一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，它包括试剂R1和试剂R2，试剂R1：缓冲液、无机盐、防腐剂、增乳剂、稳定剂，试剂R2：缓冲液、增乳剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、包被有胱抑素C抗体致敏的胶乳颗粒；所述致敏的胶乳颗粒为二次收敛聚合后的聚苯乙烯胶乳微球，减弱了线性范围高值灵敏度；所述增乳剂平衡了二次收敛聚合对低值灵敏度的影响，提高了抗原过剩检测范围，本试剂盒效地改善HOOK效应导致的被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果，且其重复性和稳定性等性能不受影响，操作简单，具有广泛通用性。

A Cystatin C Detection Kit Based on Latex Immunoturbidimetry

The invention discloses a cystatin C detection kit based on latex immunoturbidimetric method, which comprises reagent R1 and reagent R2, reagent R1: buffer solution, inorganic salt, preservative, emulsifier, stabilizer, reagent R2: buffer solution, emulsifier, surfactant, stabilizer, preservative, glue sensitized by cystatin C antibody. Emulsion particles; the sensitized latex particles are polystyrene latex microspheres after secondary convergence polymerization, which weakens the high value sensitivity in linear range; the emulsifier balances the effect of secondary convergence polymerization on low value sensitivity, improves the detection range of antigen excess, and the kit effectively improves the concentration of the tested substance caused by HOOK effect. The results are underestimated or even false negative, and its repeatability and stability are not affected. It is easy to operate and has wide versatility.

【技术实现步骤摘要】
一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒。
技术介绍
胱抑素C（CystatinC，简称CysC）亦称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，是一种由120个氨基酸组成，分子量为13kDa的低分子量、碱性非糖化蛋白质。编码CysC的基因属于管家基因，能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达，无组织特异性。CysC存在于各种体液之中，尤以脑脊液和精浆中含量为高，亦可存在于血液、唾液中，尿液中最低，不受年龄、性别、体重、炎症等因素影响，研究表明CysC自1岁后到60岁前在血液中浓度恒定。因CysC分子量小，生理条件下带正电荷，能自由从肾小球滤过，完全被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解，不重新回到血液中；同时肾小管上皮细胞也不分泌至管腔内，使肾脏成为清除循环中CysC的唯一场所。临床评价肾脏疾病进展和严重程度，一般以肾功能为参考，肾功能一般以肾小球滤过率（GFR）反映。目前常用评价肾小球滤过功能的内源性标志物有血清肌酐（Scr）、尿素氮（Urea）、内生肌酐清除率（Ccr）等。但是这些指标会受到年龄、性别、身高、性别、肌肉量、膳食结构、机体疾病状况、药物及肾小管对肌酐的分泌等因素的影响，不能满足理想内源性标志物的要求。肾脏是清除循环中CysC的唯一场所，肾小管不分泌CysC，因而血清CysC浓度主要由GFR决定，并且不受心别、年龄、炎症反应、肿瘤、肌肉活动、饮食摄入等因素的影响。CysC灵敏度高，与GFR相关性好。许多临床观察证实，当肾功能轻度受损，Scr变化不明显时，血清CysC已增高，无论是轻度、中度、重度肾功能降低，其对应的血清CysC值都显示良好的灵敏度。CysC是迄今基本满足理想内源性GFR标志物要求的内源性物质，是最新发展起来的评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。胶乳免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的免疫比浊方法。基本原理是将待测物质相应抗体以特定方式交联到胶乳颗粒表面，当交联有抗体的胶乳颗粒与抗原结合后，会迅速聚集产生一定的浊度，改变反应液的透光性能。反应液透光性能的改变与抗原浓度具有相关性，可以反映待测物质中的抗原浓度。此方法可应用于全自动生化分析仪，且用时短，适于临床检测。但是目前市售检测试剂盒在临床应用过程中，反应体系中抗体浓度一定时，随着抗原浓度的增加，抗原抗体复合物沉淀量增加，逐渐达到平衡，当抗原浓度过高时，将出现沉淀解聚甚至不沉淀的情况，即HOOK效应或抗原过剩现象，在免疫检测体系中，该现象将导致被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果出现，可能导致误诊或漏诊。本领域技术人员根据大量的试验研究的经验，采用提高试剂灵敏度、抗体用量、稀释法调整抗体与抗原比例等方法，在一定程度上在检测试剂中延迟出现HOOK效应，即扩大抗原过剩检测范围。但是单纯提高试剂灵敏度的同时降低了试剂检测线性范围；调整抗体用量或稀释法调整抗体与抗原比例需要的研发周期长、研发工作量大且成本过高。CN107894509A公布了一种提高胶乳免疫比浊法抗原过剩和线性范围的方法，主要是采用多次错流过滤的方式，以氯化锂为调节剂，十二烷基苯磺酸钠（SDBS）为乳化剂，过硫化钾为引发剂，直接对胶乳颗粒进行了二次收敛聚合改进。但是该方法过程需要循环错流过滤，操作复杂。本专利技术是在对该方法进行改进的基础上，对本专利技术试剂盒进行优化，扩大试剂线性检测和抗原过剩范围，提高对高浓度样本检测的准确性，有效地改善HOOK效应导致的被测物浓度被低估甚至出现假阴性结果。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，该试剂盒组成简单，具有广泛通用性，可有效地改善HOOK效应，提高检测结果的准确性。实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括无机盐0.1-120g/L、缓冲液20-200mmol/L、增乳剂0.8mmol/L-4.2mmol/L、防腐剂0.8-3.2g/L、稳定剂1-200g/L；所述试剂2包括缓冲液20-200mmol/L、增乳剂0.8mmol/L-4.2mmol/L、表面活性剂1-20g/L、稳定剂1-200g/L、包被有胱抑素C抗体致敏的胶乳颗粒0.1-3g/L、防腐剂0.5-5g/L，余量为水，其中水为纯化水。所述试剂R1中无机盐为按混合浓度为0.1-1.5g/L氯化镁和氯化钙或15-120g/L氯化钠，所选用的氯化镁与氯化钙的混合物或氯化钠能够有效抑制二次收敛聚合的胶乳微球发生溶胀，增强了试剂盒高值灵敏度钝化的稳定性。所述缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液、磷酸盐缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种。所述稳定剂为海藻糖、蔗糖、甘氨酸及brij-35中的一种或多种组合而成。所述增乳剂为PEG2000～PEG20000。所述缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液；所述防腐剂为PC300；所述稳定剂为海藻糖。所述增乳剂为PEG6000，所选的PEG6000的主要作用是提高试剂盒的灵敏度，平衡二次收敛聚合导致的低值灵敏度降低。所述表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80及曲拉通100中的一种。所述防腐剂为叠氮钠或PC300中的一种。所述致敏的胶乳颗粒上包被的是动物抗人胱抑素C多克隆或单克隆抗体。所述致敏的胶乳颗粒为二次收敛聚合后的聚苯乙烯胶乳微球，减弱了线性范围高值灵敏度，而低值灵敏度不受影响，提高了抗原过剩检测范围，不影响的重复性和稳定性等性能。所述二次收敛聚合的胶乳微球制备方法包括以下步骤：1）采用高速冷冻离心的方法将胶乳微球溶液置换为蒸馏水，置于反应釜；2）加入复合型乳化剂和调节剂，通入N2置换O2后，加入引发剂，引发二次聚合；3）加入胶乳试剂标记反应需要的缓冲液进行离心。所述冷冻离心是在4℃条件下，以转速为20000r/min进行离心，时间为15分钟。所述复合型乳化剂为按质量比为1：1SDS和NP-40；所述调节剂为十二烷基硫醇；所述引发剂为过硫化钾。完成收敛聚合反应的胶乳微球粒径为未聚合时粒径的0.72倍。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用胶乳微球二次收敛聚合的方法，在不影响与抗体结合性能的前提下，使该试剂盒对高值的灵敏度降低，扩大抗原过剩检测范围，减少了因HOOK效应导致的结果偏低或假阴性的可能性。采用增乳剂平衡了因二次收敛聚合带来的低值灵敏度降低，使该试剂盒的低值灵敏度不受影响。本专利技术试剂盒使用一定浓度的无机盐离子能够有效地防止发生收敛聚合的胶乳微球在溶液中发生溶胀，使其高值灵敏度降低性能保持稳定。本专利技术的试剂盒能够有效地扩大抗原过剩检测范围，操作简单且胶乳微球二次收敛聚合不会影响其精密度、稳定性等性能。具体实施方式下面结合实例对本专利技术作进一步详细说明，但应理解本专利技术保护的范围并非仅限于这些实例的范围。实施例1制备不含有增乳剂的本专利技术试剂盒本专利技术试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中试剂R1：三羟甲基氨基缓冲液100mmol/L氯化镁0.5g/L氯化钙0.5g/LPC3001.2g/L海藻糖5g/L余量为纯化水试剂R2：三羟甲基氨基缓冲液100mmol/L甘氨酸5g/L吐温205g/LPC3001.2g/L牛血清白蛋白5g/L抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括无机盐0.1‑120g/L、缓冲液20‑200 mmol/L、增乳剂0.8mmol/L‑4.2 mmol/L、防腐剂0.8‑3.2g/L、稳定剂1‑200g/L；所述试剂2包括缓冲液20‑200 mmol/L、增乳剂0.8mmol/L‑4.2 mmol/L、表面活性剂1‑20g/L、稳定剂1‑200g/L、包被有胱抑素C抗体致敏的胶乳颗粒0.1‑3g/L、防腐剂0.5‑5g/L，余量为水。

【技术特征摘要】
1.一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括无机盐0.1-120g/L、缓冲液20-200mmol/L、增乳剂0.8mmol/L-4.2mmol/L、防腐剂0.8-3.2g/L、稳定剂1-200g/L；所述试剂2包括缓冲液20-200mmol/L、增乳剂0.8mmol/L-4.2mmol/L、表面活性剂1-20g/L、稳定剂1-200g/L、包被有胱抑素C抗体致敏的胶乳颗粒0.1-3g/L、防腐剂0.5-5g/L，余量为水。2.根据权利要求1所述的一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中无机盐为按混合浓度为0.1-1.5g/L氯化镁和氯化钙或15-120g/L氯化钠。3.根据权利要求1所述的一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液、磷酸盐缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种；所述防腐剂为叠氮钠或PC300中的一种；所述稳定剂为海藻糖、蔗糖、甘氨酸及brij-35中的一种或多种组合而成；所述增乳剂为PEG2000～PEG20000。4.根据权利要求3所述的一种基于胶乳免疫比浊法的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液；所述防腐剂为PC300；...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽，兰玉勇，杨丽丽，
申请(专利权)人：沈阳医陆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21