一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法。本发明专利技术方法包括：以四种免疫原(A、B、E和F型肉毒毒素重组Hc蛋白)分别免疫动物，制备得到四种单价肉毒抗毒素；将所述四种单价肉毒抗毒素混合后制备得到A、B、E、F型四价肉毒抗毒素。本发明专利技术建立了肉毒毒素各型重组Hc免疫原免疫马以制备肉毒毒素治疗性中和抗体的新技术方案和中试工艺，通过精制工艺制备了高纯度、高效价的四价肉毒抗毒素。解决了不用类毒素作为免疫原制备马抗肉毒毒素治疗性抗体这个关键问题，提高了抗毒素的中和效价和产品的质量。本发明专利技术所制备的四价肉毒抗毒素可全面治疗各型肉毒素中毒。

【技术实现步骤摘要】
一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法
本专利技术属于生物制药领域，涉及一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法。
技术介绍
肉毒毒素是肉毒梭菌产生的外毒素，是目前已知最毒的蛋白质，分为七种血清型(A-G)，其中自然存在的A、B、E和F型毒素能够造成人类中毒，C、D型则常引起动物、禽类中毒，G型引起人类中毒的报道较少。肉毒毒素中毒在人群中发病机率小，但其毒性大，致死率高，对公共卫生安全危害极大，必须引起人们的高度重视。从灵长类动物试验结果推定体重为70千克人肉毒毒素中毒的半致死剂量静脉或肌肉注射时为0.09-0.15μg，吸入时为0.7-0.9μg，口服时为70μg。人类肉毒中毒有5种类型：1)食物性肉毒中毒，这类肉毒中毒一般是食物加工过程中被肉毒梭菌的芽胞污染，在厌氧的条件下细菌繁殖并产生毒素，人们食用了被毒素污染的食物而引起食物中毒，往往是集体中毒，病情凶险，属公共卫生突发事件，在世界各国时有发生，如2006年3月14日在泰国暴发了163人集体A型肉毒中毒的疫情；2)婴儿肉毒中毒，由于新生儿正常肠道菌群缺乏，其食入的肉毒梭菌芽孢可以萌发、繁殖、产生毒素，从而引起婴儿中毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法，包括如下步骤：(a)以四种免疫原分别免疫动物，制备得到四种单价肉毒抗毒素；所述四种免疫原分别为A型肉毒毒素重组Hc蛋白、B型肉毒毒素重组Hc蛋白、E型肉毒毒素重组Hc蛋白和F型肉毒毒素重组Hc蛋白；所述四种单价肉毒抗毒素分别为A型肉毒抗毒素、B型肉毒抗毒素、E型肉毒抗毒素和F型肉毒抗毒素；(b)将所述四种单价肉毒抗毒素混合后制备得到A、B、E、F型四价肉毒抗毒素。

【技术特征摘要】
1.一种制备A、B、E、F型四价肉毒抗毒素的方法，包括如下步骤：(a)以四种免疫原分别免疫动物，制备得到四种单价肉毒抗毒素；所述四种免疫原分别为A型肉毒毒素重组Hc蛋白、B型肉毒毒素重组Hc蛋白、E型肉毒毒素重组Hc蛋白和F型肉毒毒素重组Hc蛋白；所述四种单价肉毒抗毒素分别为A型肉毒抗毒素、B型肉毒抗毒素、E型肉毒抗毒素和F型肉毒抗毒素；(b)将所述四种单价肉毒抗毒素混合后制备得到A、B、E、F型四价肉毒抗毒素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，在对所述动物进行免疫后还包括如下步骤：取所述动物的免疫血浆，然后用胃蛋白酶进行消化处理，得到分别抗A、B、E、F型四种肉毒毒素的四种免疫球蛋白F(ab′)2抗体原液，即为所述四种单价肉毒抗毒素。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述动物为马。4.根据权利要求3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，对所述动物进行免疫为多次免疫，初免时免疫原用量为2mg每匹马，之后的加强免疫逐渐增加免疫原用量。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：进行所述初免时采用弗氏完全佐剂，进行所述加强免疫时采用弗氏不完全佐剂。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：余云舟，师丹阳，杨志新，陆建昇，王荣，周晓巍，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11