普通核不育突变体的创制方法技术

本申请公开了一种普通核不育突变体的创制方法，包括以下步骤：T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体；T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞。所述T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体中，sgRNA序列设计如下：5’‑ggcaCACAATGGCTCCAGCATTCC‑3’5’‑AAACGGAATGCTGGAGCCATTGTG‑3’。本发明专利技术方法，以水稻细胞核育性基因作为目标基因，利用CRISPR/cas9基因沉默进行基因敲除，基因沉默后丧失功能，细胞发育长成完整植株，但不具备发育成正常功能的花粉，并能够以此为研究对象，用于创制不育系。

【技术实现步骤摘要】
普通核不育突变体的创制方法
本专利技术涉及分子生物植物不育突变体创制
，特别涉及一种普通核不育突变体的创制方法。
技术介绍
雄性不育性是与作物杂种优势利用密切相关的重要性状。水稻是利用杂种优势最为成功的作物之一，也是迄今发现雄性不育多样性最为丰富的作物之一。雄性不育系成为杂种优势利用的最有效武器，其中三系”法是我国推广杂交水稻最早，也是最普遍的一种育种和制种方法，“三系法”主要是利用了核质互作雄性不育系统，完成了“恢复系”、“保持系”和“繁殖系”的三系配套。其中的不育是由细胞质的遗传物质和细胞核的遗传物质共同决定。而光温敏雄性不育系材料为基础的“两系法”，虽然它打破了恢保关系的限制，极大的提高了配组自由度，繁殖和配组程序也极大的简化，但育性的转换收环境温度和光照的影响，制种风险较大，这也是两系杂交育种无法大面积推广的原因。自1966年袁隆平先生报道隐性核不育水稻后，相继发现了许多不育材料。这类不育材料的共同特点是不育性稳定、杂交制种安全，易于配制高产、优质、多抗组合；共同的缺点是无法实现不育系种子的批量繁殖。针对这一问题，科学家们一直在研究利用分子设计方法，解决不育系繁殖的难题本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，包括以下步骤：T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体；T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞。

【技术特征摘要】
1.一种普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，包括以下步骤：T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体；T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞。2.根据权利要求1所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，进一步包括：T3.基因敲除检测。3.根据权利要求2所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，进一步包括：T4.转基因植株表型鉴定。4.根据权利要求1所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，所述T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体中，sgRNA序列设计如下：5’-ggcaCACAATGGCTCCAGCATTCC-3’5’-AAACGGAATGCTGGAGCCATTGTG-3’。5.根据权利要求1所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，所述T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞中，按照唯尚立德试剂盒中的实验步骤，完成载体的构建，并完成农杆菌的转化。6.根据权利要求1所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，所述步骤T2中，水稻转基因过程中用到的培养基包括：诱导培养基：NB；2，4-D1.8-2.0mg/mL；6-BA0.1-0.2mg/mL；琼脂粉10-15g/L；继代培养基：NB；2，4-D1.8-2.0mg/mL；CH0.2-0.3g/L；蔗糖28-30g/L；琼脂粉10-15g/L；共培养培养基：NB；AS100-200umol/L。7.根据权利要求1所述普通核不育突变体的创制方法，其特征在于，所述步骤T2中，水稻转基因的操作步骤包括：1)诱导：水稻种子去壳消毒后，将成熟胚接种于诱导培养基中，诱导胚性愈伤组织；2)侵染：将1)所得愈伤组织与胚乳、芽分离，接种于农杆菌悬浮液中侵染，之后晾干待用；3)共培养：将晾干的愈伤组织转到共培养基中，培养至愈伤组织表面出现菌体；4)筛选：将共培养后的愈伤组织清洗后接种到筛选培养基中进行抗性筛选，获得抗性愈伤组织；5)分化：将获得的抗性愈伤组织接种到分化培养基上培养至分化出幼苗。8.根据权利要求2所述普通...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳音，米铁柱，张国栋，邹丹丹，李继明，丁锦燕，刘鹏飞，
申请(专利权)人：青岛袁策集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37