一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法技术

本发明专利技术涉及亚麻籽油中环肽含量的检测方法，包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、超高效液相色谱法测定。采用本发明专利技术提供的含量测定方法，供试品溶液制备方法简单，减少了误差的风险；测定时，色谱基线平稳，分离度高，检测准确度高；同时本发明专利技术提供的方法缩短了测定时间，提升了检测效率，减少了有毒化学试剂的用量，更加经济环保。

A Method for Detecting Cyclic Peptide Content in Flaxseed Oil

The invention relates to a method for determining the content of cyclic peptide in flaxseed oil, including preparation of sample solution, preparation of reference solution and determination by ultra-high performance liquid chromatography. By adopting the content determination method provided by the invention, the preparation method of the sample solution is simple, and the risk of error is reduced; the chromatographic baseline is stable, the separation degree is high, and the detection accuracy is high; at the same time, the method provided by the invention shortens the determination time, improves the detection efficiency, reduces the dosage of toxic chemical reagents, and even more. Plus economic and environmental protection.

【技术实现步骤摘要】
一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法
本专利技术涉及功能食品领域，具体涉及一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法。
技术介绍
亚麻(LinumusitatissimumL.)又称胡麻，是一种古老的油料作物，在我国有着广泛的分布和悠久的种植历史。亚麻籽是亚麻的种子，富含亚麻籽油、亚麻胶、亚麻蛋白、木酚素、环肽、膳食纤维等营养和功能性成分。其中的亚麻籽油是一种天然的保健植物油，含有丰富的亚麻胶、木酚素、膳食纤维、等功能性成分和ω-3系必需脂肪酸α-亚麻酸，具有调节血脂、降低胆固醇、抗炎、抗癌、增强大脑和视神经机能及预防皮肤病等功能。近年来，亚麻籽油中含有的具有免疫功能的疏水性环形植物肽—亚麻籽环肽受到了广泛的关注。亚麻籽环肽由8～9个氨基酸组成，分子量大约在1～10kDa，目前已经分离鉴定出有25种以上的环肽，其中环肽A、C、D、E的氨基酸序列及分子式已经被研究者确定，利嘉祥等利用高效液相色谱法测量亚麻籽油中这四种环肽的含量(2016)，分离度和重复性均符合要求；但是该方法存在这以下不足：首先，该方法前处理过程较为繁琐，需要乙醇萃取富集，在操作时发生偶然误差的风险较大；其次，该方法采用乙腈作为流动相的组分之一，且占比在50％以上，对环境和实验人员的身体健康会有一定的影响。随着对亚麻籽环肽研究的不断深入，为了更好的的检测亚麻籽油中环肽的含量，建立一种操作简便、稳定的样品前处理方法和专属性强、分离度高、高效环保的环肽含量检测方法已经势在必行。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的缺陷，提供一种亚麻籽油中环肽的含量测定方法，其样品前处理简便、稳定，所得供试品中其他成分对环肽的测定没有影响；测定是基线平稳、分离度好、准确度高；与现有技术相比，各个环肽峰的保留时间较短，缩短了含量测定的时间，提升了检测的效率，并且减少了有毒试剂-乙腈的用量，更加高效环保。具体的，本专利技术提供了一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法，该方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、超高效液相色谱法(UPLC)测定环肽含量。所述超高效液相色谱法的色谱条件为：WatersACQUITYUPLCI-Class超高效液相色谱系统及其工作站；色谱柱为ACQUITYUPLCPeptideCSHC18Column(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相为乙腈(A)与0.05％(体积分数)的磷酸水溶液(B)；梯度洗脱；检测波长200～400nm；进样量10μL；柱温35℃；流速1.0mL/min。优选地，所述梯度洗脱的条件为：0～8min，30％A；8～20min，30％A→50％A；20～30min，65％A；优选地，所述检测波长为214nm。所述对照品溶液制备的方法为：取亚麻籽环肽A、C、D、E对照品，精密称定后，用乙腈溶解并定容至10mL容量瓶中，得到各环肽浓度为1mg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。所述供试品溶液的制备包括以下步骤：(1)亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，加入丙酮，超声提取；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；(2)供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释10～40倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。优选地，所述超声提取的工艺条件为：料液比1:6～1:12，超声温度40～60℃，提取时间30～60min，超声功率180～240W，搅拌速度400～600r/min。本专利技术的有益效果：本专利技术采用UPLC法测定亚麻籽油中的环肽含量，所采用的色谱方法实现了各环肽色谱过程中保留时间缩短，提高了含量测定的效率，减少了流动相中乙腈的使用量，更加环保，也降低了检测成本。同时本专利技术采用的样品前处理方法简单、可操作性强，所得供试品溶液性质稳定，分离度高。本专利技术所述的方法，色谱基线平稳，分离度好，检测准确度高。具体实施方式我们将结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，但应注意的是，以下的实施例并不限制本专利技术的保护范围和应用范围。以下实施例中，除非特殊说明，本专利技术所采用的试剂、仪器、方法均为本
常规的试剂、仪器、方法。以下实施例中，涉及的仪器包括WatersACQUITYUPLCI-Class超高效液相色谱系统及其工作站；色谱柱ACQUITYUPLCPeptideCSHC18Column(规格为2.1mm×100mm，1.7μm)；以下实施例中，涉及的试剂规格为乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水，并且上述试剂均可在常规的商业渠道获得。环肽A、C、D、E对照品来自PrairieTideChemicalsInc.纯度98％以上。实施例1供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：10加入丙酮，开启搅拌，速度设定为500r/min，在50℃下以220W的功率超声提取45min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释20倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。实施例2供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：6加入丙酮，开启搅拌，速度设定为400r/min，在40℃下以180W的功率超声提取30min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释10倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。实施例3供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：12加入丙酮，开启搅拌，速度设定为600r/min，在40℃下以240W的功率超声提取60min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释40倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。实施例4供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：10加入丙酮，开启搅拌，速度设定为600r/min，在60℃下以240W的功率超声提取35min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释30倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。实施例5供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：9加入丙酮，开启搅拌，速度设定为500r/min，在50℃下以200W的功率超声提取45min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品溶液的制备：取亚麻籽油，用乙腈稀释15倍，经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。实施例6供试品溶液的制备1.亚麻籽油的提取：亚麻籽经挑选、除杂，粉碎机粉碎后过20目筛；称取一定量的亚麻籽粉于圆底烧瓶中，按料液比1：10加入丙酮，开启搅拌，速度设定为400r/min，在50℃下以220W的功率超声提取10min；提取液经滤过，减压浓缩，真空干燥后得到亚麻籽油；2.供试品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法，包括供试品供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、超高效液相色谱法(UPLC)测定环肽含量；所述超高效液相色谱法的色谱条件为：Waters ACQUITY UPLC I‑Class超高效液相色谱系统及其工作站；色谱柱为ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 Column(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相为乙腈(A)与0.05％(体积分数)的磷酸水溶液(B)；梯度洗脱；检测波长200～400nm；进样量10μL；柱温35℃；流速1.0mL/min。

【技术特征摘要】
1.一种检测亚麻籽油中环肽含量的方法，包括供试品供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、超高效液相色谱法(UPLC)测定环肽含量；所述超高效液相色谱法的色谱条件为：WatersACQUITYUPLCI-Class超高效液相色谱系统及其工作站；色谱柱为ACQUITYUPLCPeptideCSHC18Column(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相为乙腈(A)与0.05％(体积分数)的磷酸水溶液(B)；梯度洗脱；检测波长200～400nm；进样量10μL；柱温35℃；流速1.0mL/min。2.如权利要求1所述的检测亚麻籽油中环肽含量的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：0～8min，30％A；8～20min，30％A→50％A；20～30min，65％A。3.如权利要求1所述的检测亚麻籽油中环肽含量的方法，其特征在于，所述检测波长为214nm。4.如权利要求1所述的检测亚麻籽油中环肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：仇超颖，葛佳佳，汪勇，邓凤桂，梁珊，
申请(专利权)人：广州利众生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44