用以防治昆虫害虫的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用以防治昆虫害虫的组合物和方法。本发明专利技术提供了采用沉默元件的方法和组合物，所述沉默元件在被害虫诸如鞘翅目植物害虫或叶甲属(Diabrotica)植物害虫摄取时能降低靶序列在所述害虫中的表达。本发明专利技术提供如下任何一者示出的各种靶多核苷酸：本文所公开的SEQ ID NO：(但不包括正向和反向引物)或它们的活性变体和片段、或它们的互补序列，其中所述序列中的一者或多者在所述靶害虫中的表达的降低能防治所述害虫(即，具有杀昆虫活性)。本发明专利技术还提供了包含本发明专利技术的所述沉默元件或它们的活性变体或片段的植物、植物部分、细菌和其他宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
用以防治昆虫害虫的组合物和方法本申请是申请日为2014年3月14日的中国专利申请201480027159.0“用以防治昆虫害虫的组合物和方法”的分案申请。相关专利申请的交叉引用本申请要求提交于2013年3月14日的美国临时申请No.61/785,680和提交于2013年3月14日的美国实用申请No.13/831,230的权益，所述两份专利申请全文以引用方式并入本文。
本专利技术整体涉及用以防治害虫的分子生物学和基因沉默的方法。对通过EFS-WEB作为文本文件提交的序列表的引用据此依照37C.F.R.§1.52(e)(5)将提交于2014年3月14日的序列表作为创建于2014年3月14日的697，429字节大小的名称为“36446_0007P1_ST25.txt”的文本文件以引用方式并入。
技术介绍
昆虫害虫是农业中的严重问题。它们破坏数百万英亩的主要作物，诸如玉米、大豆、豌豆和棉花。单在美国，这些害虫每年造成的作物损害就超过1000亿美元。在与这些害虫进行的季节性斗争中，农场主们必须施用数十亿加仑的合成杀虫剂来抗击这些害虫。过去采用的其他方法通过微生物或在转基因植物中表达来源于微生物的基因来提供杀昆虫活性。例如，已知芽孢杆菌(Bacillus)属微生物的某些物种对于广泛范围的昆虫害虫具有杀虫活性，这些昆虫害虫包括鳞翅目(Lepidoptera)、双翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、半翅目(Hemiptera)等等。事实上，微生物杀虫剂特别是那些从芽孢杆菌菌株获得的微生物杀虫剂，在农业上作为害虫化学防治的替代方案已起到重要的作用。农业科学家通过对作物进行遗传工程改造以产生来自芽孢杆菌的杀昆虫蛋白，开发出了抗昆虫性增强的作物。例如，经遗传工程改造而产生Cry毒素的玉米和棉花植物(参见例如Aronson(2002)CellMol.LifeSci.59(3)：417-425(Aronson，2002年，《细胞与分子生命科学》，第59卷，第3期，第417-425页)；Schnepfetal.(1998)Microbiol.Mol.Biol.Rev.62(3)：775-806(Schnepf等人，1998年，《微生物学与分子生物学综述》，第62卷，第3期，第775-806页))目前在美国农业中广泛应用，给农场主提供了传统昆虫防治方法的替代方案。然而，这些Bt杀昆虫蛋白仅保护植物免受相对较窄范围的害虫的影响。此外，这些杀昆虫活性模式提供了不同的特异性水平，并且在一些情况下，造成了重大环境影响。因此，迫切需要替代方法用以防治害虫。
技术实现思路
提供了采用沉默元件的方法和组合物，所述沉默元件在被害虫诸如鞘翅目植物害虫(包括叶甲属(Diabrotica)植物害虫)摄取时能够降低靶序列在害虫中的表达。在特定实施例中，靶序列表达的降低能防治害虫，从而所述方法和组合物能够限制对植物的损害。本专利技术提供如下示出的各种靶多核苷酸：SEQIDNO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112、113、116、117、120、121、124、125、128、129、132、133、136、137、140、141、144、145、148、149、152、153、156、157、160、161、164、165、168、169、172、173、176、177、180、181、184、185、188、189、192、193、196、197、200、201、204、205、208、209、212、213、216、217、220、221、224、225、228、229、232、233、236、237、240、241、244、245、248、249、252、253、256、257、260、261、264、265、268、269、272、273、276、277、280、281、284、285、288、289、292、293、296、297、300、301、304、305、308、309、312、313、316、317、320、321、324、325、328、329、332、333、336、337、340、341、344、345、348、349、352、353、356、357、360、361、364、365、368、369、372、373、376、377、380、381、384、385、388、389、392、393、396、397、400、401、404、405、408、409、412、413、416、417、420、421、424、425、428、429、432、433、436、437、440、441、444、445、448、449、452、453、456、457、460、461、464、465、468、469、472、473、476、477、480、481、484、485、488、489、492、493、496、497、500、501、504、505、508、509、512、513、516、517、520、521、524、525、528、529、532、533、536、537、540、541、544、545、548、549、552、553、556、557、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、700、701、702、703、706、707、708、709、712、713、714、715、718、719、720、721、724、725、726、727、728、或它们的活性变体或片段、或它们的互补序列，其中所述序列中的一者或多者在靶害虫中的表达的降低能防治害虫(即，具有杀昆虫活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达盒，所述表达盒包含多核苷酸，所述多核苷酸包含：(a)包含如下任何一者的核苷酸序列：SEQ ID NO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112、113、116、117、120、121、124、125、128、129、132、133、136、137、140、141、144、145、148、149、152、153、156、157、160、161、164、165、168、169、172、173、176、177、180、181、184、185、188、189、192、193、196、197、200、201、204、205、208、209、212、213、216、217、220、221、224、225、228、229、232、233、236、237、240、241、244、245、248、249、252、253、256、257、260、261、264、265、268、269、272、273、276、277、280、281、284、285、288、289、292、293、296、297、300、301、304、305、308、309、312、313、316、317、320、321、324、325、328、329、332、333、336、337、340、341、344、345、348、349、352、353、356、357、360、361、364、365、368、369、372、373、376、377、380、381、384、385、388、389、392、393、396、397、400、401、404、405、408、409、412、413、416、417、420、421、424、425、428、429、432、433、436、437、440、441、444、445、448、449、452、453、456、457、460、461、464、465、468、469、472、473、476、477、480、481、484、485、488、489、492、493、496、497、500、501、504、505、508、509、512、513、516、517、520、521、524、525、528、529、532、533、536、537、540、541、544、545、548、549、552、553、556、557、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、700、701、702、703、706、707、708、709、712、713、714、715、718、719、720、721、724、725、726、727、728、或它们的活性变体和片段、以及它们的互补序列；(b)与如下任何一个核苷酸具有至少90％序列同一性的核苷酸序列：SEQ ID NO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112...

【技术特征摘要】
2013.03.14 US 61/785680;2013.03.14 US 13/8312301.一种表达盒，所述表达盒包含多核苷酸，所述多核苷酸包含：(a)包含如下任何一者的核苷酸序列：SEQIDNO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112、113、116、117、120、121、124、125、128、129、132、133、136、137、140、141、144、145、148、149、152、153、156、157、160、161、164、165、168、169、172、173、176、177、180、181、184、185、188、189、192、193、196、197、200、201、204、205、208、209、212、213、216、217、220、221、224、225、228、229、232、233、236、237、240、241、244、245、248、249、252、253、256、257、260、261、264、265、268、269、272、273、276、277、280、281、284、285、288、289、292、293、296、297、300、301、304、305、308、309、312、313、316、317、320、321、324、325、328、329、332、333、336、337、340、341、344、345、348、349、352、353、356、357、360、361、364、365、368、369、372、373、376、377、380、381、384、385、388、389、392、393、396、397、400、401、404、405、408、409、412、413、416、417、420、421、424、425、428、429、432、433、436、437、440、441、444、445、448、449、452、453、456、457、460、461、464、465、468、469、472、473、476、477、480、481、484、485、488、489、492、493、496、497、500、501、504、505、508、509、512、513、516、517、520、521、524、525、528、529、532、533、536、537、540、541、544、545、548、549、552、553、556、557、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、700、701、702、703、706、707、708、709、712、713、714、715、718、719、720、721、724、725、726、727、728、或它们的活性变体和片段、以及它们的互补序列；(b)与如下任何一个核苷酸具有至少90％序列同一性的核苷酸序列：SEQIDNO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112、113、116、117、120、121、124、125、128、129、132、133、136、137、140、141、144、145、148、149、152、153、156、157、160、161、164、165、168、169、172、173、176、177、180、181、184、185、188、189、192、193、196、197、200、201、204、205、208、209、212、213、216、217、220、221、224、225、228、229、232、233、236、237、240、241、244、245、248、249、252、253、256、257、260、261、264、265、268、269、272、273、276、277、280、281、284、285、288、289、292、293、296、297、300、301、304、305、308、309、312、313、316、317、320、321、324、325、328、329、332、333、336、337、340、341、344、345、348、349、352、353、356、357、360、361、364、365、368、369、372、373、376、377、380、381、384、385、388、389、392、393、396、397、400、401、404、405、408、409、412、413、416、417、420、421、424、425、428、429、432、433、436、437、440、441、444、445、448、449、452、453、456、457、460、461、464、465、468、469、472、473、476、477、480、481、484、485、488、489、492、493、496、497、500、501、504、505、508、509、512、513、516、517、520、521、524、525、528、529、532、533、536、537、540、541、544、545、548、549、552、553、556、557、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、700、701、702、703、706、707、708、709、712、713、714、715、718、719、720、721、724、725、726、727、728、或它们的活性变体和片段、以及它们的互补序列；或者(c)包含如下任何一者的至少19个连续核苷酸的核苷酸序列：SEQIDNO：1、4、5、8、9、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、54、55、56、57、60、61、64、65、68、69、72、73、76、77、80、81、84、85、88、89、92、93、96、97、100、101、104、105、108、109、112、113、116、117、120、121、124、125、128、129、132、133、136、137、140、141、144、145、148、149、152、153、156、157、160、161、164、165、168、169、172、173、176、177、180、181、184、185、188、189、192、193、196、197、200、201、204、205、208、209、212、213、216、217、220、221、224、225、228、229、232、233、236、237、240、241、244、245、248、249、252、253、256、257、260、261、264、265、268、269、272、273、276、277、280、281、284、285、288、289、292、293、296、297、300、301、304、305、308、309、312、313、316、317、320、321、324、325、328、329、332、333、336、337、340、341、344、345、348、349、352、353、356、357、360、361、364、365、368、369、372、373、376、377、380、381、384、385、388、389、392、393、396、397、400、401、404、405、408、409、412、413、416、417、420、421、424、425、428、429、432、433、436、437、440、441、444、445、448、449、452、453、456、457、460、461、464、465、468、469、472、473、476、477、480、481、484、485、488、489、492、493、496、497、500、501、504、505、508、509、512、513、516、517、520、521、524、525、528、529、532、533、536、537、540、541、544、545、548、549、552、553、556、557、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、700、701、702、703、706、707、708、709、712、713、714、715、718、719、720、721、724、725、726、727、728、或它们的活性变体和片段、以及它们的互补序列；其中所述多核苷酸编码具有针对鞘翅目植物害虫的杀昆虫活性的沉默元件。2.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述鞘翅目植物害虫为叶甲属(Diabrotica)植物害虫。3.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述多核苷酸有效连接到异源启动子。4.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述多核苷酸被表达为双链RNA。5.根据权利要求1所述的表达盒，其中所述多核苷酸包含沉默元件，所述沉默元件被表达为发夹RNA。6.根据权利要求5所述的表达盒，其中所述沉默元件依次包含第一片段、第二片段和第三片段，其中(a)所述第一片段包含与如下任何一者中示出...

【专利技术属性】
技术研发人员：X·胡，J·普雷斯奈尔，N·里奇特曼，S·迪伊恩，M·范阿伦，L·普罗克，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，纳幕尔杜邦公司，
类型：发明
国别省市：美国,US