一种枣花提取物及其抑菌应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枣花提取物及其抑菌应用，该提取物是将枣花粉碎后，按照料液比为1:2～1:4，用体积浓度为90％的乙醇水溶液浸泡2次，每次浸泡时间24～72h；将浸泡液在30～50℃下减压浓缩，得浸膏；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在25～40℃下减压浓缩，即得到枣花提取物。通过枣花提取物及单体化合物对选择的七种菌(Grampositive金黄色葡萄球菌ATCC 43300、金黄色葡萄球菌ATCC 33591、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、粪肠球菌ATCC 51299、屎肠球菌ATCC 35667和大肠杆菌ATCC 25922)的活性筛选，可以得知枣花提取物显示出了良好的抗菌活性，能够作为抗菌剂进行应用。

【技术实现步骤摘要】
一种枣花提取物及其抑菌应用
本专利技术涉及一种从植物花中提取的化学活性成分及其制备和用途，具体涉及一种枣花提取物及其制备和用途。
技术介绍
枣树为鼠李科枣属植物，原产于中国，在我国已有四千多年的种植历史，是我国的传统优势树种。枣属植物遍及热带亚热带和温带地区，全世界大约有170种，我国大约有14种。当前，我国枣树栽培面积高达150万公顷，年产量300万吨，占世界枣的总产量99％以上。枣树以其早果丰产、枣果营养丰富、抗干旱、耐贫瘠、生态效益及经济效益显著等特点，在我国占据十分重要的地位。枣树生长于海拔一千七百米以下的平原、丘陵或山区。枣树有刺，四月长叶，五月开花。枣果实，长圆形，营养丰富，果实味甜含有丰富的维生素C、P，可鲜食也可制成蜜枣、熏枣、酒枣及牙枣等蜜饯和果脯，还可以作枣泥、枣面、枣酒、枣醋等，为良好的食品工业原料。枣又供药用，有健脾、养胃、滋补、益血、强身之效，枣仁和根均可入药，枣仁可以安神。枣树花期较长，花期五月到七月，芳香多蜜，为良好的蜜源植物。由于枣属植物广泛的生理活性，对其化学成分的研究引起了人们的关注。而对枣属植物化学成分的研究，主要集中在果实，红枣中的营养成分包括有机营养成分(如粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、总糖等)、维生素(如VC、VP1、VB2、VP、VA、VE等)、矿质元素(P、K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn等)、生物活性成分(如有机酸、三萜类、黄酮类、腺苷、皂苷、生物碱类、甾醇、红枣多糖等)。红枣中的各类成分含量会因品种和产地不同而有差异。虽然枣树的果实红枣部分研究较多，而对枣树的枣花仅限于对其挥发性化学成分的研究，枣花中其它活性化学成分没有研究报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种枣花提取物，并为其提供一种新的应用。本专利技术的枣花提取物包括下述化合物1～13：其由下述方法提取得到：将枣花粉碎后，按照料液比为1:2～1:4，用体积浓度为90％的乙醇水溶液浸泡2次，每次浸泡时间24～72h；将浸泡液在30～50℃下减压浓缩，得浸膏；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在25～40℃下减压浓缩，得到枣花提取物。上述提取方法中，优选将枣花粉碎后，按照料液比为1:3，用体积浓度为90％的乙醇水溶液冷浸2次，每次冷浸时间48h；将冷浸液在35℃下减压浓缩，得浸膏；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在35℃下减压浓缩，得到枣花提取物。上述枣花提取物中的化合物1～13的分离方法为：将枣花提取物与硅胶按质量比为1:1～2拌样后装柱，进行硅胶柱层析，用氯仿/甲醇做洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:1、60:1、30:1、5:1、1:1、0:1，每个梯度收集两个柱体积；合并氯仿/甲醇体积比为30:1和3:1的洗脱液，命名为组分I，合并氯仿/甲醇体积比为1:1和0:1的洗脱液，命名为组分II；组分I依次通过FlashODSC18中压色谱柱层析、凝胶柱层析和制备液相色谱分离，分别得到化合物1～6；组分II依次通过FlashODSC18中压色谱柱层析、凝胶柱层析和制备液相色谱分离，分别得到化合物7～13。本专利技术枣花提取物作为抑菌材料的应用，所述的菌为Grampositive金黄色葡萄球菌ATCC43300、金黄色葡萄球菌ATCC33591、金黄色葡萄球菌ATCC29213、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC51299、屎肠球菌ATCC35667和大肠杆菌ATCC25922。本专利技术的有益效果如下：通过枣花提取物及单体化合物对选择的七种菌(Grampositive金黄色葡萄球菌ATCC43300、金黄色葡萄球菌ATCC33591、金黄色葡萄球菌ATCC29213、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC51299、屎肠球菌ATCC35667和大肠杆菌ATCC25922)的活性筛选，可以得知枣花提取物显示出了良好的抗菌活性，能够作为抗菌剂进行应用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例1将5kg枣花粉碎后，加入15kg体积浓度为90％的乙醇水溶液中冷浸，每次冷浸时间48h，共冷浸2次；将冷浸液在在35℃下减压浓缩，得浸膏约760g；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在35℃下减压浓缩，得到枣花提取物200g。将枣花提取物200g用300g硅胶拌样后装柱，进行硅胶柱层析，柱体积1.5L。用氯仿/甲醇做洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:1、60:1、30:1、5:1、1:1、0:1，每个梯度收集两个柱体积；所得各流出液通过硅胶薄层板分析检测，合并氯仿/甲醇体积比为30:1和3:1的洗脱液，命名为组分I，合并氯仿/甲醇体积比为1:1和0:1的洗脱液，命名为组分II；将25g组分I依次通过FlashODSC18中压色谱柱层析、凝胶柱层析和制备液相色谱分离，分别得到化合物1～6；将13g组分II依次通过FlashODSC18中压色谱柱层析、凝胶柱层析和制备液相色谱分离，分别得到化合物7～13。上述化合物1为3-酮-5,11-二烯赤桐甾醇，化合物2为朦胧木酸-3-O-顺式-对-香豆酰酯，化合物3为齐墩果酸，化合物4为朦胧木酸-3-O-反式-对-香豆酰酯，化合物5为白桦脂醇，化合物6为白桦脂酸，化合物7为山楂酸-3-O-反式-对-香豆酰酯，化合物8为常春藤皂苷元，化合物9为13-羟基白桦脂酸，化合物10为对甲氧基苯丙烯酸，化合物11为菜素，化合物12为芦丁，化合物13为3β-D-葡萄糖苷-5,11-二烯赤桐甾醇，其结构式如下所示：实施例2实施例1的枣花提取物的抗菌活性测试细菌：Grampositive金黄色葡萄球菌ATCC43300、金黄色葡萄球菌ATCC33591、金黄色葡萄球菌ATCC29213、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC51299、屎肠球菌ATCC35667和大肠杆菌ATCC25922。抗菌活性测试分为初筛和复筛。初筛浓度为100μg/mL。在100μg/mL浓度下有活性的样品进入复筛。复筛采用微量稀释法(NatProtoc,2008,3:1494-1500)。微量稀释法操作简便，所用培养基量少，可作大批量试验。具体操作方法如下：在超净工作台内，用移液枪取测试细菌液加入到96孔板中，每排第一个孔取198μL，其余孔取100μL。将待测样品用DMSO溶解配制成一定初始浓度的溶液。用移液枪取2μL待测样品加入第一个孔内，往后续孔依次做二倍稀释至第8个浓度梯度，第8孔取出100μL扔掉，每个浓度梯度做3个平行。加样稀释完毕后，各孔中均加入100μL测试细菌液，使每孔最终体积为200μL，用微量搅拌器震荡混匀。设定空白对照、阴性对照(DMSO)和阳性对照(万古霉素)。各测试板于37℃培养20h。观察最后一个透明孔对应的浓度，即最小抑菌浓度(MIC)，结果见表1。表1枣花提取物及枣花中化合物的抗菌活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枣花提取物，其特征在于该提取物包括下述化合物1～13：

【技术特征摘要】
1.一种枣花提取物，其特征在于该提取物包括下述化合物1～13：上述提取物由下述方法提取得到：将枣花粉碎后，按照料液比为1:2～1:4，用体积浓度为90％的乙醇水溶液浸泡2次，每次浸泡时间24～72h；将浸泡液在30～50℃下减压浓缩，得浸膏；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在25～40℃下减压浓缩，得到枣花提取物。2.根据权利要求1所述的枣花提取物，其特征在于所述提取物由下述方法提取得到：将枣花粉碎后，按照料液比为1:3，用体积浓度为90％的乙醇水溶液冷浸2次，每次冷浸时间48h；将冷浸液在35℃下减压浓缩，得浸膏；将浸膏用乙酸乙酯和水分散萃取，乙酸乙酯相在35℃下减压浓缩，得到枣花提取物。3.根据权利要求1或2所述的枣花提取物，其特征在于所述化合物1～13的分离方法为：将枣花提取物与硅胶按质量比为1:1～2拌样后装柱，进行硅胶柱层析，用氯仿/甲醇做洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆超，郭甜甜，白乃生，刘浪浪，李国林，刘甜，韩稳荣，卢英辉，周鑫，白吉祥，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61