【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组培，具体来说是一种结合瓶外生根技术的金线吊乌龟组培快繁方法及应用。
技术介绍
1、金线吊乌龟（ stephania cepharantha hayata）是防己科千金藤属的多年生草质藤本植物。金线吊乌龟以块根入药，可提取生物总碱、千金藤素、罗通定等，同时其叶圆润翠绿，适合阳台、庭院等处盆栽，观赏性佳。
2、近年来，随着药用价值的开发以及观赏性价值的推广，金线吊乌龟需求突飞猛增，而有限的野生资源不能满足市场需求，其价格亦随之迅猛上涨，不少科研机构、企业纷纷开展金线吊乌龟的种植技术研究，但由于金线吊乌龟雌雄异株，且雌株在种群中分布量少，使得种子量较少，同时由于种子发芽率低、发芽周期长。同时也因为雌雄异株，种子繁殖杂交性强，母本遗传性状不稳定，作为药用以及观赏性其变异概率较大。近年来，部分单位开展了广西地不容、小叶地不容等的组培技术研究，就广西地不容以及小叶地不容而言在生根情况方面效果都不甚理想，且在初代诱导以及增殖方面并不能很好适应金线吊乌龟，而在生根方面几乎不能使金线吊乌龟生根。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种结合瓶外生根技术的金线吊乌龟组培快繁方法及应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种结合瓶外生根技术的金线吊乌龟组培快繁方法，步骤包括：
3、（1）无菌材料准备；
4、（2）初代诱导培养：无菌材料接种于ms+naa 0.02～0.
5、（3）继代增殖培养：初代诱导的丛生芽剪成单芽，接种于ms+iba 0.01～0.02mg/l+iaa 0.05～0.10mg/l+cppu 0.3～0.5mg/l的继代增殖培养基中培养30～40天；
6、（4）瓶内预生根培养：继代增殖的丛生芽剪成单芽，接种于1/2改良ms+iba 0.3～0.5mg/l+iaa 0.5～0.6mg/l+多效唑0.2～0.3mg/l+椰乳20～30g/l的预生根培养基中培养30～40天；
7、所述改良ms为其他元素不变，糖用量降为15g/l；
8、（5）瓶外生根：经预生根培养的金线吊乌龟苗从瓶内取出，洗净基部残留培养基，用营养液a浸泡24h，后栽植于腐殖土中，栽植后搭建小拱棚，并每隔10天用营养液b进行一次浇灌，连续浇灌3～4次；
9、所述营养液a的配方为：水杨酸40～50mg/l+vb12 8～10μg/l的水溶液；
10、所述营养液b的配方为：iba 60～80mg/l+水杨酸80～100mg/l+vb12 20～25μg/l。
11、进一步的，步骤（1）中，所述无菌材料准备具体为：选取顶端10～20cm幼嫩带芽茎段，剪成带芽小段后用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，用75％酒精消毒10～25s、无菌水冲洗3～4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20～30min、无菌水冲洗2～3次，最后用0 .05％升汞溶液消毒10～15min、无菌水冲洗6～8次。
12、进一步的，步骤（2）、（3）和（4）中，所述培养条件为：温度为23±2℃，光照强度2000～3000lx，光照10～14h进行光暗交替培养。
13、进一步的，所述初代诱导培养基的配方为：ms+naa 0.03mg/l+cppu 0.15mg/l+kt2.5mg/l。
14、进一步的，所述继代增殖培养基的配方为：ms+iba 0.01mg/l+iaa 0.75mg/l+cppu0.4mg/l。
15、进一步的，所述预生根培养基的配方为：1/2改良ms+iba 0.4mg/l+iaa 0.55mg/l+多效唑0.25mg/l+椰乳25g/l。
16、进一步的，所述营养液a的配方为：水杨酸45mg/l+vb12 9μg/l的水溶液；所述营养液b的配方为：iba 70mg/l+水杨酸90mg/l+vb12 23μg/l。
17、本专利技术的有益技术效果是：
18、1.本专利技术团队在试验中发现：naa以及活性炭对金线吊乌龟的生根有显著的抑制作用，但当采用非naa的生长素为初代诱导的培养基时，要么是诱导出愈伤组织而不出芽或少量出芽，要么是直接不能诱导，因此本专利技术在初代诱导时采用naa，配合一定浓度的cppu和kt，可最大限度的诱导出丛生芽而不是愈伤组织，同时在继代时用iba代替naa，一方面能使丛生芽继续增殖，另一方面可最大程度的减少naa对根生长的抑制作用。
19、2.本专利技术在瓶内预生根培养时，采用一定浓度的iba、iaa以及多效唑进行组合，同时通过对基本培养基进行降糖处理，可在30天内部分组培苗在茎基部形成明显根原基，少部分可形成根，再配合一定浓度的椰乳，可使茎更加粗壮，叶片一定程度的增厚，更加有利于瓶外生根时的成活。
20、3.金线吊乌龟组培苗在瓶内较难生根，通过长期、多次反复试验，瓶内生根率在50%以内，而就组培苗而言，生根率的高低，决定了生产成本以及成苗率。本专利技术在瓶外生根时通过一定浓度iba、水杨酸以及vb12的组合，在腐殖土中能更好的促进叶片的展开，并使金线吊乌龟组培苗的生根率达到95%以上。
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1.一种结合瓶外生根技术的金线吊乌龟组培快繁方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（1）中，所述无菌材料准备具体为：选取顶端10～20cm幼嫩带芽茎段，剪成带芽小段后用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，用75％酒精消毒10～25s、无菌水冲洗3～4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20～30min、无菌水冲洗2～3次，最后用0 .05％升汞溶液消毒10～15min、无菌水冲洗6～8次。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）、（3）和（4）中，所述培养条件为：温度为23±2℃，光照强度2000～3000Lx，光照10～14h进行光暗交替培养。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述初代诱导培养基的配方为：MS+NAA0.03mg/L+CPPU 0.15mg/L+KT 2.5mg/L。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述继代增殖培养基的配方为：MS+IBA0.01mg/L+IAA 0.75mg/L+CPPU 0.4mg/L。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述预生根
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述营养液A的配方为：水杨酸45mg/L+VB12 9μg/L的水溶液；所述营养液B的配方为：IBA 70mg/L+水杨酸90mg/L+VB12 23μg/L。
8.根据权利要求1～7任一项所述方法在金线吊乌龟组培快繁中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种结合瓶外生根技术的金线吊乌龟组培快繁方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（1）中，所述无菌材料准备具体为：选取顶端10～20cm幼嫩带芽茎段，剪成带芽小段后用饱和肥皂水溶液涮洗后冲淋，用75％酒精消毒10～25s、无菌水冲洗3～4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20～30min、无菌水冲洗2～3次，最后用0 .05％升汞溶液消毒10～15min、无菌水冲洗6～8次。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）、（3）和（4）中，所述培养条件为：温度为23±2℃，光照强度2000～3000lx，光照10～14h进行光暗交替培养。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述初代诱导培养基的配方为：ms+naa0.0...
【专利技术属性】
技术研发人员：许宗亮，曾祥飞，起明菊，张金渝，邓清，赵露琴，杨维泽，杨美权，杨天梅，
申请(专利权)人：云南省农业科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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