效果，提高检测的精度与准确性。(3)高效液相色谱法对丹参样品中丹酚酸B含量的检测对照品溶液制备方法如下：丹酚酸B对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇-水(8:2)混合溶液制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。供试品溶液的制备方法参考如下：待检测丹参粉末(过三号筛)置于塞锥形瓶中，取待测丹参样品粉末(过三号筛)约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(8:2)混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率140W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇-水(8:2)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，移至10ml量瓶中，加甲醇-水(8:2)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为20℃；流速为每分钟1.2ml，检测波长为286nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000；以乙腈为流动相A，pH3.0～4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸钠缓冲溶液为流动相B，按照如下条件进行洗脱：0～15min，流动相A10→15％，流动相B90→85％(体积比，二者之和为100％，下同)；15～30min，流动相A15→35％，流动相B85→65％；30～40min，流动相A35→10％，流动相B65→90％；40～45min，流动相A10％，流动相B90％。不同于药典等现有技术中所公开的等度洗脱方法，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丹参的检测方法，其特征在于，包括：(a)取丹参对照药材制得对照药材溶液；取丹参酮IIA和丹酚酸B分别得到相应的对照品溶液；以乙酸乙酯‑丁酮‑冰醋酸为展开剂，采用薄层层析法对丹参供试品溶液进行检测；(b)采用高效液相色谱法，对丹参中的丹参酮类物质含量进行检测；其中，所述高效液相色谱法中，采用如下条件进行梯度洗脱：

【技术特征摘要】
1.一种丹参的检测方法，其特征在于，包括：(a)取丹参对照药材制得对照药材溶液；取丹参酮IIA和丹酚酸B分别得到相应的对照品溶液；以乙酸乙酯-丁酮-冰醋酸为展开剂，采用薄层层析法对丹参供试品溶液进行检测；(b)采用高效液相色谱法，对丹参中的丹参酮类物质含量进行检测；其中，所述高效液相色谱法中，采用如下条件进行梯度洗脱：其中，流动相A为乙腈；流动相B为pH3.2～3.6的缓冲溶液与乙腈的混合液，缓冲溶液与乙腈的比例为93～95:5～7；(c)采用高效液相色谱的方法，对丹参中的丹酚酸B进行含量检测，采用如下条件进行梯度洗脱：其中，流动相A为乙腈，流动相B为pH3.0～4.0的缓冲溶液。2.根据权利要求1所述的丹参的检测方法，其特征在于，步骤(a)中，展开剂中乙酸乙酯，丁酮，以及冰醋酸的体积比为(7～10)：(1～3)：(1～3)。3.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁华军，甯欢欢，屠国丽，徐文静，喻懋国，杨先富，宋丹，
申请(专利权)人：贵州景诚制药有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52