一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法制造技术

一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法，属于免疫分析技术领域。本发明专利技术以纯化兔抗AdC68抗体为包被抗体，纯化重组ADC68GFP为标准品，HRP酶标记的山羊抗腺病毒HEXON抗体为酶标抗体，含2%羊血清的PBST为样品稀释液，以双抗体夹心法检测黑猩猩腺病毒AdC68抗原、病毒蛋白、滴度、病毒颗粒等。该方法具有很高的特异性、灵敏度和精密度，与常用的紫外法测病毒颗粒和蚀斑法测病毒滴度相比，其适用性更广，适合在重组黑猩猩腺病毒纯化工艺过程中的在线检测。通过该方法能够在AdC68制备过程中快速估算病毒量，以指导上游病毒培养和下游纯化工艺。

【技术实现步骤摘要】
一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法
一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法，属于免疫分析

技术介绍
由于腺病毒具有宿主范围广、高转基因表达能力的特点，目前有高达300种人用治疗或者预防性重组腺病毒药物正用于临床试验，广泛应用的腺病毒载体是人血清型腺病毒AdHu2和AdHu5型。但由于人群中普遍存在针对常见的人血清型腺病毒的中和抗体，削弱了相应腺病毒载体诱导的免疫反应，阻碍了这些载体在临床上的应用。为避免人群中预存抗体对腺病毒载体疫苗免疫或治疗作用的影响，一批从其他种群来源的型别被越来越多的应用于人类疫苗的研究中，其中就有黑猩猩腺病毒载体AdC68。黑猩猩腺病毒与其他腺病毒一样，都是先在HEK293细胞或者PER.C6细胞中培养，经过破碎细胞释放病毒和纯化步骤，获得纯化的病毒。本专利技术采用双抗体ELISA法，建立起快速估算黑猩猩腺病毒AdC68的方法。该方法有很高的特异性、灵敏度和精密度，与常用的紫外法测病毒颗粒和蚀斑法测病毒滴度相比，其适用性更广，能够测定抗原、滴度、病毒颗粒、蛋白含量等，适合在重组黑猩猩腺病毒纯化工艺过程中的在线检测。专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法，其主要步骤特征为：（1）包被抗体：纯化抗体用包被缓冲液（碳酸钠溶液）稀释，最佳包被浓度为1：50，每孔100ul，4℃过夜；（2）封闭：洗涤后，用PBST（含0.1%吐温20的PBS）配制2% BSA，每孔200ul，37℃封闭2hr；（3）捕获抗原：标准参考品和待测定样品用含2%羊血清PBST稀释，加样量为100ul，37℃孵育1hr；（3）加入酶标抗体：洗涤后，加HRP标记的羊抗腺病毒HEXON（购自Invitrogen），使用浓度为1：500，每孔100ul，37℃孵育1hr；（4）显色：洗涤后，用含0.01%TMB的显色液100...

【技术特征摘要】
1.一种检测黑猩猩腺病毒AdC68的双抗体夹心酶联免疫法，其主要步骤特征为：（1）包被抗体：纯化抗体用包被缓冲液（碳酸钠溶液）稀释，最佳包被浓度为1：50，每孔100ul，4℃过夜；（2）封闭：洗涤后，用PBST（含0.1%吐温20的PBS）配制2%BSA，每孔200ul，37℃封闭2hr；（3）捕获抗原：标准参考品和待测定样品用含2%羊血清PBST稀释，加样量为100ul，37℃孵育1hr；（3）加入酶标抗体：洗涤后，加HRP标记的羊抗腺病毒HEXON（购自Invitrogen），使用浓度为1：500，每孔100ul，37℃孵育1hr；（4）显色：洗涤后，用含0.01%TMB的显色液100ul，室温避光显色30min；（5）读数:加每孔50ul2MH2SO4溶液终止，450/630nm波长测定吸收值。2.如权利要求1所述，标准参考品是经纯化处理过的非复制型黑猩猩腺病毒68型（AdC68GFP），制备为如下步骤：（1）将非复制型黑猩猩腺病毒68型病毒以MOI1~10的比例，接种静置培养的H...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宁，吴冠军，石慧颖，
申请(专利权)人：天津津斯特生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：天津,12