一种检测大麻二酚的试纸条及其制备方法和应用技术

一种检测大麻二酚的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，结合物释放垫上喷涂有胶体金标记的大麻二酚特异性抗体，反应膜上固定有检测线与质控线，检测线包被有大麻二酚半抗原

【技术实现步骤摘要】
一种检测大麻二酚的试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及试纸条的制备与应用，具体涉及一种用于检测大麻二酚的试纸条及其制备方法和应用，可定性检测工业大麻中大麻二酚。

技术介绍

[0002]大麻二酚即CBD，是一种从大麻中提取的植物大麻素，缺乏精神活性，具有镇痛、抗炎、抗肿瘤和化学预防活性。大麻二酚具有阻断某些多酚对人体神经系统的不利影响，并且具有阻断乳腺癌转移、治疗癫痫、抗类风湿关节炎、抗失眠等一系列生理活性功能，对治疗多发性硬化症具有良好的效果。
[0003]工业大麻是指四氢大麻酚(THC)含量低于0.3%的大麻，是大麻科(Cannabaceae)大麻属(Cannabis)一年生草本植物。工业大麻花叶提取物大麻二酚（CBD）具有广阔的市场前景， 工业大麻中大麻二酚含量的测定则有助于对工业大麻种植过程中CBD含量的监控以及工业大麻品种的优化。
[0004]目前常用的大麻二酚检测方法主要是仪器方法，如高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法，采用这些分析方法不仅需要昂贵的仪器和专业的技术人员，样品前处理过程复杂、周期长、成本高，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。基于抗原抗体特异性识别的免疫分析方法可以定性定量检测样品中的大麻二酚含量。
[0005]本专利技术应用胶体金免疫层析法，测定工业大麻中大麻二酚的含量，具有检测限低、特异性强、操作简便、检测速度快、检测成本低，非常容易推广等优点。而目前现有技术中未见有关于检测大麻二酚的胶体金试纸条的相关报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种能够检测工业大麻中大麻二酚的试纸条及其制备方法，并提供一种快速、简单、高效的适用于大批量样品的定性检测方法。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种检测大麻二酚的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中：结合物释放垫上喷涂胶体金标记的大麻二酚特异性抗体，反应膜上固定有检测线与质控线，检测线包被有大麻二酚半抗原
‑
载体蛋白偶联物，质控线包被有山羊抗小鼠二抗；大麻二酚特异性抗体抗体是以大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联物作为免疫原获得，大麻二酚半抗原由以下方法制备而成：由3,5
‑
二甲氧基苯甲醛与三乙基
‑4‑
磷化物反应生成（2E，4E）
‑5‑
（3,5
‑
二甲氧基苯基）
‑
2,4
‑
戊二烯酸乙酯，随后经PdC/H2还原，HBr/HoAc脱甲基和皂化反应得到5
‑
（3,5
‑
二羟苯基）戊酸，最后再与(1S,4R)
‑1‑
甲基
‑4‑
(1
‑
甲基乙烯基)
‑2‑
环己烯
‑1‑
醇反应得到。具体反应过程见图3所述大麻二酚偶联抗原是由大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或甲状腺蛋白。
[0008]所述大麻二酚特异性抗体是以大麻二酚偶联抗原作为免疫原制备获得，所述大麻
二酚特异性抗体可为大麻二酚单克隆抗体或大麻二酚多克隆抗体，其中优选大麻二酚单克隆抗体。
[0009]所述山羊抗小鼠抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。
[0010]所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。
[0011]所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃纤维或聚酯纤维；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
[0012]本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：1）制备喷涂有胶体金标记的大麻二酚特异性抗体的结合物释放垫；2）制备具有包被有大麻二酚半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有山羊抗小鼠二抗的质控线的反应膜。
[0013]3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。
[0014]具体步骤包括：1）半抗原制备：3,5
‑
二甲氧基苯甲醛与三乙基
‑4‑
磷化物反应生成（2E，4E）
‑5‑
（3,5
‑
二甲氧基苯基）
‑
2,4
‑
戊二烯酸乙酯，随后经PdC/H2还原，HBr/HoAc脱甲基和皂化反应得到5
‑
（3,5
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二羟苯基）戊酸，最后再与(1S,4R)
‑1‑
甲基
‑4‑
(1
‑
甲基乙烯基)
‑2‑
环己烯
‑1‑
醇反应得到大麻二酚半抗原；2）将大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联，得到大麻二酚半抗原
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载体蛋白偶联物；3）用大麻二酚半抗原
‑
载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到大麻二酚杂交瘤细胞株；4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到山羊抗小鼠二抗；5）用氯金酸与柠檬酸三钠反应制备胶体金；6）将步骤3）制备的大麻二酚单克隆抗体加入步骤5）制备的胶体金中，得到胶体金标记的大麻二酚单克隆抗体；7）将胶体金标记的大麻二酚单克隆抗体喷涂在结合物释放垫上，37℃烘12h后取出，置于干燥环境中保存备用；8）将大麻二酚半抗原
‑
载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将山羊抗小鼠二抗包被在反应膜上构成质控线；9）将样品吸收垫用含0.2%Tween20、0.5%PVP K30、0.5%牛血清白蛋白、pH为7.4、0.02mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干24h，置于干燥环境中保存备用；10）在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成4mm宽的小条，放入干燥剂，置于铝箔袋中密封，4~30℃条件下可保存12个月。
[0015]本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测工业大麻中大麻二酚的方法，它包括步骤：（1）将待测样本进行前处理，得到待测样本溶液；（2）用试纸条进行检测；
（3）分析检测结果。
[0016]本专利技术的大麻二酚快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将胶体金标记的大麻二酚抗体固定于结合物释放垫上，样品中的大麻二酚在流动过程中，与结合物释放垫上的胶体金标记的大麻二酚单克隆抗体结合，形成大麻二酚
‑
抗体
‑
胶体金标记物。样本中的大麻二酚与反应膜检测线上的大麻二酚半抗原
‑
载体蛋白偶联物竞争结合胶体金标记的大麻二酚单克隆抗体，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中大麻二酚含量是否超过设定阈值。
[0017]检测结果的判断如图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测大麻二酚的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：结合物释放垫上喷涂胶体金标记的大麻二酚特异性抗体，反应膜上固定有检测线与质控线，检测线包被有大麻二酚半抗原
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载体蛋白偶联物，质控线包被有山羊抗小鼠二抗；大麻二酚特异性抗体抗体是以大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联物作为免疫原获得，大麻二酚半抗原由以下方法制备而成：由3,5
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二甲氧基苯甲醛与三乙基
‑4‑
磷化物反应生成（2E，4E）
‑5‑
（3,5
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二甲氧基苯基）
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2,4
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戊二烯酸乙酯，随后经PdC/H2还原，HBr/HoAc脱甲基和皂化反应得到5
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（3,5
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二羟苯基）戊酸，最后再与(1S,4R)
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甲基
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甲基乙烯基)
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环己烯
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醇反应得到。2.根据权利要求1所述的检测大麻二酚的试纸条，其特征在于：制备大麻二酚半抗原的具体反应过程如下：。3. 根据权利要求1 所述的试纸条，其特征在于：所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽丽，夏静雪，吕小翠，纪元，石小青，贾嘉，赵琳，孟二娟，崔浩哲，袁利杰，
申请(专利权)人：郑州左安检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：