一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法技术

本发明专利技术公开一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，属于天然活性成分提取分离技术领域。以白花蛇舌草为原料，首先运用单因素试验法探究原料粒径、提取温度、提取时间、液料比和提取压力对熊果酸（UA）和齐墩果酸（OA）提取量的影响，再通过曲面响应法确定最佳的条件。收集提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂工艺得到粗产品，最后，通过酸碱处理、大孔树脂吸附、旋转蒸发浓缩等技术得到熊果酸和齐墩果酸。本发明专利技术采用先进的亚临界水提取技术，具有提取时间短、效率高、环保无污染的优点，易于工业化生产。

A method for simultaneous extraction of ursolic acid and oleanolic acid from Hedyotis diffusa by subcritical water

The invention discloses a method for simultaneously extracting ursolic acid and oleanolic acid from Hedyotis diffusa by using subcritical water, belonging to the technical field of extraction and separation of natural active ingredients. Using Hedyotis diffusa as raw material, the effects of particle size, extraction temperature, extraction time, liquid-to-material ratio and extraction pressure on the extraction amount of ursolic acid (UA) and oleanolic acid (OA) were investigated by single factor test, and the optimal conditions were determined by surface response method. The crude products were obtained by rotary evaporation and degreasing of petroleum ether. Finally, ursolic acid and oleanolic acid were obtained by acid-base treatment, macroporous resin adsorption and rotary evaporation concentration. The invention adopts advanced subcritical water extraction technology, has the advantages of short extraction time, high efficiency, environmental protection and pollution-free, and is easy to industrialize production.

【技术实现步骤摘要】
一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法
本专利技术涉及一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，属于天然活性成分提取分离

技术介绍
白花蛇舌草别名白花十字草、蛇舌癀、鹤舌草，为茜草科白花蛇舌草Hedyotisdiffusa的全草，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛、抗菌消炎和抗肿瘤等功效。白花蛇舌草化学成分较为复杂，主要含三萜类、蒽醌、多糖、甾醇、黄酮等有机化合物，熊果酸和齐墩果酸是其中已知的主要活性物质，为同分异构体。药理学研究表面，熊果酸的药理作用主要表现在抗艾滋病、抗糖尿病、抗肿瘤以及抗氧化等方面（王鹏，张忠义，吴忠.熊果酸在药用植物中的分布及药理作用[J].中草药，2000，23（11）：717-722.），齐墩果酸具有护肝、解毒，抗肿瘤、抗氧化剂，抗胃溃疡，抗高血压，降血脂等多方面的临床药理作用（周志勇，袁丁.齐墩果酸药理作用研究进展[J].中国医院药学杂志，2008，288（23）：2031-2033.）。目前白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的提取方法主要是采用溶剂提取法、超声波法、回流提取法、微波提取法等。例如，王培明等人（王培明，张少伟，刘军海.白花蛇舌草中熊果酸微波辅助提取工艺研究[J].农产品加工业，2010（8）：36-40.）应用微波辅助提取技术，乙醇浓度为85%、微波功率为400W、微波时间为5min、液料比为22∶1、微波温度为50℃，在此条件下熊果酸提取量为4.088mg/g。王欢等人（王欢，黄嫣，李希，等.响应面法优化白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2015，21（20）：34-37.）利用回流提取技术，提取工艺为料液比1∶10.5，提取2次，每次92min，得到齐墩果酸和熊果酸平均提取量分别为0.4976mg/g和2.0364mg/g。虽然这些提取方法提取率较高，但回流提取法时间较长、微波提取法成本较高，很难实现工业化应用。为了避免现有提取方法的问题，本专利采用新兴的亚临界水提取技术。亚临界水又称高压热水，是指将水加热至沸点以上，临界点以下，并控制系统压力使水保持为液态。当水达到亚临界状态时，水极性降低，类似于有机溶剂，可以用来提取弱极性或非极性的成分。同文献报道的提取方法相比，亚临界水提取效率高、成本低且无污染，非常适用于工业化大规模生产。利用亚临界水提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸，是一种绿色萃取技术，目前尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种前处理简单，提取溶剂绿色环保，适应工业生产的亚临界水提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，最后对提取的熊果酸和齐墩果酸进行纯化，同时又能保持有效成分结构与抗氧化活性。本专利技术提供一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，包括以下步骤；（1）以白花蛇舌草为原料，粉碎并烘干，过筛得到不同粒径的原料粉末；（2）采用亚临界水法提取白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸，称取步骤（1）中所述原料粉末，按一定液料比加入去离子水，置于内含聚四氟乙烯的反应釜中，120℃～200℃下反应一段时间，反应结束后，迅速冷却反应液至室温，离心分离，收集沉淀，向沉淀中加入一定体积的95%乙醇，震荡混合一段时间，离心，收集上清液；（3）收集所述步骤（2）得到的提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂得到粗产品，将粗产品进行酸碱处理、大孔树脂吸附，再旋转蒸发浓缩，得到熊果酸和齐墩果酸。优选的，所述原料粒径的选择具体为：以原料粒径为变量，控制其他因素使其他因素的反应条件一致，用高效液相色谱法对其含量进行测定。优选的，所述提取温度的选择具体为：以提取温度为变量，控制其他因素使其他因素的反应条件一致，用高效液相色谱法对其含量进行测定。优选的，所述提取时间的选择具体为：以提取时间为变量，控制其他因素使其他因素的反应条件一致，用高效液相色谱法对其含量进行测定。优选的，所述液料比的选择具体为：以液料比为变量，控制其他因素使其他因素的反应条件一致，用高效液相色谱法对其含量进行测定。优选的，所述提取压力的选择具体为：以提取压力为变量，控制其他因素使其他因素的反应条件一致，用高效液相色谱法对其含量进行测定。优选的，所述应用中心组合试验建立数学模型具体为：运用Box-Benhnken复合模型，进行影响因素的水平试验，以白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸提取量为响应值，运用DesignExpert8.0.5b软件对试验所得的数据进行回归分析，得到熊果酸和齐墩果酸的提取量与所述影响因素之间的数学模型。优选的，所述数学模型为：YUA=5.94-0.35×A-0.12×B+0.37×C+0.17×A×B+0.068×A×C-8.235×10-3×B×C-0.73×A2-0.49×B2+0.072×C2；YOA=1.18-0.049×A-0.023×B+0.056×C+8.473×10-3×A×B+9.273×10-3×A×C-2.518×10-3×B×C-0.11×A2-0.070×B2+1.73×10-3×C2，其中，A为原料粒径，B为提取温度，C为液料比。优选的，提取白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸最佳的原料粒径为80目，提取温度为157℃，提取时间为20min，液料比为30∶1，提取压力为0.6MPa，熊果酸的提取量为6.45mg/g，齐墩果酸的提取量为1.23mg/g。本专利技术公开一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，属于天然活性成分提取分离
以白花蛇舌草为原料，运用单因素试验法探究原料粒径、提取温度、提取时间、液料比和提取压力对提取熊果酸（UA）和齐墩果酸（OA）的作用，以原料粒径、提取温度、液料比为影响因素，以UA和OA的提取量为响应值，确定最佳的原料粒径、提取温度和液料比，得到的熊果酸的提取量为6.45mg/g、齐墩果酸的提取量为1.23mg/g。最后收集提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂得到粗产品，再进行酸碱处理、大孔树脂吸附、旋转蒸发浓缩，得到熊果酸和齐墩果酸。本专利技术采用先进的亚临界水提取技术，具有提取时间短、效率高、环保无污染的优点，易于工业化生产。附图说明图1为本专利技术提出的一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法的工艺流程图。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步的详细描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。本专利技术实施例公开了一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，包括以下步骤：（1）以白花蛇舌草为原料，粉碎并烘干，过筛得到不同粒径的原料粉末；（2）采用亚临界水法提取白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸，称取步骤（1）中所述原料粉末，按一定液料比加入去离子水，置于内含聚四氟乙烯的反应釜中，120℃～200℃下反应一段时间，反应结束后，迅速冷却反应液至室温，离心分离，收集沉淀，向沉淀中加入一定体积的95%乙醇，震荡混合一段时间，离心，收集上清液。（3）收集所述步骤（2）得到的提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂得到粗产品，将粗产品进行酸碱处理、大孔树脂吸附，再旋转蒸发浓缩，得到熊果酸和齐墩果酸。作为优选方案，步骤（1）本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：（1）以白花蛇舌草为原料，粉碎并烘干，过筛得到不同粒径的原料粉末；（2）采用亚临界水法提取白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸，称取步骤（1）中所述原料粉末，按一定液料比加入去离子水，置于内含聚四氟乙烯的反应釜中，120 ℃～200 ℃下反应一段时间，反应结束后，迅速冷却反应液至室温，离心分离，收集沉淀，向沉淀中加入一定体积的95%乙醇，震荡混合一段时间，离心，收集上清液；（3）收集所述步骤（2）得到的提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂得到粗产品，将粗产品进行酸碱处理、大孔树脂吸附，再旋转蒸发浓缩，得到熊果酸和齐墩果酸。

【技术特征摘要】
1.一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：（1）以白花蛇舌草为原料，粉碎并烘干，过筛得到不同粒径的原料粉末；（2）采用亚临界水法提取白花蛇舌草中的熊果酸和齐墩果酸，称取步骤（1）中所述原料粉末，按一定液料比加入去离子水，置于内含聚四氟乙烯的反应釜中，120℃～200℃下反应一段时间，反应结束后，迅速冷却反应液至室温，离心分离，收集沉淀，向沉淀中加入一定体积的95%乙醇，震荡混合一段时间，离心，收集上清液；（3）收集所述步骤（2）得到的提取液，通过旋转蒸发、石油醚脱脂得到粗产品，将粗产品进行酸碱处理、大孔树脂吸附，再旋转蒸发浓缩，得到熊果酸和齐墩果酸。2.根据权利要求1所述的一种利用亚临界水同时提取白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的方法，其实验设计与优化方案如下：（1）进行单因素实验，依次改变亚...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷建都，肖尚贞，刘静，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11