本发明专利技术公开了AR‑V7可变剪切序列在抗去势抵抗性肿瘤中的应用，具体的可变剪切序列如SEQ ID NO.7所示；本发明专利技术同时公开了CYTOR可以调控AR‑V7的表达，提示CYTOR可以用于治疗雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移；本发明专利技术同时公开了可以调控AR‑V7表达的反义寡核苷酸，为肿瘤的治疗，尤其是雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移提供了新的治疗途径。
Application of AR-V7 Variable Shear Sequence in Anti-castration Resistant Tumors
The invention discloses the application of AR_V7 variable shear sequence in anti-castration resistant tumors, as shown in SEQ ID NO.7, and CYTOR can regulate the expression of AR_V7, suggesting that CYTOR can be used to treat castration resistance and recovery of androgen receptor-related tumors after hormone castration therapy. The present invention also discloses antisense oligonucleotides which can regulate the expression of AR_V7, and provides a new therapeutic approach for castration resistance and recurrence and metastasis of tumors, especially those related to androgen receptor after hormone castration therapy.
【技术实现步骤摘要】
AR-V7可变剪切序列在抗去势抵抗性肿瘤中的应用
本专利技术属于生物医学领域，涉及AR-V7可变剪切序列在抗去势抵抗性肿瘤中的应用。
技术介绍
前列腺癌是一种常见的恶性肿瘤，并且是造成男性肿瘤死亡的第二大病因。近年来，我国前列腺癌的发病率呈逐年快速上升趋势，2004年为5.8/10万人，到2009年已经上升为8/10万人。而发病率绝对值上升最快的是中国香港地区，从1999年的16.5/10万人上升到2010年的28.1/10万人。在台湾地区和上海，前列腺癌已位列男性常见肿瘤第5位和泌尿系统肿瘤第1位。由于我国对前列腺癌易感人群的筛查工作相对落后，导致晚期前列腺癌约占初次诊断的前列腺癌的70％；我国初诊为晚期前列腺癌的比例远高于欧美国家(20-30％)。雄激素剥夺治疗(Androgendeprivationtherapy,ADT)是对这部分患者的最主要治疗方法。尽管在ADT治疗初期前列腺癌被不同程度的控制，但经过大约18个月敏感期后，大部分患者的疾病逐渐且不可逆地进展为去势抵抗性前列腺癌。去势抵抗性前列腺癌(Castrationresistantprostatecancer,CRPC)是指患者经过ADT治疗后，血清睾酮水平达到去势水平(<50ng/dl或<1.7nmol/L)，但是疾病依然进展的前列腺癌。疾病进展的临床表现为影像学可见的肿瘤进展和/或前列腺特异性抗原(PSA)水平持续增高。后者应满足以下条件，即在PSA达2ng/mL以上，每间隔一周监测血清PSA水平，连续3次血清PSA升高，且比基础值升高50％以上。然而，由于CRPC发病机制至今不明，因而临床缺乏针对病因的精准治疗，这是当前泌尿外科学研究的难点和热点。AR信号通路在前列腺癌发展的各个阶段均起到了极为重要的作用，大量研究也表明AR信号通路的持续活化仍旧是CRPC进展的关键推动因素。虽然FDA批准的AR拮抗剂的恩杂鲁胺和抑制雄激素水平的阿比特龙两种药物能带来生存获益，但是仍有很多CRPC病人从开始就对这两种药物不敏感，而且几乎所有接受治疗的病人最终都会获得耐药，并且伴有PSA升高，提示了AR信号通路的再激活。AR剪切变异体(ARsplicevariants,AR-Vs)的出现异常激活了AR信号通路，从而出现了耐药。AR-Vs是发生截短突变的AR，缺少了AR的配体端(ligand-bindingdomain,LBD)，仍然保留AR的N端和DNA结合区，能够发挥AR的功能，在没有的雄激素或者恩杂鲁胺存在的情况下仍能够激活AR信号通路，使得前列腺癌患者在ADT治疗后进展为CRPC并且对恩杂鲁胺和阿比特龙耐药。AR-V7是AR-Vs中的一员，在CRPC病人中表达水平最高而且最为普遍。最近大量研究集中报道AR-V7的相关研究，揭示了AR-V7在促进CRPC进展中的作用以及作为治疗选择标记分子的重大意义。研究证明AR-V7的核定位及基因功能并不依赖于雄激素和AR全长的存在，而且AR-V7的高表达能够逆转ADT所抑制的雄激素激活的下游分子以及参与细胞周期进展的特殊分子信号，促进CRPC的生长和进展。因此，特异性抑制AR-V7可变剪切的靶向治疗十分必要。关于AR-V7可变剪切的特异性功能位点序列还未见报道，本专利技术通过基础生物实验数据研究该序列在AR-V7可变剪切中的关键作用，本专利技术的成果可以为AR-V7阳性去势抵抗性前列腺癌治疗提供新的靶点，恢复肿瘤的药物敏感性。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供一种AR-V7的特异性剪切功能位点以及该位点在癌症治疗中的应用。本专利技术的目的之二是提供一种可调控AR-V7的lncRNA及其在癌症治疗中的应用。本专利技术的目的之三在于提供与AR-V7相关的反义寡核苷酸及其在癌症治疗中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术的第一方面提供了一种AR-V7的特异性剪切位点，所述剪切位点的序列如SEQIDNO.7所示。本专利技术的第二方面提供了一种预测评估AR-V7可变剪切功能位点的方法，步骤如下：1)分析AR-V7mRNA与全长AR(AR-FL)的mRNA的结构，确定AR-V7mRNA的特有结构；2)使用HumanSplicingFinder在线预测评估网站的HSF3.1模块，选择剪切位点分析(Splicesiteanalysis)，输入基因名称AR，采用最大熵预测算法对AR-V7的特有结构进行分析；3)验证可变剪切的功能位点序列在ARpre-mRNA的特异性。进一步，步骤1)中将AR转录本AR-FL(NM_000044.4)及AR-V7转录本(NM_001348061.1)的核酸信息通过Graphics模块进行mRNA结构对比，FASTA模块进行mRNA序列对比，筛选到特有结构隐藏外显子3。进一步，本专利技术第二方面所述的方法，还包括对所得到的序列进一步验证，通过封闭该位点来判断是否影响AR-V7的可变剪切从而判断该序列是否是功能性剪切序列。本专利技术的第三方面提供了一种反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸选自：特异性结合CYTOR的反义寡核苷酸；或特异性结合如序列SEQIDNO.7所示的剪切位点的反义寡核苷酸。进一步，所述反义寡核苷酸包括修饰得到的反义寡核苷酸，所述修饰包括选自以下的一种或多种修饰：至少一种修饰的糖部分、至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的核苷酸及其组合。其中，所述一种或多种修饰包括选自以下至少一种修饰的糖部分：2'-O-甲氧基乙基修饰的糖部分、2'-甲氧基修饰的糖部分、2'-O-烷基修饰的糖部分、二环的糖部分及其组合；所述一种或多种修饰包括选自以下的至少一种修饰的核苷酸间键：硫代磷酸酯、2'-O甲氧基乙基(MOE)、2'-氟、膦酸烷基酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酯、羧甲基酯及其组合；所述一种或多种修饰包括选自以下的至少一种修饰的核苷酸：肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、阿拉伯糖-核酸(FANA)、类似物、衍生物及其组合。进一步，在本专利技术的具体实施方案中，特异性结合CYTOR的反义寡核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，特异性结合如序列SEQIDNO.7所示的剪切位点的反义寡核苷酸的序列如SEQIDNO.9所示。进一步，所述反义寡核苷酸为甲基化修饰的反义寡核苷酸。本专利技术的第四方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括封闭权利要求1所述位点的试剂。作为一种可选择的实施方式，所述试剂是反义寡核苷酸。作为优选的一种实施方式，所述反义寡核苷酸的序列如SEQIDNO.9所示。本专利技术的第五方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本专利技术第三方面所述的反义寡核苷酸。本专利技术的第六方面提供了如下任一项所述的应用：a.本专利技术第一方面所述的特异性剪切位点在制备治疗雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移药物的应用；b.本专利技术第一方面所述的特异性剪切位点在筛选治疗雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移候选药物中的应用；c.特异性结合AR-V7的CYTOR在制备治疗雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移药物中的应用；d.本专利技术第三方面所述的反义寡核苷酸在制备治疗肿瘤的药物中的应本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种AR‑V7的特异性剪切位点，其特征在于，所述剪切位点的序列如SEQ ID NO.7所示。
【技术特征摘要】
1.一种AR-V7的特异性剪切位点，其特征在于，所述剪切位点的序列如SEQIDNO.7所示。2.一种预测评估AR-V7可变剪切功能位点的方法，其特征在于，步骤如下：1)分析AR-V7mRNA与全长AR(AR-FL)的mRNA的结构，确定AR-V7mRNA的特有结构；2)使用HumanSplicingFinder在线预测评估网站的HSF3.1模块，选择剪切位点分析(Splicesiteanalysis)，输入基因名称AR，采用最大熵预测算法对AR-V7的特有结构进行分析；3)验证可变剪切的功能位点序列在ARpre-mRNA的特异性。3.一种反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸选自：特异性结合CYTOR的反义寡核苷酸；或特异性结合如序列SEQIDNO.7所示的剪切位点的反义寡核苷酸。4.根据权利要求3所述的反义寡核苷酸，其特征在于，特异性结合CYTOR的反义寡核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，特异性结合如序列SEQIDNO.7所示的剪切位点的反义寡核苷酸的序列如SEQIDNO.9所示。5.根据权利要求4所述的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸的核酸为甲基化修饰的核酸。6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括封闭权利要求1所述位点的试剂。7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求3-5任一项所述的反义寡核苷酸，和/或...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛远杰，尚芝群，于健鹏，冯睿，
申请(专利权)人：天津市泌尿外科研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12
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