壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用，通过实验探究壳寡糖对黄颡鱼生长、免疫功能以及抗菌能力的影响，期待壳寡糖成为一种有效地饲料添加剂。实验结果显示，壳寡糖作为黄颡鱼饲料添加剂，可显著提高黄颡鱼的生长率、免疫力和抗菌能力，由此可见，壳寡糖是一种有效可行的黄颡鱼饲料添加剂。

【技术实现步骤摘要】
壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用
本专利技术涉及黄颡鱼饲养
，具体涉及壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用。
技术介绍
甲壳素存在于低等植物、菌类、甲壳动物的外壳和高等植物细胞壁中，是目前发现自然界唯一带正电的多糖。壳寡糖(Chitosanoligosaccharide,COS)是氨基葡糖糖通过β-1,4-糖苷键连接而成的聚合度为2-20的水溶性低聚糖，不仅保持了壳聚糖大分子所具有的功能性质，而且还具有许多壳聚糖不具备的独特生理特性，已成为国际上新兴的功能性低聚糖。随着水产养殖业飞速的发展，高密度养殖以及富营养化，使得水产养殖品种频繁发病，在防治中大量使用抗生素带来了严重的负面效应，因此，寻求安全有效的饲料添加剂是水产养殖行业健康、持续发展的关键。
技术实现思路
基于上述现有技术，本专利技术提供了壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用，将壳寡糖作为黄颡鱼饲料添加剂，通过实验探究壳寡糖对黄颡鱼生长、免疫功能以及抗菌能力的影响，期待壳寡糖成为一种有效的饲料添加剂。实现本专利技术上述目的所采用的技术方案为：在黄颡鱼饲养过程中，将壳寡糖作为添加剂和基础饲料一起混喂黄颡鱼进行饲喂试验，同时设计基础饲料、以高分子量壳聚糖和水溶性壳聚糖作为添加剂为对照，壳寡糖、高分子量壳聚糖和水溶性壳聚糖的质量分数(添加量)均为1％，检测不同添加时间下壳寡糖对黄颡鱼生长、溶菌酶活性、血清替代补体活性ACH50、吞噬活性、呼吸爆发活动以及免疫保护率的影响，从而评价壳寡糖为饲料添加剂的可行性和优越性。与现有技术相比，本专利技术的有益效果与优点在于：实验结果显示，壳寡糖作为黄颡鱼饲料添加剂，添加时间少于56天时，可显著提高黄颡鱼的生长率、免疫力和抗菌能力，由此可见，壳寡糖是一种有效可行的黄颡鱼饲料添加剂。附图说明图1为1wt％壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼溶菌酶活性的影响。图2为1wt％壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼血清替代补体活性ACH50的影响。图3为1wt％壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼吞噬百分比的影响。图4为1wt％壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼吞噬指数的影响。图5为1wt％壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼呼吸爆发活动的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1一、壳寡糖作为饲料添加剂对黄颡鱼的影响试验1、试验饲料A、基础饲料：35wt％白(鳕)鱼粉、36wt％豆粕、1wt％鱼油、1wt％大豆油、16wt％小麦粉、7wt％α-淀粉和4wt％矿物-维生素混合物(粗蛋白：41wt％，粗脂肪：4wt％，灰分：9wt％，总能量：17.28MJ/Kg)；B、试验饲料：1wt％的壳寡糖(MW<3000)(中国国药化学试剂有限公司购买)+99wt％基础饲料；C、对照饲料一：1wt％的高分子量壳聚糖(HMWC，MW>10000)(中国国药化学试剂有限公司购买)+99wt％基础饲料；D、对照饲料二：1wt％的水溶性壳聚糖(中国国药化学试剂有限公司购买)+99wt％基础饲料。2、试验方法从市场上购买健康的黄颡鱼(中国武汉)，将黄颡鱼放入华中农业大学水产养殖基地暂养7天让其适应新环境，在此期间用基础饲料喂养黄颡鱼，一天投喂两次。取12个养鱼缸，分成4组，每组3个平行，每组的三个鱼缸分别编号为1号、2号和3号，每个鱼缸随机选择20条黄颡鱼称重后放入其中放养，其中一组的黄颡鱼用试验饲料饲喂，作为实验组，另外三组分别用对照饲料一、对照饲料二和基础饲料饲喂，作为对照组，在喂养实验的第14、28、42、56天时，分别从每组的1号鱼缸中抽取5条鱼进行免疫学测定，在喂养实验结束后，将每组的2、3号鱼缸中鱼称重，然后进行攻毒试验，整个实验期间，水温26-28℃，pH7.8-8.0，溶解氧6.5-6.7mgL-1。3、血清、头肾巨噬细胞的取样先用MS-222(150mgL-1)将鱼体麻醉，使用27号针头和1ml注射器从尾椎骨下的静脉血管收集血液并置于非肝素化管中，然后将非肝素管置于冰上，将血液凝固4小时，再以2500rpm离心10分钟后，分离出血清，将血清样品储存在-80℃环境中，备用。收集血液后立即取出头肾，根据文献(SecombesC.J,1990.Isolationofsalmonidmacrophagesandanalysisoftheirkillingactivity.In:StolenJ.S.,FletcherT.C.,AndersonD.P.,RobersonB.S.,MuiswinkelW.B.eds.,TechniquesinFishImmunology.NJ:SOSPublications,pp138-154)分离得到头肾巨噬细胞，将头肾巨噬细胞在L-15培养基中培养至细胞密度为107cells/ml，得到头肾巨噬细胞悬浮液。4、检测项目及方法：4.1、鱼类生长率的测定在实验开始和结束时分别测定各组鱼的体重(平均体重)，特定生长率(SGR)的计算公式为：SGR＝100×(LnWf-LnW0)/t其中Wf为试验结束时鱼的体重(平均体重)，W0为实验开始时鱼的体重(平均体重)，t为实验进行的时间。4.2、免疫测定4.2.1、溶菌酶活性测定：使用溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)比浊法，用微量滴定板测定溶菌酶的活性，具体方法参见文献(1，ParryR.M.,ChandonR.C.,ShahaniK.M.,1965.Arapidandsensitiveassayofmuramidase.ProceedingsoftheSocietyforExperimentalBiologyandMedicine,119,384-387.(2HutchinsonT.H.,ManningM.J.,1996.Seasonaltrendsinserumlysozymeactivityandtotalproteinconcentrationindab(LimandalimandaL)sampledfromLymeBay,UK.Fish&ShellfishImmunology,6,473-482.)4.2.2、血清替代补体活性ACH50的测定：使用兔红细胞血清检测血清替代补体活性ACH50，具体方法参见文献(SunyerJ.O.,TortL.,1995.NaturalhaemolyticandbactericidalactivitiesofseabreamSparusaurataserumareeffectedbythealternativecomplementpathway.Veterinaryimmunologyandimmunopathology,45,333-34)。4.2.3、吞噬活性的测定。将金黄色葡萄球菌接种在普通肉汤琼脂培养基中，28℃下培养24小时，并在无菌生理盐水中收获，将所得的菌液离心洗涤三次后，用0.5wt％甲醛无菌生理盐水在室温下灭菌2小时，然后将其制成终浓度约108cellsmL-1的细菌悬浮液，再将0.2mL细菌悬浮液和0.2mL头肾巨噬细胞悬浮液混合，在28℃下孵育0.5小时，自然风干后用无水乙醇-甲醛混合液固定头肾巨噬细胞，并用苏木精-伊红染色，置于油镜下检查100个巨噬细胞，并计算本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用。2.根据权利要求1所述的壳寡糖在黄颡鱼饲料添加剂中的应用，其特征在于：壳寡糖的质量分数为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小玲，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42