The invention provides a method for establishing influenza virus infection cell model by using tree shrew primary cells, which includes the following steps: (1) culture of tree shrew primary cells: centrifugation of tree shrew primary cells after enzyme digestion treatment; cell culture by putting cells into animal cell culture medium; (2) infection induces tree shrew primary cells. Cells: The primary cells of tree shrews obtained in step (1) were washed with PBs to remove the animal cell culture medium, and then serum-free culture medium containing influenza virus A/PR/8/34 (H1N1) was added to culture the virus for 3 to 4 days. The establishment of influenza virus infection cell model by using tree shrew primary cells does not cause great individual differences. It also eliminates the steps and time needed to monitor and evaluate each animal in the establishment of animal model. Therefore, the present invention provides an economical, time-saving and uniform infected cell model for the study of drug inhibition against influenza virus.
【技术实现步骤摘要】
利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法
本专利技术属于动物细胞系领域,具体涉及建立流感病毒感染细胞模型的方法
技术介绍
实验动物树鼩,分类上属哺乳纲,有胎盘类,灵长目,树鼩科;分布在热带和亚热带,如我国云南、广西等。树鼩已被应用于多种病毒学研究,包括EB病毒、疱疹病毒、甲型肝炎病毒,乙型肝炎病毒,单纯疱疹病毒,登革病毒,HIV病毒,轮状病毒腺病毒、肝炎病毒以及呼吸道合胞病毒。此外,它作为一种体小、繁殖快、较价廉的灵长类动物,具有经济易行性的优势。2013年其全基因组首次由中国科学家发布,更显示了树鼩作为感染疾病动物模型巨大潜力。目前也有使用树鼩能作为流感病毒大动物实验模型的报道。然而,动物实验模型存在动物个体间差异;每次的研究都需要一批的动物,造价往往较大;体内模型对于机理的研究并没有细胞模型那么方便。因此,很有必要利用树鼩的原代细胞建立一种流感病毒感染细胞模型的方法,从而更方便准确的研究流感病毒的致病机制和分析评价药物对流感病毒抑制。而目前为止,尚未有关于利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法的报道。
技术实现思路
为了克服现有技术缺失,本专利技术提供了一种利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,以便更准确、快速、经济的研究流感病毒的致病机制和分析评价药物对流感病毒抑制。为了解决上述问题,本专利技术按以下技术方案予以实现的:一种利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,包括以下步骤:(1)树鼩原代细胞的培养:树鼩原代细胞在经过酶消化处理后,离心;将细胞放入动物细胞培养基中,进行细胞培养;(2)感染树鼩原代细胞:步骤(1)获得的树 ...
【技术保护点】
1.利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)树鼩原代细胞的培养:树鼩原代细胞在经过酶消化处理后,离心;将细胞放入动物细胞培养基中,进行细胞培养;(2)感染树鼩原代细胞:步骤(1)获得的树鼩原代细胞用PBS进行洗涤,去除所述动物细胞培养基;加入含有流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的无血清培养基,进行病毒培养3‑4天。
【技术特征摘要】
1.利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)树鼩原代细胞的培养:树鼩原代细胞在经过酶消化处理后,离心;将细胞放入动物细胞培养基中,进行细胞培养;(2)感染树鼩原代细胞:步骤(1)获得的树鼩原代细胞用PBS进行洗涤,去除所述动物细胞培养基;加入含有流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的无血清培养基,进行病毒培养3-4天。2.根据权利要求1所述的利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,其特征在于,所述树鼩原代细胞,包括树鼩气管原代细胞、树鼩肺原代细胞和树鼩肾髓质原代细胞中的至少一种。3.根据权利要求2所述的利用树鼩原代细胞建立流感病毒感染细胞模型的方法,其特征在于,所述酶消化处理包括以下步骤:将灌满酶解消化液的树鼩气管取出,浸泡于含300-500U/ml青链霉素的PBS,在温度为37℃条件下,消化22-26小时;和/或,将树鼩肺器官剪碎,加入酶解消化液,在温度为37℃条件下,消化44-52小时;和/或,除去树鼩肾器官的肾皮质层,留肾髓质层,并剪碎肾髓质层,加入酶解消化液,在温度为37℃...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨子峰,张荣平,夏雪山,江海明,李润峰,杨春光,
申请(专利权)人:广州医科大学附属第一医院,广州呼吸疾病研究所,昆明医科大学,昆明理工大学,
类型:发明
国别省市:广东,44
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