一种青牛胆组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种青牛胆组培快繁方法，包括(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根系列步骤。本发明专利技术建立了高效低成本的青牛胆组培快繁体系，使青牛胆规模化种植成为可能。

【技术实现步骤摘要】
一种青牛胆组培快繁方法
本专利技术涉及中药材组培
，尤其涉及一种青牛胆组培快繁方法。
技术介绍
青牛胆(Tinosporasagittata(Oliv.)Gagnep.)为防己科青牛胆属植物，以块根入药，药材名金果榄，有清热解毒，利咽，止痛的功效，主要用于咽喉肿痛，痈疽疗毒，泄泻，痢疾，脘腹疼痛。主要分布于湖北、四川、西藏、贵州、云南、湖南、江西、福建、广西。以青牛胆为植物基源的药材金果榄属于冷背药材，但近年来，随着用途的研究开发与应用，金果榄药材需求突飞猛增，而有限的野生资源不能满足市场需求，其价格亦随之迅猛上涨，各企事业单位纷纷开展青牛胆的种植技术研究，但由于青牛胆种子量少、种子发芽率低、发芽周期长，使得传统的种子繁殖繁殖率低，不能满足规模化种植需求，部分企事业单位在扦插、压条繁殖上虽然取得突破，但均存在繁殖率极低、生长缓慢的困境。近年来有单位开始金果榄的组培技术研究并获得成功，但在青牛胆的组培快繁技术研究方面，未见报道。
技术实现思路
本专利技术针对以上所述现有技术的不足，专利技术了一种成本低、操作简便、生产周期短的青牛胆组培快繁技术，可为规模化种植短期内快速提供优质种苗的繁育方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根；优选地，所述的外植体选择包含以下步骤：选择健壮植株栽植于室内，每隔7天用75％多菌灵500倍液喷施3-5次，选取幼嫩茎段；更加优选地，所述的幼嫩茎段为端部20～30cm的茎段；优选地，所述的外植体消毒包含以下步骤：将选取的外植体用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，在超净工作台上依次用酒精、漂白粉溶液及升汞溶液消毒；更加优选地，所述的外植体消毒包含以下步骤：使用75％酒精消毒30～40s，饱和漂白粉溶液消毒30～40min，0.1％升汞溶液+吐温-80消毒10～15min；优选地，所述的丛生芽诱导包含以下步骤：将消毒好的外植体，剪去两端伤口，切成带单芽茎段，接种在诱导培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的诱导培养基为WPM+IAA0.01～0.1mg/L+KT2.0～3.0mg/L+TDZ0.05～0.2mg/L+性炭0.5g/L，培养温度为23～27℃，以光照强度1000～2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；优选地，所述的丛生芽增殖包含以下步骤：将诱导出的丛生芽切成单芽，接种在增殖培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的增殖培养基为MS+NAA0.01～0.1mg/L+KT2.0～3.0mg/L+TIBA1.0～2.0mg/L+硝酸银1.0μg/L+椰汁50～100ml/L，培养温度为23～27℃，以光照强度1000～2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；优选地，所述的丛生芽生根包含以下步骤：将增殖获得的丛生芽分成单芽，接种在生根培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；更加优选地，所述的生根培养基为1/2MS+IBA1.0～2.0mg/L+椰汁50～100ml/L+活性炭0.5g/L，培养温度为23～27℃，以光照强度3000～4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；本专利技术还提供用于青牛胆组培快繁方法的培养基，所述培养基用于丛生芽诱导，所述培养基包含以下成分：WPM+IAA0.01～0.1mg/L+KT2.0～3.0mg/L+TDZ0.05～0.2mg/L+性炭0.5g/L；本专利技术还提供用于青牛胆组培快繁方法的培养基，所述培养基用于丛生芽增殖，所述培养基包含以下成分：MS+NAA0.01～0.1mg/L+KT2.0～3.0mg/L+TIBA1.0～2.0mg/L+硝酸银1.0μg/L+椰汁50～100ml/L；本专利技术还提供用于青牛胆组培快繁方法的培养基，所述培养基用于丛生芽生根，所述培养基包含以下成分：1/2MS+IBA1.0～2.0mg/L+椰汁50～100ml/L+活性炭0.5g/L。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术的青牛胆组培快繁方法，外植体的采集时间为3月至10月，可采集周期长，经采集后可继续生长，到收获季节亦可同其他未采集的植株同时收获且不影响产量及品质。(2)本专利技术的青牛胆组培快繁方法，繁殖速度快、繁殖率高，一株植株一年可采集30～40个带芽茎段，经初代诱导，增殖与生根培养，约7～8个月，即可获得生根苗约20万株。(3)本专利技术的青牛胆组培快繁方法，污染率低、丛生芽诱导率、增殖系数、生根率高，组培效率高，成本低廉，具有极高的产业推广价值。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步的说明，但本专利技术并不局限于此。实施例1(1)将健壮植株栽植于室内，每隔7天用75％多菌灵500倍液喷施3次，选取端部20～30cm的幼嫩茎段，作为外植体；(2)将选取的外植体去叶，剪成2～3cm的带芽茎段，用饱和肥皂水溶液涮洗后，用软牙刷刷去表皮及凹陷处脏物，后用自来水漂洗3～4次至无肥皂液残留，加2～3滴吐温-80及适量水，振摇15min，自来水冲淋60min。转移至超净工作台上，用75％酒精消毒40s，无菌水冲洗2～3次，饱和漂白粉溶液消毒40min，无菌水冲洗2～3次，0.1％升汞溶液+2～3滴吐温-80消毒15min，无菌水冲洗6次；(3)将消毒好的外植体，用无菌纸吸取表面水分，剪去两端伤口至茎段1.0～1.5cm，斜插于WPM+IAA0.1mg/L+KT3.0mg/L+TDZ0.2mg/L+性炭0.5g/L的诱导培养基上，在温度为26℃，以光照强度2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养，培养50天；记录污染率、丛生芽诱导率。(4)将诱导出的丛生芽剪成单芽，斜插于MS+NAA0.1mg/L+KT3.0mg/L+TIBA2.0mg/L+硝酸银1.0μg/L+椰汁100ml/L的增殖培养基内，在温度为26℃，以光照强度2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养，培养33天；记录丛生芽增殖情况。(5)将诱导或增殖的丛生芽切成具2～3个芽的茎段，直立于1/2MS+IBA2.0mg/L+椰汁100ml/L+活性炭0.5g/L的生根培养基中，在温度为26℃，以光照强度4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养，培养35天；记录生根情况。(6)将具2～3条根，高度5～10cm的青牛胆组培苗瓶苗，洗净培养基，栽植于泥炭土与珍珠岩以5:1比例复配的炼苗基质中，保持空气湿度在80％，进行炼苗；记录炼苗情况。实施例2(1)将健壮植株栽植于室内，每隔7天用75％多菌灵500倍液喷施4次，选取端部20～30cm的幼嫩茎段，作为外植体；(2)将选取的外植体去叶，剪成2～3cm的带芽茎段，用饱和肥皂水溶液涮洗后，用软牙刷刷去表皮及凹陷处脏物，后用自来水漂洗3～4次至无肥皂液残留，加2～3滴吐温-80及适量水，振摇10min，自来水冲淋50min。转移至超净工作台上，用75％酒精消毒30s，无菌水冲洗2～3次，饱和漂白粉溶液消毒30min，无菌水冲洗2～3次，0.1％升汞溶液+2～3滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗7次；(3)将消毒好的外植体，用无菌纸吸取表面水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根。

【技术特征摘要】
1.一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体选择、(2)外植体消毒、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)丛生芽生根。2.根据权利要求1所述的一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，(1)外植体选择：选择健壮植株栽植于室内，每隔7天用75％多菌灵500倍液喷施3-5次，选取幼嫩茎段；(2)外植体消毒：将选取的外植体用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，在超净工作台上依次用酒精、漂白粉溶液及升汞溶液消毒；(3)丛生芽诱导：将消毒好的外植体，剪去两端伤口，切成带单芽茎段，接种在诱导培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；(4)丛生芽增殖：将诱导出的丛生芽切成单芽，接种在增殖培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养；(5)丛生芽生根：将增殖获得的丛生芽分成单芽，接种在生根培养基上，在一定温度、光照强度和光周期环境下培养。3.根据权利要求2所述的一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述的幼嫩茎段为端部20～30cm的茎段。4.根据权利要求3所述的一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，步骤(2)所述的外植体的最佳消毒方法为75％酒精消毒30～40s，饱和漂白粉溶液消毒30～40min，0.1％升汞溶液+吐温-80消毒10～15min。5.根据权利要求4所述的一种青牛胆组培快繁方法，其特征在于，步骤(3)所述的诱导培养基为WPM+IAA0.01～0.1mg/L+KT2.0～3.0mg/L+TDZ0.05～0.2mg/L+性炭0.5g/L，培养温度为23～27℃，以光照强度1000～2000...

【专利技术属性】
技术研发人员：张金渝，蒋元省，杨维泽，曾祥飞，杨美权，许宗亮，赵露琴，
申请(专利权)人：云南省农业科学院药用植物研究所，云南澈川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53