一种线性假多肽及其制备方法以及其在抗肿瘤药物中的应用技术

本发明专利技术公开了一种线性假多肽及其制备方法以及其在抗肿瘤药物中的应用。本发明专利技术线型假多肽包含了Loloatin C药核序列结构的生物等电体结构，即包含了Tyr、Pro、Trp和Phe的生物等电体结构，四个氨基酸残基为L‑构型或D‑构型。本发明专利技术所述线性假多肽采用固相合成法制备得到的，总收率为25～35％。本发明专利技术线性假多肽的制备方法具有反应条件温和、容易自动化、操作简便安全、产品纯度高、总收率高的优点，所制备的线性假多肽可以用于制备治疗恶性肿瘤药物，特别是用于制备治疗肝癌、直肠癌和乳腺癌的药物。

A Linear Pseudopolypeptide and Its Preparation and Application in Antineoplastic Drugs

The invention discloses a linear pseudopolypeptide and a preparation method thereof, as well as its application in antineoplastic drugs. The linear pseudo-polypeptide of the present invention contains the bio-isoelectric structure of Loloatin C drug nucleus sequence structure, that is, the bio-isoelectric structure of Tyr, Pro, Trp and He, and the four amino acid residues are L_configuration or D_configuration. The linear pseudo-polypeptide of the invention is prepared by solid-phase synthesis, and the total yield is 25-35%. The preparation method of the linear pseudo-polypeptide has the advantages of mild reaction conditions, easy automation, simple and safe operation, high product purity and high total yield. The prepared linear pseudo-polypeptide can be used to prepare drugs for treating malignant tumors, especially for preparing drugs for treating liver, rectal and breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种线性假多肽及其制备方法以及其在抗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于抗肿瘤肽领域，特别涉及一种线性假多肽及其制备方法以及其在抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
抗菌肽(Antimicrobialpeptides，AMPs)是由机体特定基因编码且在外界诱导下产生的，大量存在于动物、植物及微生物中，是自然界生物体内极其重要的防御体系。它们是一类具有生物学活性的小分子多肽，一般由10～100个氨基酸残基组成。抗菌肽大多具有两亲性并且带有一定量的正电荷(通常为+2～+9)，属于阳离子多肽(Theis,T.,Stahl,U.CellularandMolecularLifeSciences:CMLS2004,61,437-455)。世界上第一个被发现的抗菌肽是天蚕素(Cecropins)，是Boman等在1980年从诱导的惜古比天蚕蛹淋巴液中分离出的，随后人们从各种动植物以及微生物中发现并分离了多种具有抗菌活性的多肽，他们普遍具有抗菌谱广、抗菌效率高等特点，因此这类多肽物质被命名为“Antimicrobialpeptides”，中文名为“抗菌肽”。许多抗菌肽已被证明具有显著的靶向抗癌的能力，这类小分子多肽化合物可有效进行组织渗透并选择性地对肿瘤细胞进行杀灭，而对正常细胞则不产毒副作用，因此抗菌肽在抗肿瘤方面具有极大的开发潜力，为癌症的治疗提供了新的方向与机遇。研究表明，抗菌肽能选择性作用于癌细胞，主要原因在于正常细胞与癌细胞细胞膜之间的差异。癌细胞膜表面通常有许多带负电荷的分子，如氧糖基化的黏蛋白、硫酸乙酰肝素、磷脂酰丝氨酸等，而正常哺乳动物细胞的细胞膜主要成分是磷脂和甾醇这一类中性分子，因而带正电荷的抗菌肽可以与带负电荷的肿瘤细胞通过静电作用结合，从而达到选择性作用于肿瘤细胞的效果。另外，有研究发现，胆固醇含量的增加会延长Cecropins作用细胞膜并产生离子通道的过程，而真核细胞的细胞膜正好含有丰富的胆固醇，因此可以起到有效保护细胞膜的作用。此外，癌细胞表面有比正常细胞数量更多的微绒毛，这极大地增加了抗菌肽与肿瘤细胞之间相互作用的表面积，也就增加了两者之间相互作用的机会。Loloatins抗菌肽家族包含4个成员，即LoloatinA、B、C和D，它们是在实验室条件下由采集于巴布亚新几内亚南部海滩沿岸大堡礁上的海洋微生物的发酵液中分离出来的一类环十肽抗菌素。研究发现，该家族中的LoloatinC[结构式为cyclo-(-L-Val-L-Orn-L-Leu-D-Tyr-L-Pro-L-Trp-D-Phe-L-Asn-L-Asp-L-Trp)]不仅对革兰氏阳性菌(G+)表现出和tyrocidineC一致甚至更好的抗菌活性，还对革兰氏阴性菌(G-)Escherichiacoli表现出明显的抗菌活性(Gerard,J.M.,etal.J.Nat.Prod.1999,62,80-85)。Chen随后的研究发现LoloatinC的药核结构为-D-Tyr-Pro-Trp-D-Phe-，即该四肽序列结构对LoloatinC抑菌活性的发挥起着关键的作用(ChenH.PreparationandEvaluationoftheLoloatinsandTheirAnalogues.AnnArbor,Mich:UMI,2003)。研究结果表明，抗菌肽是通过破坏细菌细胞膜的完整性从而使得膜的穿透性增加而杀死细菌(Ghadiri,M.R.etal.,Nature,2001,412:452-455；Zasloff,M.,Nature,2002,415:389-395)。因此，利用计算机辅助药物设计技术，以LoloatinC的药核结构作为模板，设计具有更多正电性和α-螺旋结构的多肽，将是寻找具有更好抗肿瘤作用多肽的有效途径。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种线性假多肽。本专利技术的另一目的在于提供所述线性假多肽的制备方法。本专利技术还又一目的在于提供所述线性假多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种线性假多肽，所述线性假多肽包含LoloatinC的药核序列结构-A1-A2-A3-A4-的生物等电体结构；所述的A1为L-Phe(4-NH2)，D-Phe(4-NH2)，L-Tyr，D-Tyr，L-Tyr(3-Cl)和D-Tyr(3-Cl)中的一种；其中，L-Phe(4-NH2)、D-Phe(4-NH2)表示L-Phe或D-Phe的侧链苯环上的4位被-NH2取代；同理，L-Tyr(3-Cl)、D-Tyr(3-Cl)表示L-Tyr或D-Tyr的侧链苯环上的3位被Cl取代(4位是-OH)；所述的A2为L-Pro或D-Pro；所述的A3为L-Ala(4-Py)，D-Ala(4-Py)，L-Ala(2-Py)，D-Ala(2-Py)，L-Trp和D-Trp中的一种；其中，Py表示吡啶基(pyridyl)，L-Ala(4-Py)，D-Ala(4-Py)表示丙氨酸(L-Ala或D-Ala)侧链甲基上连接一个吡啶基，连接的位置是在吡啶的4位(吡啶中以N为第1位)；同理，L-Ala(2-Py)，D-Ala(2-Py)表示丙氨酸(L-Ala或D-Ala)侧链甲基上连接一个吡啶基，连接的位置是在吡啶的2位；所述的A4为L-Phe，D-Phe，L-Phg，D-Phg，L-Phe(4-F)和D-Phe(4-F)中的一种；其中，L-Phe(4-F)、D-Phe(4-F)表示L-Phe或D-Phe的侧链苯环上的4位被F取代。所述的假多肽分别在N-端和C-端进一步延伸，结构式为H-A1′-A1-A2-A3-A4-A4′-OH；所述的A1′为L-Asn或L-Asp；所述的A4′为L-Asn或L-Asp。所述的线性假多肽优选为选自如下任一序列：(1)H-Asp-D-Tyr-Pro-Ala(4-Py)-D-Phg-Asn-OH；(2)H-Asp-D-Tyr(3-Cl)-Pro-Trp-D-Phg-Asn-OH；(3)H-Asp-D-Tyr(3-Cl)-Pro-Ala(4-Py)-D-Phg-Asn-OH；(4)H-Asn-D-Phe(4-NH2)-Pro-Trp-D-Phe-Asn-OH；(5)H-Asn-D-Phe(4-NH2)-Pro-Ala(2-Py)-D-Phg-Asp-OH；(6)H-Asp-D-Tyr(3-Cl)-Pro-Trp-D-Phe-Asn-OH；(7)H-Asp-D-Tyr(3-Cl)-Pro-Ala(4-Py)-D-Phe(4-F)-Asn-OH。所述的线性假多肽的制备方法为采用固相多肽合成法，可以采用手工操作制备，也可以采用多肽合成仪制备，比如利用美国应用系统生物公司生产的Pioneer多肽合成仪制备；所述线性假多肽的合成为氨基酸的装配从C端到N端逐个进行，由人工控制或自动合成仪设定控制，具体合成步骤为：首先称取0.1mmol结合了第一个氨基酸Asp-OtBu侧链羧基的Rinkamide树脂，装柱，用20％体积比的二氯甲烷(DCM)二甲基甲酰胺(DMF)溶液溶胀30min，然后用30％体积比的哌啶二甲基甲酰胺溶液脱保护基(Fmoc)，DMF清洗3次。将9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸溶于三吡咯基膦本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种线性假多肽，其特征在于：所述线性假多肽包含Loloatin C的药核序列结构‑A1‑A2‑A3‑A4‑的生物等电体结构；所述的A1为L‑Phe(4‑NH2)，D‑Phe(4‑NH2)，L‑Tyr，D‑Tyr，L‑Tyr(3‑Cl)和D‑Tyr(3‑Cl)中的一种；所述的A2为L‑Pro或D‑Pro；所述的A3为L‑Ala(4‑Py)，D‑Ala(4‑Py)，L‑Ala(2‑Py)，D‑Ala(2‑Py)，L‑Trp和D‑Trp中的一种；所述的A4为L‑Phe，D‑Phe，L‑Phg，D‑Phg，L‑Phe(4‑F)和D‑Phe(4‑F)中的一种。

【技术特征摘要】
1.一种线性假多肽，其特征在于：所述线性假多肽包含LoloatinC的药核序列结构-A1-A2-A3-A4-的生物等电体结构；所述的A1为L-Phe(4-NH2)，D-Phe(4-NH2)，L-Tyr，D-Tyr，L-Tyr(3-Cl)和D-Tyr(3-Cl)中的一种；所述的A2为L-Pro或D-Pro；所述的A3为L-Ala(4-Py)，D-Ala(4-Py)，L-Ala(2-Py)，D-Ala(2-Py)，L-Trp和D-Trp中的一种；所述的A4为L-Phe，D-Phe，L-Phg，D-Phg，L...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈河如，刘杰，周帆，王怀玲，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44