一种检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法技术

本发明专利技术公开了一种检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法。该试纸条构成依次包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述的反应膜上包被有半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线；本发明专利技术以时间分辨荧光微球标记抗体，采用免疫层析技术，实现甲基苯丙胺的快速免疫分析。本发明专利技术还提供一种应用上述试纸条检测样品中甲基苯丙胺的方法。本发明专利技术的优点是灵敏度高，可准确定量，检测快速、操作方便，经济实用，能够实现对大批量的甲基苯丙胺样品进行快速检测和现场检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法
本专利技术涉及甲基苯丙胺的检测，具体是一种利用时间分辨荧光微球免疫层析技术定量检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法。
技术介绍
甲基苯丙胺，俗称“冰毒”，属于兴奋剂类精神药品，具有强烈的中枢神经兴奋作用，是国家严控的一类精神药品和麻醉药品。目前，国际上苯丙胺类物质的滥用呈不断上升趋势。专家预测，苯丙胺类兴奋剂将成为21世纪最广泛滥用的药物之一。随着与甲基苯丙胺相关的刑事案件逐年上升和国家对甲基苯丙胺管理的日趋严格，本领域对甲基苯丙胺和滥用毒品者生物标本中甲基苯丙胺的检测提出的更高的要求。目前针对甲基苯丙胺的检测和监控方法主要包括高效液相色谱、气相色谱、液质或气质连用等。这些色谱方法具有很好的灵敏度和特异性，但操作复杂，通量不高，耗时较长，仪器设备昂贵。酶联免疫吸附测定(ELISA)以及胶体金免疫层析法是目前国际公认的主流技术，这两种方法具有检测速度快，价格便宜，操作简单等优点。但ELISA检测仍需专业人员，且需要较长时间显示结果；胶体金法能对甲基苯丙胺进行定性分析，操作简单，检测时间较短，但灵敏度低、人为因素干扰较大。综上所述，目前甲基苯丙胺的检测技术尚不成熟，开发一种灵敏度高、操作简便并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有的检测甲基苯丙胺的方法存在的操作复杂、耗时较长，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低的检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法，以实现对大批量的甲基苯丙胺样品进行快速检测和现场监控。为了实现本专利技术的目的，本专利技术的一种检测甲基苯丙胺的试纸条采用以下技术方案：一种检测甲基苯丙胺的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述的结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述反应膜上包被有半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线。所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫均粘贴在底板上且中任意相邻两个沿上下方向部分叠加，结合物释放垫的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫下。所述时间分辨荧光微球是直径为100nm-500nm的稀土离子作为标记物的荧光微球，其表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。所述时间分辨荧光微球的激发波长为300-400nm，发射波长为500-700nm。所述样品吸收垫为玻璃纤维素膜。所述结合物释放垫为玻璃纤维或聚酯材料。所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。所述底板为PVC底板或其他硬质不吸水的材料。所述吸水垫为吸水纸。本专利技术的一种制备上述检测甲基苯丙胺的试纸条的方法，包括以下步骤：1）用荧光微球标记甲基苯丙胺抗体，并将其喷涂在结合物释放垫上，以制备喷涂有甲基苯丙胺单克隆抗体-荧光微球标记物的结合物释放垫；2）将半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂于反应膜上作为检测线（T）和质控线（C）；3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。在步骤1）中取出荧光微球进行活化，然后加入甲基苯丙胺抗体进行共价偶联，结束后加入封闭缓冲液进行封闭，离心洗涤后4℃保存备用。在步骤1）中的结合物释放垫用含0.2-1%牛血清白蛋白（质量分数）、pH7.4的0.02-0.05mol/LTris-HCl（含0.1-5%的海藻糖和0.02-0.1%Tween-20）缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h，置于干燥环境中保存备用。本专利技术的一种应用方法上述检测甲基苯丙胺的试纸条检测样品中甲基苯丙胺的方法，包括如下步骤：（1）将试纸条和待测样品恢复至室温。（2）开启免疫荧光分析仪，插入对应ID卡，读取标准曲线。（3）向试纸条的样品孔中加入待测样本60-120μL，反应5-10min后，将检测卡插入免疫荧光分析仪。（4）截留在检测线和质控线的荧光微球在最佳激发光下，发出强烈的荧光条带；（5）采用免疫层析分析仪读取检测线和质控线的荧光强度，并给出T/C值，分析仪可通过内置的标准曲线计算出样品中甲基苯丙胺的浓度，并判断阴阳性。本专利技术与现有技术相比，有如下优点：（1）本专利技术能够准确定量待测样本中的甲基苯丙胺的含量。（2）本专利技术采用独立的质控线和检测线的反应系统，互不干扰和影响，并采用T/C值的方式进行标定，保证了测试结果的准确性。（3）本专利技术采用时间分辨荧光微球，由于其Stokes位移大(＞150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高5～6个数量级，能够有效地消除各种非特异性荧光的干扰，提高检测的灵敏度。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、不受检测设备限制、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术试纸条检测甲基苯丙胺的方法，简便、快速、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。进一步地，结合物释放垫的1/3-1/2被样品吸收垫覆盖可以延长检测结果观察时间，可使样品吸收垫将检测液体充分吸收并与抗体充分反应，从而减少误差。附图说明图1是是本专利技术的一种检测甲基苯丙胺的试纸条的结构示意图；图2是检测卡的结构示意图；图3是试纸条样品检测结果示意图；图4是本专利技术试纸条的标准曲线；图5是唾液采集装置结构示意图；1、样品吸收垫；2、结合物释放垫；3、反应膜；4、吸水垫；5、底板；6、检测线；7、质控线；8、检测窗；9、样品孔；10、采集槽盖；11、采集槽；12、采集管；13、采集管盖；14、最低收集线。具体实施方式下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用来限制本专利技术的范围。另外，本领域的技术人员在所附权利要求书限定的范围内可能会对本专利技术进行各种改动或修饰，这些改动或修饰同样应落入专利技术的保护范围。本专利技术的一种检测甲基苯丙胺的试纸条，如图1所示，包括样品吸收垫1、结合物释放垫2、反应膜3、吸水垫4和底板5；结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；反应膜上包被有半抗原-载体蛋白偶联物的检测线6和羊抗鼠二抗的质控线7。样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫均粘贴在底板上且中任意相邻两个沿上下方向部分叠加，结合物释放垫的1/3被覆盖于样品吸收垫下，结合物释放垫的1/3被样品吸收垫覆盖可以延长检测结果观察时间，可使样品吸收垫将检测液体充分吸收并与抗体充分反应，从而减少误差，在其他实施例中，也可以结合物释放垫的1/2被覆盖于样品吸收垫下。时间分辨荧光微球是直径为100nm-500nm的稀土离子作为标记物的荧光微球，其表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。时间分辨荧光微球的激发波长为300-400nm，发射波长为500-700nm。样品吸收垫为玻璃纤维素膜。结合物释放垫为玻璃纤维或聚酯材料。反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。底板为PVC底板或其他硬质不吸水的材料。吸水垫为吸水纸。该检测甲基苯丙胺的试纸条的制备方法主要包括以下步骤：1）用荧光微球标记甲基苯丙胺抗体，并将其喷涂在结合物释放垫上，以制备喷涂有荧光微球标记的甲基苯丙胺抗体的结合物释放垫；2）将半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂于反应膜上作为检测线（T）和质控线（C），以制备包被有甲基苯丙胺半抗原-载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测甲基苯丙胺的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述反应膜上包被有半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线。

【技术特征摘要】
1.一种检测甲基苯丙胺的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述反应膜上包被有半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫均粘贴在底板上且中任意相邻两个沿上下方向部分叠加，结合物释放垫的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫下。3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球是直径为100nm-500nm的稀土离子作为标记物的荧光微球，其表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的激发波长为300-400nm，发射波长为500-700nm。5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述结合物释放垫为玻璃纤维或聚酯材料。6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。7.一种制备权利要求1-6任一项所述试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）用荧光微球标记甲基苯丙胺抗体，并将其喷涂在结合物释放垫上，以制备喷涂有甲基苯丙胺单克隆抗体-荧光微球标记物的结合物释放垫；2）将半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾嘉，张振兴，吕小翠，赵琳，周亮，崔浩哲，张鹏，高翔，
申请(专利权)人：郑州左安检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41